一种新型的双链siRNA、其缀合物及其用途的制作方法
本发明属于小核酸药物领域，本发明的目的在于提供一种新型的双链sirna、其缀合物及其用途。本发明还提供了所述双链sirna及其缀合物在制备用于治疗和/或预防乙型肝炎疾病的药物中的用途。另外，本发明还涉及一种新型的化合物，以及所述化合物在dna核苷酸固相合成的原料、寡核苷酸药物的合成原料、sirna药物的合成原料、sirna药物研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的应用(用途)，尤其是在用作本发明所述双链sirna药物的合成原料的用途。并且，本发明还涉及一种新型的核苷酸残基，以及其在用于sirna药物研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的应用，以及在作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用。
背景技术：
1、乙型病毒性肝炎(又称乙型肝炎或乙肝)是严重威胁全球的一类传染病，目前全球公认的两大类乙肝治疗药物为干扰素和核苷类似物，但是这两类药物存在使用后容易产生耐药性或使用受限等多种弊端，如干扰素容易产生不良反应、核苷类药物存在耐药性和停药后复发问题。因此，若能从基因水平沉默病毒的基因表达，阻断hbv的生成和复制，由此从根本上降低病毒复制和对肝细胞的侵染，无疑将是最为理想的乙肝治疗手段。小干扰核酸，即小干扰rna或短干扰rna(small interfering rna，sirna)可基于rna干扰(rnainterference，rnai)这一机制，以序列特异性的方式抑制或阻断任何感兴趣的目的基因(例如引发如癌症等疾病的基因)的表达，从而达到治疗疾病的目的。
2、rna干扰(rna interference，rnai)是由双链rna(double-stranded rna，dsrna)分子在mrna水平关闭同源基因的表达或使该基因表达沉默的现象。rna干扰技术又被形象地称为基因敲低(knock-down)或基因沉默(gene silencing)，是一种典型的转录后基因调控方法，又称转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，ptgs)。最早有关rna干扰的报道出现在1990年，由两个不同的研究小组同时报道了转基因植物中的rna干扰现象，之后又在线虫、果蝇、斑马鱼和小鼠等几乎所有真核生物中观察到了rna干扰现象。1999年，hamilton和baulcombe在发生rna干扰的植物中检测到了长度为21-25个核苷酸的rna片段，这些rna片断被证明是rna干扰所必需的，被称为小干扰核酸(sirna)。双链sirna与细胞源性的相关酶和蛋白质形成rna诱导的沉默复合体(rna-induced silencingcomplex，risc)。在rna干扰过程中，双链sirna中的正义链被排除出复合体，反义链指导risc结合到靶mrna的同源位点，然后由复合物中的核糖核酸酶iii降解靶mrna，从而关闭靶基因的表达。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种新型的双链sirna、其缀合物、其盐及它们的用途，具体涉及本发明所述双链sirna及其缀合物在制备用于治疗和/或预防乙型肝炎疾病的药物中的用途。另外，本发明还涉及一种新型的化合物，以及所述化合物在dna核苷酸固相合成的原料、sirna药物的合成原料、sirna药物研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的用途，尤其是在作为本发明所述双链sirna药物的合成原料的用途。并且，本发明还涉及一种新型的核苷酸残基，以及其在sirna药物研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的用途，以及作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用。本发明所述双链sirna及其缀合物对hbv具有较高的基因表达抑制活性和/或较低的毒性。
2、一方面，本发明涉及一种双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述双链sirna包括一条正义链和一条反义链，且所述双链sirna包含一个或多个y，所述y为所述双链sirna中的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的。任选地，所述y可以在所述双链sirna的任意位置。
3、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述双链sirna包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个y。
4、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述双链sirna包含1、2、3、4或5个y。
5、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述反义链包含如5’-ugugaagcgaagugcacacuu-3’(seq id no:40)所示的序列，或在如seq id no:40所示序列中使用y替换了一个或多个核苷酸残基的序列；其中，所述反义链中的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述反义链的长度不超过23个核苷酸，其中所述y具有本发明所述的含义。任选地，所述y替换发生在如seq id no:40所示的序列的任意位置。
6、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述正义链包含如5’-gugugcacuucgcuucaca-3’(seq id no:20)所示的序列，或在如seq id no:20所示序列中使用y替换了一个或多个核苷酸残基的序列，其中，所述正义链中的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述正义链的长度不超过23个核苷酸。任选地，所述y替换发生在如seq id no：20所示的序列的任意位置。
7、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，所述双链sirna中的正义链或反义链的70％、75％、80％、85％、90％或95％以上的核苷酸和y都是经修饰的。
8、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，所述双链sirna中的正义链和反义链的70％、75％、80％、85％、90％或95％以上的核苷酸和y都是经修饰的。
9、在本发明的所述双链sirna，其缀合物或其盐的一些实施例中，所述双链sirna中的每一个核苷酸和y都是经修饰的。
10、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，其中所述修饰选自以下中的至少之一：2’-甲氧基修饰、2’-甲氧基乙基修饰、2’-氟代修饰、硫代磷酸酯基连接、2’-脱氧修饰、2’-氨基修饰、锁核酸修饰、解锁核酸修饰、乙二醇核酸修饰和5’-乙烯基磷酸酯修饰。
11、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述正义链包含在如seq id no:20所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中所述正义链中的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的。
12、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，所述正义链包含在如seq id no:20所示的序列中使用y替换了1个核苷酸残基的序列。
13、在本发明的所述双链sirna，其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，反义链包含在如seq id no：40所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中所述反义链的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的。在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述反义链包含在如seq id no:40所示的序列中使用y替换了1个核苷酸残基的序列。
