一种二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法

1.本发明涉及一种二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，属于昆虫人工饲养技术领域。


背景技术：

2.据发明人所知，二化螟chilo suppressalis(walker)属鳞翅目，螟蛾科，是一种危害水稻生产的多食性经济害虫，分布于亚洲、中东和南欧地区，尤以危害中国长江流域及以南稻区为重，由于杂交稻的推广和耕作制度的改革，二化螟的发生量逐年增加，它的幼虫通过钻蛀取食水稻茎叶，造成严重减产。二化螟可以在水稻的各生长期造成危害。在水稻分孽期，二化螟幼虫会蛀蚀水稻幼苗，使水稻苗枯萎；在水稻孕穗期和抽穗期，二化螟会蛀蚀水稻茎秆,使水稻孕穗失败,出现枯孕穗和白穗；在水稻灌浆期和乳熟期，二化螟幼虫蛀蚀水稻茎秆，造成水稻无法正常灌浆，出现半枯穗和虫伤株，使瘪粒增多。还可以危害茭白、甘蔗、高粱、玉米、小麦、粟、慈姑、蚕豆、油菜、稗、游草等。据统计，中国二化螟年发生面积为1400万公顷次，年造成经济损失达115亿元。目前二化螟的防治主要依靠化学农药控制其爆发危害，但二化螟已对多种常用杀虫剂产生抗性，导致用药量和用药次数不断增加，增加防治成本，对环境造成治理压力。在针对二化螟开展防治研究并制订二化螟治理策略的过程中，二化螟室内稳定种群和规模化的人工饲养可为开展二化螟综合防治，如抗药性监测及机制研究、药剂筛选、性信息素、转基因抗虫水稻、寄生蜂等提供特定时间和特定龄期稳定虫源，因此，二化螟人工饲养方法的改进，将推动二化螟的防治。
3.自上世纪70年代以来，国内外相继开展二化螟人工饲养技术的研究。二化螟人工饲养技术分为天然饲料饲养和人工饲料饲养两种。
4.天然饲料饲养以水稻种苗或稻茎饲养法使用范围较广，在此基础上发展出茭白、荸荠等饲养法。现有的天然饲料饲养技术中，以茭白、荸荠和水稻作为天然饲料，分析了三种天然饲料对二化螟生长发育和繁殖力的影响，喂食这三种天然饲料，二化螟均可完成世代发育和繁殖(孟凤霞，吴孔明，高希武.利用茭白、荸荠及水稻饲养二化螟的技术研究.昆虫知识.2003，40(5)：469-472)，然而，受饲养条件限制，三种天然饲料的使用会受到季节限制，无法持续为二化螟提供充足饲料。
5.天然饲料除了作为二化螟食物来源，还为二化螟提供栖息生境，受限于之前饲料防腐技术，用于饲养二化螟的寄主植物容易腐烂变质或发霉，在饲养过程中需要及时更换腐烂变质或发霉的寄主植物，腐烂变质或发霉的寄主植物，会导致幼虫营养不良、感染病菌而死亡，减小二化螟种群基数，不利于实现规模化饲养；天然饲料饲养过程中还会出现二化螟数目及性别不均衡，生长进度不一致等问题(尚稚珍，王银淑，邹永华.二化螟饲养方法的研究.昆虫学报.1979，22(2)：164-167；陆玉荣，苏建坤，吉春明，刘琴，张春梅，刘怀阿.水稻二化螟的室内饲养方法初探.安徽农业科学.2003，31(2)：270-271；郑福山，强承魁，董红霞，沈媛.二化螟的采集与室内饲养方法.安徽农业科学.2009，37(17)：7837-7838)。
6.人工饲料饲养二化螟技术开始于石井饲料和釜野饲料研制。二化螟的人工饲料相
继进行研究，1984年通过二化螟实用化人工饲料的初步研究，一定程度上解决了二化螟试虫虫源需求问题，但此饲料成分单一，不能满足二化螟世代循化；饲料容易腐败，更换饲料频次多。在此研究基础上，二化螟的人工饲料进一步优化，二化螟的存活率、化蛹率和羽化率均有提高，但二化螟生长速率慢且不一致，影响二化螟规模化饲养(胡阳，郑永利，曹国连，傅强.利用半人工饲料大规模简便化饲养二化螟.中国水稻科学.2013，27(5)：535-538；刘慧敏，李闪红，王满囷，张国安.二化螟人工饲料关键因子的优化及其优化配方的饲养效果.昆虫知识.2008，45(2)：310-314；李波，韩兰芝，彭于发.二化螟人工饲养技术.应用昆虫学报.2015，52(2)：498-503)。
7.人工饲料不能代替天然饲料的栖息生境，用人工饲料饲养的二化螟与天然饲料饲养的存在区别，会致使试验结果存在偏差。人工饲料的原材料获取相对不易，饲料成本提高；配制的环节繁琐，需要饲料处理仪器，人力成本较高；人工饲料虽已进行防腐处理，但还需低温冷藏，增加了设备成本。
8.经检索发现，申请号cn201910423574.2、申请公布号cn110024751a的发明专利申请公开了一种二化螟饲养装置及饲养方法，虽然其使用天然饲料饲养二化螟，但是存在装置制作复杂，操作繁琐等不利之处。申请号cn201510086108.1、申请公布号cn104604814a的发明专利申请公开了高效饲养二化螟的方法，虽然其简化了饲养装置，但是仍然存在操作复杂程度和饲养规模具有一定局限性等不利之处。
9.申请号cn201210068466.6、申请公布号cn102578051a的发明专利申请公开了一种室内人工饲养二化螟的方法，主要使用实验室常用的小号自封袋作为二化螟卵床，不仅材料获得相当简便，而且在收集卵块的具体操作上更为简化，同时使用20x15x15(cm)大小的塑料盒作为容器，整个产卵装置的占用空间也比使用稻苗时小。虽然该技术方案采用稻苗为天然饲料，但是并没有给出克服稻苗易腐烂变质或发霉的处理手段，也没有给出克服二化螟发育进度不一致的处理手段，更为重要的是，其并未关注该如何实现二化螟的规模化饲养，而是专注于简化饲养过程，仅凭该技术方案难以实现二化螟饲养规模化，从而无法提供充足的二化螟种群数量。
10.申请号cn201911073784.x、申请公布号cn110604102a的发明专利申请公开了一种二化螟标准化饲养与管理方法，包括人工饲料配制、幼虫36日饲养和成虫饲养流程。以5日作为室内种群采集虫卵的周期，以4日作为收集虫蛹的周期，以36日作为单个批次卵块接种至化蛹阶段的幼虫饲养周期。通过对不同虫态操作流程的规范化管理，建立了多批次、重叠循环饲养的新型管理体系。然而，该技术方案采用人工饲料而非天然饲料，并不能利用天然饲料具有的优势，同时操作步骤繁琐，甚至需要将卵块接种至化蛹的饲养全过程放在无菌操作台上完成，对操作环境和操作人员要求较高，不利于实现饲养规模化。
11.总之，以天然饲料饲养二化螟具有目前人工饲料饲养技术尚无法达到的优势，亟待对天然饲料饲养二化螟技术进行改进，简化饲养操作步骤，节省成本和人工，并能提供规模化试验用虫。


技术实现要素：

12.本发明的主要目的是：克服现有技术存在的问题，提供一种二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，能够精准定量二化螟饲养流程，节省时间和饲养成本，解决天然寄主植物
稻苗腐烂变质或发霉问题，降低二化螟幼虫死亡率，提高化蛹率，保证二化螟室内种群规模，可以续代繁衍。
13.本发明解决其技术问题的技术方案如下：
14.一种二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，包括以下步骤：
15.第一步、清洗并淘选稻种；将所得稻种消毒；
16.所述消毒的过程包括：将次氯酸钠溶液与自来水按体积比1
±
0.2:100混匀，放入稻种浸泡24
±
2小时后，用自来水清洗稻种直至将次氯酸钠清洗干净；用自来水浸泡稻种24至48小时后，用双蒸水清洗稻种；所述次氯酸钠溶液中活性氯含量为质量比9
±
1％；
17.第二步、取第一步所得稻种，先催芽获得稻芽，再催苗获得稻苗；所得稻苗位于消毒的罐头瓶中，平均每罐头瓶使用50
±
5g稻芽；当稻苗长至大于3cm且不超过4cm时，将该罐头瓶用于第三步；
18.第三步、将经无菌处理的二化螟卵块放置在第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶放置5～7块二化螟卵块；所述无菌处理为用甲醛溶液熏蒸；平均每卵块含卵200～300个，平均每罐头瓶中含卵数为1000～2100个；将罐头瓶用消毒的黑布封口并扎紧，置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中；每2天向罐头瓶加双蒸水1次，沿瓶壁加水使稻苗根部润湿；从放置卵块至孵化出1龄幼虫需要2～4天；从1龄幼虫发育至2龄幼虫需要6～7天；当幼虫长至2龄中后期时，将各罐头瓶中的幼虫转移至新的第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶转移出900～2000头2龄中期幼虫；从2龄中期幼虫发育到3龄中期幼虫需要3～4天；当幼虫长至3龄幼虫末期时，将各罐头瓶中的幼虫转移至新的第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶转移出800～1900头3龄末期幼虫；从3龄末期幼虫发育至4龄末期幼虫需要3～4天，在幼虫处于4龄期间将各罐头瓶中的幼虫转移至新的第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶转移出700～1800头4龄幼虫；从4龄末期幼虫发育至5龄末期幼虫需要2～3天，当幼虫长至5龄幼虫中期时，然后将各罐头瓶中的幼虫转移至新的第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶转移出600～1700头5龄中期幼虫；继续饲养，5龄末期幼虫在3～4天后进入化蛹期；
19.第四步、取无菌卷纸，裁剪后折成若干扇形折纸；当5龄末期幼虫开始向蛹形态变化时，将折纸放在稻苗上，以便幼虫移动至折纸的缝隙或折叠处化蛹；用消毒的黑布封口并扎紧；2天后，用消毒的器械取出各折纸；先在培养皿底部铺垫无菌纸片，再用消毒的器械将折纸上的蛹收集至培养皿中的纸片上，用双蒸水润湿纸片以保持蛹的发育湿度；
20.第五步、取若干培养皿并在底部铺垫无菌卷纸，用双蒸水润湿无菌卷纸；将第四步收集的蛹转移至各培养皿中，平均每培养皿放置50
±
5个蛹，以备羽化及交配产卵；取若干养虫笼并在底部铺垫海绵，用双蒸水润湿海绵；在各养虫笼中，先以对角线方式摆放2盆用于产卵的稻苗，再放入2个含蛹培养皿；将各养虫笼放入28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中，蛹经过3～4天羽化，羽化的成虫在养虫笼中交配，并于罐头瓶稻苗上产卵；
21.第六步、成虫羽化6～7天后，从养虫笼中取出稻苗，用消毒的器械将载有卵块的稻苗叶片剪下，并放入底部铺垫湿润滤纸的培养皿中，平均每养虫笼获得100～150块卵块；将培养皿进行甲醛溶液熏蒸以无菌处理卵块；所得卵块用于进行下一周期培育饲养。
22.该方法中，对稻种做消毒处理，可以避免后续出现稻苗腐烂变质或发霉，从而解决天然饲料易腐烂的问题，并避免二化螟幼虫受稻苗腐烂变质或发霉影响而大面积死亡；严
格限定每罐头瓶的稻芽用量，利于饲养过程精准定量，并为后续规模化饲养二化螟打下基础；精确限定卵块孵化至5龄末期幼虫期间的时间节点及稻苗转移操作，不仅实现饲养过程的精准定量，还能通过如此精细的操作来确保二化螟幼虫的较高成活率，以形成基数较大的饲养规模；在化蛹、收蛹过程中，采用扇形折纸这一简单载体即可顺利收集蛹，使饲养过程更加简易；在羽化后成虫交配产卵过程，以稻苗作为成虫产卵的天然基质，提高产卵率，以利于后续的规模化饲养。该饲养方法能够循环往复地持续进行下去，从而持续为二化螟的防治研究提供多批次规模化的发育进度(虫态、龄期、个体大小、健康状况、敏感性等)一致的虫源，保证试验重复的准确性，缩短研究工作周期；流程简易，仅需1人即可完成全部饲养操作。
23.本发明进一步完善的技术方案如下：
24.优选地，将第三步含幼虫的罐头瓶、第四步含蛹的培养皿、或第六步获得的卵块在4℃
±
2℃环境中放置预设时间，以控制其发育进度。
25.采用该优选方案后，可进一步通过调节温度控制二化螟卵期、幼虫期和蛹期的生长发育，不仅能使其发育进度一致性更高，还能满足相应防治研究项目对虫源发育阶段的时间窗口要求。
26.优选地，第一步中，清洗并淘选稻种的具体过程为：
27.将稻种放入盆中，向盆中灌入自来水并淹没稻种，静置数分钟，使稻谷壳或干瘪稻种漂浮于水面、同时饱满稻种沉于盆底；将稻谷壳或干瘪稻种连同水倒入沥水盆中，仅留盆底的饱满稻种；重复上述过程，直至将沉入盆底的饱满稻种清洗至水变清澈为止；平均每盆放入稻种的重量大于1000g，最终平均每盆获得的饱满稻种重量为放入稻种的93
±
3％。
28.采用以上优选方案后，可进一步优化第一步的具体技术细节，使其更加简化；同时使用稻种量大，利于后续不断提供稻苗作为天然饲料。
29.优选地，第二步中，催芽获得稻芽的具体过程为：
30.取第一步所得稻种，先将稻种水分沥干并放入盆中，再用洁净的黑色塑料袋将盆封裹并扎紧袋口，放置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中，以加速种子露白破胸；24
±
2h时翻动稻种1次，使稻种温度均匀一致，保证发芽整齐；48
±
2h时稻种已充分发芽，此即稻芽。
31.优选地，第二步中，催苗获得稻苗的具体过程为：
32.将稻芽用双蒸水清洗，并将水倒干；在洁净罐头瓶底部铺垫无菌纸片，作为稻种扎根的载体；使用双蒸水将纸片润湿，将稻芽播种在罐头瓶中，用保鲜膜封口，用针扎孔保证氧气通畅，放置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中，以加速稻种出苗；每48
±
2h用100
±
10ml双蒸水冲洗稻苗，然后将双蒸水倾倒，以维持稻苗生长所需的水分。
33.采用以上优选方案后，可进一步优化第二步的具体技术细节，使其更加简化，且能每批次均培育出大量生长进度一致的稻苗，为后续饲养提供充足的天然饲料。
34.优选地，第三步中，采用医用酒精消毒的镊子，用酒精灯烧灼后自然冷却备用；将幼虫从当前罐头瓶转移至新的罐头瓶中稻苗时，先用镊子从当前罐头瓶中夹出稻苗并放在第一张洁净纸上，再从这些稻苗中挑出幼虫并放在第二张洁净纸上，最后将第二张洁净纸上的幼虫直接倒至新的罐头瓶中稻苗上，此时若有幼虫从洁净纸上逃逸，则用镊子将其挑至新的罐头瓶中稻苗上；之后，将罐头瓶用消毒的黑布封口并扎紧，继续置于28℃
±
1℃、相
对湿度70～80％人工气候箱中；在第三步中，幼虫饲养全程置于环境保持一致的人工气候箱中。
35.采用以上优选方案后，可进一步优化第三步的具体技术细节，能更好地确保幼虫不因换苗而大面积死亡；饲养环境保持一致可确保幼虫整齐进入各个发育阶段。
36.优选地，第四步中，取出各折纸时将折纸放入消毒的玻璃缸中，然后再进行后续操作；所述消毒的器械为医用酒精消毒的医用镊子；采用的培养皿口径规格为90mm；第五步中，采用的培养皿口径规格为90mm；采用100
±
10ml双蒸水润湿海绵。
37.采用以上优选方案后，可进一步优化第四步和第五步的具体技术细节，以实现更好的技术效果。
38.优选地，第五步中，培育用于产卵的稻苗的过程为：取第二步中催芽获得的稻芽，播种于预设盆钵的土壤表层并覆盖一层薄土，用洁净的黑色塑料袋覆盖盆钵，置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候室中培育，直至稻苗株高达到10cm，即得用于产卵的稻苗；第五步中，养虫笼中还放有口径规格为60mm的培养皿，该培养皿中盛有蘸浸体积比10
±
1％蜂蜜水的消毒棉球；每两天更换一次棉球。
39.采用以上优选方案后，可进一步优化第五步中额外的具体技术细节，其中，精确限定了用于产卵的稻苗培育过程，能更好地提供产卵环境；蜂蜜水可为羽化的成虫补充营养，促进其产卵，采用消毒棉球蘸浸则可避免成虫跌落蜂蜜水中死亡。
40.优选地，第六步中，所述熏蒸的具体过程为：将含卵块的培养皿置于底部盛有甲醛溶液的干燥缸中熏蒸15
±
1min，然后立即取出；所述消毒的器械为经过消毒的剪刀；采用的培养皿口径规格为90mm；甲醛溶液的浓度为体积比35
±
1％。
41.采用以上优选方案后，可进一步优化第六步的具体技术细节，其中熏蒸过程可杀死卵块表面的寄生菌，利于提高后续饲养过程中幼虫的成活率。
42.优选地，所述稻种为粳稻种子；所述罐头瓶的口径为6cm且高为10cm；所述养虫笼尺寸为：45cm
×
45cm
×
55cm；第三步采用的罐头瓶数量大于20瓶。
43.本发明精准定量了天然饲料稻苗制备、幼虫饲养、化蛹收蛹、成虫交配产卵和卵块收集的操作步骤，形成了一套规模化饲养方法，节省饲养时间、成本和人工。
44.与现有技术相比，本发明的主要优势有：(1)在卵-幼虫-蛹-成虫-卵的全程中采取相应的消毒和防菌措施，全面控制病原菌的侵染，保证世代发育和种群规模。(2)天然饲料的制备包括稻种的清洗、消毒杀菌、催芽和播种，有效地控制了稻苗腐烂变质或发霉，为幼虫提供充足的营养，优化了幼虫的栖息环境，减少天然饲料更换次数，提高幼虫的成活率。(3)提供一套新型的化蛹收蛹方法，使高龄幼虫钻蛀于折纸折叠处结茧化蛹，提供了安全、湿度适宜、密闭的化蛹场所，可以提高化蛹数量和增加蛹重，能以折纸为单元进行保存和转运，找蛹简单方便，适于进行大规模的继代饲养。(4)优化了二化螟成虫产卵环境，采用适合二化螟产卵的养虫笼，使成虫可以在无菌的恒温恒湿环境下交配产卵，提高了产卵量；采用天然饲料稻苗提供了还原二化螟的自然生存方式的产卵基质，提高了产卵率。(5)按本发明方法饲养的二化螟与自然界中的二化螟的生物学特性接近，相关研究的研究结果偏差小。
附图说明
45.图1为本发明实施例1二化螟天然饲料制备示意图。
46.图2为本发明实施例2二化螟粳稻苗饲养幼虫示意图。
47.图3为本发明实施例3二化螟化蛹收蛹示意图。
48.图4为本发明实施例4二化螟成虫交配产卵示意图。
49.图5为本发明实施例5二化螟卵块收集保存示意图。
具体实施方式
50.下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不限于所给出的例子。本发明所涉及的试剂均为市售品。
51.实施例1、二化螟天然饲料制备
52.本实施例中，二化螟的天然饲料使用粳稻品种南粳46，此品种是江苏省主推品种，广泛种植于江苏省各市县。本发明可选用不同水稻品种为天然饲料，选用当地水稻品种既便于就地取材，又能符合当地二化螟实际生活环境。
53.(1)用天平称取1500g南粳46种子，此粳稻种子的重量可以保证二化螟规模化繁殖需要，能为续代饲养提供寄主食物和栖境。
54.将称取的南粳46种子放入10l塑料盆中，用量杯将5l自来水倒入塑料盆中，在自来水中用力搅拌粳稻种子，静置数分钟，将残留的稻谷壳或干瘪稻种倒入沥水盆中，留下盆底的饱满稻种。再用量杯将5l自来水倒入塑料盆中，用力搅拌粳稻种子，淘去残留的稻谷壳或干瘪稻种。此淘洗步骤总共重复5次，将稻谷壳或干瘪稻种清除干净。
55.沉于塑料盆底的粳稻种子重量约为1400g，用量杯将3l自来水倒入塑料盆浸泡粳稻种子，以备后续消毒。
56.(2)根据次氯酸钠溶液与自来水的比例1:100，3l自来水中倒入0.03l的次氯酸钠溶液(含活性氯9％重量比，下同)，充分搅拌混匀，24h后倾倒浸泡粳稻种子的次氯酸钠和自来水混合液，用自来水充分清洗稻种，以闻不到次氯酸钠刺激气味为止。
57.用量杯将3l自来水倒入塑料盆继续浸泡粳稻种子，种子浸泡充分的标准是谷壳透明，米粒腹白可见，剥去颖壳米粒易折断而无响声，用手能碾碎时，表明种子已吸足水分。24h后倾倒浸泡粳稻种子的自来水。
58.用量杯倒入2l双蒸水，清洗浸泡后的粳稻种子，充分清洗后倾倒双蒸水，清洗过程重复3次，此操作步骤可以将自来水中的微量化学成分洗掉，防止种子不出芽和二化螟出现中毒。
59.(3)将稻种沥干水分后，用黑色塑料袋将塑料盆封裹并扎紧塑料袋口，黑色塑料袋保温效果好，有利于粳稻种子发芽。放置于型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。催芽过程中需要保持温度不低于25℃，防止高温烧种，超过40℃种子失去发芽能力。每24h翻动粳稻种子1次，翻动时可以将塑料盆底部的残留水分与种子充分混匀，通气增氧，加速种芽茁壮生长。
60.(4)48h后粳稻种子整体出芽后，用量杯倒入2l双蒸水轻柔清洗发芽的稻种，此过程重复2次，清洗中勿折断稻芽，将水分充分沥干。将市售的无菌卷纸剪成长13.9cm宽10.2cm的纸片，用于粳稻种子生长的基质。将纸片放入口径6cm高10cm的500ml罐头瓶底部，用量筒倒入10ml双蒸水润湿，然后称取50g浸泡的粳稻稻芽，将其播种在罐头瓶中。将普通保鲜膜剪至罐头瓶口大小，然后用其封住瓶口，用0
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昆虫针在保鲜膜上扎孔10～15个，保证
氧气通畅。1400g粳稻稻芽可以种植28瓶稻苗，放置于型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。为保证粳稻稻芽出苗，需要保持温度不低于25℃，72h稻芽长至1～2cm，沿着瓶内壁倒入5ml双蒸水，防止稻苗干枯。在出苗过程中，每48h用100ml双蒸水冲洗稻苗，然后将双蒸水倾倒，此步骤可以保证稻苗生长所需的水分。
61.以上过程如图1所示。
62.实施例2.二化螟幼虫饲养
63.(1)一龄幼虫饲养
64.罐头瓶中的粳稻稻苗生长至大于3cm时，将大小一致的二化螟无菌卵块放在罐头瓶的稻苗中，放置卵块数量为5块，放置的卵块为即将孵化成幼虫的卵块，判断的标准是卵块为黑色，已放置在人工气候箱中2天。放置卵块的罐头瓶数量为28瓶。本实施例使用的卵块大小为长度15mm宽度2mm，卵块中卵的数量200～300个，罐头瓶中卵数为1000～1500个，一个世代的总卵数为28000～42000个。罐头瓶用黑布封口，用橡皮筋扎紧(如图2所示)。放置于型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。卵块2天后孵化出1龄幼虫，幼虫生长阶段每48h沿着罐头瓶壁加一次双蒸水10ml，稻苗根部润湿即可。在1龄幼虫饲养阶段，依据实施例1制备幼虫饲养中所需要的粳稻稻苗，保持相同瓶数。
65.(2)二龄幼虫饲养
66.二化螟1龄幼虫生长至2龄幼虫需要7天，这个阶段不需要更换粳稻稻苗，仅需保证稻苗生长足够水分。进入2龄中后期，随着虫体的增大，食量开始变大，需要更换粳稻稻苗。首先将镊子从75％消毒酒精中取出，点燃酒精灯，把镊子放在酒精灯火焰上方进行灼烧，目的为了对镊子消毒灭菌，然后放在无菌卷纸上自然冷却。在试验台上铺上2张a4复印纸，一张用于暂时放置从罐头瓶中夹出的粳稻稻苗，2龄幼虫栖息在粳稻稻苗之中，另一张暂时放置从粳稻稻苗中挑出的2龄幼虫。将a4复印纸上2龄幼虫直接倒入包含新鲜粳稻稻苗的罐头瓶中，逃逸的2龄幼虫用镊子挑入罐头瓶中，每罐头瓶中可以转移出900～1400头2龄幼虫。转移完毕后，用黑布封口，用橡皮筋扎紧，放置于型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。
67.1龄幼虫饲养使用过的封口黑布，放置在塑料盆中，用量杯倒入2l自来水塑料盆中，按照次氯酸钠溶液：水＝1:100，所需次氯酸钠溶液的用量为20ml，倒入塑料盆中与自来水混匀。浸泡24h后，在自来水下充分冲洗，直到以闻不到次氯酸钠的刺鼻气味为止。在塑料盆中滴入数滴冷水去油洗洁剂，在自来水下浸泡清洗封口黑布，冲洗干净后拧干黑布，放于型号wgl-125b电热鼓风干燥箱中(天津市泰斯特仪器有限公司)烘干，温度设置为50℃。用量杯倒入1龄幼虫饲养使用过的罐头瓶500ml自来水，按照次氯酸钠溶液：水＝1:100，所需次氯酸钠溶液的用量为5ml，倒入罐头瓶中与自来水混匀。浸泡24h后，在自来水下充分冲洗，直到以闻不到次氯酸钠的刺鼻气味为止。罐头瓶中滴入1～2滴冷水去油洗洁剂，在自来水下清洗罐头瓶，冲洗干净泡沫即可。将罐头瓶放置于型号gzx-9140me的数显鼓风干燥箱中高温烘烤，温度设置为200℃，烘烤时间6h，烘烤结束后，自然冷却。然后将封口黑布和罐头瓶放置在人工气候箱中，打开紫外灯，紫外线下灭菌30分钟，风吹10分钟后，拿出封口黑布和罐头瓶备用。
68.(3)三龄幼虫饲养
69.二化螟2龄中期幼虫发育到3龄中期幼虫需要4天，3龄幼虫阶段需要更换一次粳稻稻苗，将镊子从75％消毒酒精中取出，放在酒精灯火焰上方进行灼烧，给镊子消毒灭菌，放在无菌卷纸上自然冷却。在试验台上铺上2张a4复印纸，一张用于暂时放置从罐头瓶中夹出的粳稻稻苗，3龄幼虫栖息在粳稻稻苗之中，另一张暂时放置从粳稻稻苗中挑出的3龄幼虫。将a4复印纸上3龄幼虫直接倒入包含新鲜粳稻稻苗的罐头瓶中，逃逸的3龄幼虫用镊子挑入罐头瓶中，每罐头瓶中可以转移出800～1300头3龄幼虫。转移完毕后，用黑布封口，用橡皮筋扎紧，放置于型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。同样地，根据实施例2中(2)的操作步骤，将封口黑布和罐头瓶消毒灭菌备用。依据实施例1中的操作步骤，制备幼虫饲养中所需要的粳稻稻苗，保持相同瓶数。
70.(4)四龄幼虫饲养
71.3龄末期进入“暴食期”，直至4龄幼虫末期结束，3龄幼虫末期至4龄幼虫末期间，更换1次稻苗。将镊子从75％消毒酒精中取出，放在酒精灯火焰上方进行灼烧，给镊子消毒灭菌，放在无菌卷纸上自然冷却。在试验台上铺上2张a4复印纸，一张用于暂时放置从罐头瓶中夹出的粳稻稻苗，4龄幼虫栖息在粳稻稻苗之中，另一张暂时放置从粳稻稻苗中挑出的4龄幼虫。将a4复印纸上4龄幼虫直接倒入包含新鲜粳稻稻苗的罐头瓶中，逃逸的4龄幼虫用镊子挑入罐头瓶中，每罐头瓶中可以转移出700～1200头4龄幼虫。转移完毕后，用黑布封口，用橡皮筋扎紧，放置于型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。同样地，根据实施例2中(2)的操作步骤，将封口黑布和罐头瓶消毒灭菌备用。依据实施例1中的操作步骤，制备幼虫饲养中所需要的粳稻稻苗，保持相同瓶数。
72.(5)五龄幼虫饲养
73.4龄末期幼虫进入5龄幼虫后，食量减小，开始结茧化蛹。5龄中期更换1次稻苗，将镊子从75％消毒酒精中取出，放在酒精灯火焰上方进行灼烧，给镊子消毒灭菌，放在无菌卷纸上自然冷却。在试验台上铺上2张a4复印纸，一张用于暂时放置从罐头瓶中夹出的粳稻稻苗，5龄中期幼虫栖息在粳稻稻苗之中，另一张暂时放置从粳稻稻苗中挑出的5龄中期幼虫。将a4复印纸上5龄中期幼虫直接倒入包含新鲜粳稻稻苗的罐头瓶中，逃逸的5龄中期幼虫用镊子挑入罐头瓶中，每罐头瓶中可以转移出600～1100头5龄中期幼虫。转移完毕后，用黑布封口，用橡皮筋扎紧。使用无菌卷纸剪成的6张纸片(长13.9cm宽10.2cm)，折叠成扇形折纸，放置在粳稻稻苗的上面，用黑布封口，用橡皮筋扎紧。放置于型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。本实施例饲养的幼虫全程置于恒温恒湿和光照一致的环境，5龄末期幼虫整齐地进入化蛹阶段。
74.实施例3.二化螟化蛹收蛹
75.(1)二化螟化蛹(如图3所示)
76.二化螟5龄幼虫3天后进入化蛹期，幼虫会爬向折纸的间隙处化蛹，5龄末期幼虫几乎不取食，此阶段只需等待幼虫化蛹即可。在准备放置折纸的玻璃缸(口径18cm高度9cm)中，用量杯倒入2l自来水，按照次氯酸钠溶液：水＝1:100，所需次氯酸钠溶液的用量为20ml，倒入玻璃缸中与自来水混匀。浸泡24h后，在自来水下充分冲洗，直到以闻不到次氯酸
钠的刺鼻气味为止。玻璃缸中滴入数滴冷水去油洗洁剂，在自来水下清洗玻璃缸，冲洗干净泡沫即可。将玻璃缸放置于型号gzx-9140me的数显鼓风干燥箱中高温烘烤，温度设置为200℃，烘烤时间6h，烘烤结束后，自然冷却。然后将玻璃缸在人工气候箱中的紫外灯下，使用紫外线灭菌30分钟，风吹10分钟后，拿出玻璃缸备用。将90mm玻璃培养皿放在塑料盆中，倒入自来水并滴入数滴冷水去油洗洁剂，充分搅拌自来水，用刷子清洗玻璃培养皿，充分清洗后将玻璃培养皿自然晾干，用报纸以10个一组进行包裹，放于d-1型自动蒸汽灭菌锅(北京发恩科贸有限公司)灭菌，温度设置120℃，灭菌20min，灭菌后放于型号wgl-125b电热鼓风干燥箱中(天津市泰斯特仪器有限公司)烘干，温度设置为50℃。烘干结束取出备用，此操作可以重复利用培养皿，减少成本。
77.(2)二化螟收蛹(如图3所示)
78.将镊子从75％消毒酒精中取出，放在酒精灯火焰上方进行灼烧，给镊子消毒灭菌，放在无菌卷纸上自然冷却。2天后用镊子将包含化蛹的折纸取出，折纸放置于上述灭菌过的玻璃缸中。同时使用无菌卷纸剪成的6张纸片(长13.9cm宽10.2cm)，折叠成扇形折纸，放置在粳稻稻苗的上面，用消毒的黑布封口，用橡皮筋扎紧，让幼虫继续化蛹。放置于型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。2天后在试验台上铺上1张a4复印纸，用镊子将折纸夹到a4复印纸，用2个镊子将折纸拉开，将折纸中的蛹夹到90mm的玻璃培养皿中，培养皿底部用无菌卷纸铺垫，无菌卷纸用双蒸水润湿，保持蛹的发育湿度。
79.实施例4.二化螟成虫交配产卵
80.(1)养虫笼的准备
81.将准备用于二化螟交配产卵的养虫笼(45cm
×
45cm
×
55cm)，先用自来水冲洗干净。然后用量杯将5l自来水倒入塑料盆，按照次氯酸钠溶液：水＝1:100，所需次氯酸钠溶液的用量为50ml，倒入塑料盆中与自来水混匀配制消毒水。用普通毛刷蘸这个比例的消毒水，对准备用于二化螟交配产卵的养虫笼进行洗刷消毒。此消毒水洗刷使用完毕后，在自来水下充分冲洗，直到以闻不到次氯酸钠的刺鼻气味为止。放置在常温环境中晾干备用。
82.(2)产卵粳稻稻苗准备
83.根据实施例1.中的操作步骤，制备所需要的产卵粳稻稻苗的稻芽。将消毒杀菌的稻芽50g播种于塑料盆钵(口径17.5cm高度15.5cm)，撒于盆钵土壤表层，覆盖一层薄土，放置于人工气候室中，以空调控制温度为28℃，光周期为16h光照，8h黑暗(用定时器控制)，相对湿度80％左右。用黑色塑料袋覆盖在塑料盆钵上方，用于保温。7天后塑料盆钵中稻芽出苗，作为产卵苗，产卵苗的株高10cm。
84.(3)成虫交配产卵(如图4所示)
85.将收集的蛹转移至90mm的玻璃培养皿中，培养皿底部用无菌卷纸铺垫，无菌卷纸用双蒸水润湿，每个培养皿中放50个蛹用作交配产卵。首先将消毒过的养虫笼放置在型号rgc-1000c人工气候箱中(合肥右科仪器设备有限公司)，设置温度28℃，相对湿度80％，光照：黑暗＝16h：8h。在养虫笼的底部放置大小合适的吸水海绵一张，用100ml的双蒸水将吸水海绵润湿，将2盆产卵稻苗以对角线的摆放方式放置在养虫笼中，然后放置2盒培养皿的蛹在养虫笼中。
86.用1000ul移液枪吸取10ml的纯蜂蜜转移至一次性口杯中，用量筒倒入90ml双蒸
水，用铁质药勺充分搅拌，配制10％的蜂蜜水。将20ml 10％的蜂蜜水倒入60mm的培养皿中，用消毒棉球蘸浸蜂蜜水，目的为成虫提供取食载体，防止成虫跌落蜂蜜水中死亡。将1个放置蜂蜜水的培养皿放入养虫笼，为羽化的成虫补充营养，促进其产卵，每2天换培养皿中的蜂蜜水一次，保证蜂蜜水新鲜度，防止发霉腐败。放置于人工气候箱28℃温度下，蛹经过4天羽化，羽化的成虫在养虫笼中交配产卵。产卵苗的株高长至20cm。
87.实施例5.二化螟卵块收集保存
88.成虫羽化7天后将粳稻稻苗盆钵从人工气候箱中移出养虫笼，若二化螟成虫仍附着在稻苗上，可将成虫从稻苗上清除，此阶段成虫生命力减弱不活跃。羽化的成虫会将卵产在水稻叶片表面，卵聚集在一起形成卵块。将剪刀放到75％的酒精中浸泡，拿出后用无菌卷纸擦拭消毒备用。首先在试验台上铺上1张a4复印纸，用消毒过的剪刀将有卵块的稻株从根部剪断，暂时放置在a4复印纸上。准备在90mm培养皿底部铺垫1片无菌卷纸纸片，用双蒸水润湿此纸片。用消毒过的剪刀将载有卵块的水稻叶片剪下，放入底部铺垫湿润纸片的90mm培养皿中。2盆产卵苗可以剪出100片载有卵块的粳稻稻叶，载有卵块100～150块。
89.用5ml移液枪吸取35ml的甲醛转移至一次性口杯中，用量筒倒入65ml双蒸水，充分搅拌，配制35％的甲醛溶液。将放有卵块的培养皿置于底部盛有甲醛溶液的玻璃干燥皿中熏蒸15min，结束后立即取出，目的通过熏蒸对卵块进行消毒，杀死卵块表面的寄生菌(如图5所示)。
90.此后，将卵块放置于人工气候箱28℃温度下，经过0～2天后用于进行下一周期培育饲养；或者，将卵块放于冰箱4℃低温冷藏，使卵的发育进度保持一致，控制卵块孵化时间。
91.除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

技术特征：
1.一种二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，包括以下步骤：第一步、清洗并淘选稻种；将所得稻种消毒；所述消毒的过程包括：将次氯酸钠溶液与自来水按体积比1
±
0.2:100混匀，放入稻种浸泡24
±
2小时后，用自来水清洗稻种直至将次氯酸钠清洗干净；用自来水浸泡稻种24至48小时后，用双蒸水清洗稻种；所述次氯酸钠溶液中活性氯含量为质量比9
±
1％；第二步、取第一步所得稻种，先催芽获得稻芽，再催苗获得稻苗；所得稻苗位于消毒的罐头瓶中，平均每罐头瓶使用50
±
5g稻芽；当稻苗长至大于3cm且不超过4cm时，将该罐头瓶用于第三步；第三步、将经无菌处理的二化螟卵块放置在第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶放置5～7块二化螟卵块；所述无菌处理为用甲醛溶液熏蒸；平均每卵块含卵200～300个，平均每罐头瓶中含卵数为1000～2100个；将罐头瓶用消毒的黑布封口并扎紧，置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中；每2天向罐头瓶加双蒸水1次，沿瓶壁加水使稻苗根部润湿；从放置卵块至孵化出1龄幼虫需要2～4天；从1龄幼虫发育至2龄幼虫需要6～7天；当幼虫长至2龄中后期时，将各罐头瓶中的幼虫转移至新的第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶转移出900～2000头2龄中期幼虫；从2龄中期幼虫发育到3龄中期幼虫需要3～4天；当幼虫长至3龄幼虫末期时，将各罐头瓶中的幼虫转移至新的第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶转移出800～1900头3龄末期幼虫；从3龄末期幼虫发育至4龄末期幼虫需要3～4天，在幼虫处于4龄期间将各罐头瓶中的幼虫转移至新的第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶转移出700～1800头4龄幼虫；从4龄末期幼虫发育至5龄末期幼虫需要2～3天，当幼虫长至5龄幼虫中期时，然后将各罐头瓶中的幼虫转移至新的第二步所得罐头瓶中稻苗上，平均每罐头瓶转移出600～1700头5龄中期幼虫；继续饲养，5龄末期幼虫在3～4天后进入化蛹期；第四步、取无菌卷纸，裁剪后折成若干扇形折纸；当5龄末期幼虫开始向蛹形态变化时，将折纸放在稻苗上，以便幼虫移动至折纸的缝隙或折叠处化蛹；用消毒的黑布封口并扎紧；2天后，用消毒的器械取出各折纸；先在培养皿底部铺垫无菌纸片，再用消毒的器械将折纸上的蛹收集至培养皿中的纸片上，用双蒸水润湿纸片以保持蛹的发育湿度；第五步、取若干培养皿并在底部铺垫无菌卷纸，用双蒸水润湿无菌卷纸；将第四步收集的蛹转移至各培养皿中，平均每培养皿放置50
±
5个蛹，以备羽化及交配产卵；取若干养虫笼并在底部铺垫海绵，用双蒸水润湿海绵；在各养虫笼中，先以对角线方式摆放2盆用于产卵的稻苗，再放入2个含蛹培养皿；将各养虫笼放入28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中，蛹经过3～4天羽化，羽化的成虫在养虫笼中交配，并于罐头瓶稻苗上产卵；第六步、成虫羽化6～7天后，从养虫笼中取出稻苗，用消毒的器械将载有卵块的稻苗叶片剪下，并放入底部铺垫湿润滤纸的培养皿中，平均每养虫笼获得100～150块卵块；将培养皿进行甲醛溶液熏蒸以无菌处理卵块；所得卵块用于进行下一周期培育饲养。2.根据权利要求1所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，将第三步含幼虫的罐头瓶、第四步含蛹的培养皿、或第六步获得的卵块在4℃
±
2℃环境中放置预设时间，以控制其发育进度。3.根据权利要求1或2所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，第一步中，清洗并淘选稻种的具体过程为：
将稻种放入盆中，向盆中灌入自来水并淹没稻种，静置数分钟，使稻谷壳或干瘪稻种漂浮于水面、同时饱满稻种沉于盆底；将稻谷壳或干瘪稻种连同水倒入沥水盆中，仅留盆底的饱满稻种；重复上述过程，直至将沉入盆底的饱满稻种清洗至水变清澈为止；平均每盆放入稻种的重量大于1000g，最终平均每盆获得的饱满稻种重量为放入稻种的93
±
3％。4.根据权利要求3所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，第二步中，催芽获得稻芽的具体过程为：取第一步所得稻种，先将稻种水分沥干并放入盆中，再用洁净的黑色塑料袋将盆封裹并扎紧袋口，放置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中，以加速种子露白破胸；24
±
2h时翻动稻种1次，使稻种温度均匀一致，保证发芽整齐；48
±
2h时稻种已充分发芽，此即稻芽。5.根据权利要求4所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，第二步中，催苗获得稻苗的具体过程为：将稻芽用双蒸水清洗，并将水倒干；在洁净罐头瓶底部铺垫无菌纸片，作为稻种扎根的载体；使用双蒸水将纸片润湿，将稻芽播种在罐头瓶中，用保鲜膜封口，用针扎孔保证氧气通畅，放置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中，以加速稻种出苗；每48
±
2h用100
±
10ml双蒸水冲洗稻苗，然后将双蒸水倾倒，以维持稻苗生长所需的水分。6.根据权利要求5所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，第三步中，采用医用酒精消毒的镊子，用酒精灯烧灼后自然冷却备用；将幼虫从当前罐头瓶转移至新的罐头瓶中稻苗时，先用镊子从当前罐头瓶中夹出稻苗并放在第一张洁净纸上，再从这些稻苗中挑出幼虫并放在第二张洁净纸上，最后将第二张洁净纸上的幼虫直接倒至新的罐头瓶中稻苗上，此时若有幼虫从洁净纸上逃逸，则用镊子将其挑至新的罐头瓶中稻苗上；之后，将罐头瓶用消毒的黑布封口并扎紧，继续置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候箱中；在第三步中，幼虫饲养全程置于环境保持一致的人工气候箱中。7.根据权利要求5所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，第四步中，取出各折纸时将折纸放入消毒的玻璃缸中，然后再进行后续操作；所述消毒的器械为医用酒精消毒的医用镊子；采用的培养皿口径规格为90mm；第五步中，采用的培养皿口径规格为90mm；采用100
±
10ml双蒸水润湿海绵。8.根据权利要求5所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，第五步中，培育用于产卵的稻苗的过程为：取第二步中催芽获得的稻芽，播种于预设盆钵的土壤表层并覆盖一层薄土，用洁净的黑色塑料袋覆盖盆钵，置于28℃
±
1℃、相对湿度70～80％人工气候室中培育，直至稻苗株高达到10cm，即得用于产卵的稻苗；第五步中，养虫笼中还放有口径规格为60mm的培养皿，该培养皿中盛有蘸浸体积比10
±
1％蜂蜜水的消毒棉球；每两天更换一次棉球。9.根据权利要求5所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，第六步中，所述熏蒸的具体过程为：将含卵块的培养皿置于底部盛有甲醛溶液的干燥缸中熏蒸15
±
1min，然后立即取出；所述消毒的器械为经过消毒的剪刀；采用的培养皿口径规格为90mm；甲醛溶液的浓度为体积比35
±
1％。10.根据权利要求5所述的二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，其特征是，所述稻种为粳稻种子；所述罐头瓶的口径为6cm且高为10cm；所述养虫笼尺寸为：45cm
×
45cm
×
55cm；
第三步采用的罐头瓶数量大于20瓶。

技术总结
本发明涉及一种二化螟室内稻苗精准规模化饲养方法，包括：清洗并淘选稻种；将所得稻种消毒；将稻种先催芽获得稻芽，再催苗获得稻苗；采用稻苗进行精细化幼虫饲养；化蛹收蛹；成虫交配产卵；卵块收集与处理。本发明精准定量了天然饲料稻苗制备、幼虫饲养、化蛹收蛹、成虫交配产卵和卵块收集的操作步骤，形成了一套规模化饲养方法，节省饲养时间、成本和人工。成本和人工。


技术研发人员：徐鹿 韩阳春 赵钧 刘宝生 徐德进 徐广春 夏海波 胡双女
受保护的技术使用者：江苏省农业科学院
技术研发日：2021.12.07
技术公布日：2022/3/8