14、在本发明的所述双链sirna，其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述y替换发生在如seq id no:20所示序列的5’端的第1位～第19位(即所述y替换任选地发生在seq idno:20所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19位)。
15、在本发明的所述双链sirna，其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述y替换发生在如seq id no:40所示序列的5’端的第1位～第21位(即所述y替换任选地发生在seq idno:40所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21位)。
16、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，其中，所述正义链包含如5’-g●u●gugcacuucgcuucaca-3’(seq id no:19)所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中，所述正义链的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述y替换发生在如seq id no:19所示序列的5’端的第1位～第19位(即所述y替换任选地发生在如seq id no:19所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19位)，所述正义链的长度不超过23个核苷酸。
17、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或盐的一些实施例中，其中，所述反义链包含如5’-u●g●ugaagcgaagugcacac●u●u-3’(seq id no:36)所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中，所述反义链的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述y替换发生在所述反义链seq id no:36的5’端的第1～第21位(即所述y替换任选地发生在如seq id no:36所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19位)，所述反义链的长度不超过23个核苷酸。
18、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或盐的一些实施例中，其中，所述反义链包含在如5’-u●g●uga(agn)gcgaagugcacac●u●u-3’(seq id no:33)所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中，反义链的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述y替换发生在如seq id no:33所示序列5’端的第1～第21位((即所述y替换任选地发生在如seq id no:33所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19位))，所述反义链的长度不超过23个核苷酸。
19、如无特别说明，在本发明上下文中，大写字母c、g、u、a表示天然核苷酸的碱基组成；小写字母c、g、u、a分别表示其相应大写字母所代表的核苷酸上的核糖2位被甲氧基修饰；大写字母下面的下划线 表示该字母所代表的核苷酸上的核糖2位被氟修饰；agn为腺苷-乙二醇核酸；间隔号“●”表示与间隔号“●”左右相邻的两个核苷酸残基之间为硫代磷酸酯基连接；y为
20、在本发明的所述双链sirna，其缀合物或盐的一些实施例中，所述正义链包含以下核苷酸序列之一：
21、seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq idno:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17、seq idno:18、seq id no:19和seq id no:21；
22、所述正义链的长度不超过23个核苷酸。
23、在本发明的所述双链sirna，其缀合物或盐的一些实施例中，所述反义链包含以下核苷酸序列中的之一：
24、
25、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25、seq id no:26、seqid no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seqid no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38和seq id no:39；
26、所述反义链的长度不超过23个核苷酸。
27、在本发明的所述双链sirna，其缀合物或盐的一些实施例中，其中，所述双链sirna包含以下之一：
28、具有包含seq id no:15所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:25所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
29、具有包含seq id no:17所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:25所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
30、具有包含seq id no:15所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:26所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
31、具有包含seq id no:16所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:26所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
32、具有包含seq id no:17所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:26所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
33、具有包含seq id no:15所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:27所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
34、具有包含seq id no:16所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:27所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
35、具有包含seq id no:17所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:27所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
36、具有包含seq id no:16所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:28所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；
37、具有包含seq id no:17所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:28所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸；或
38、具有包含seq id no:18所示的核苷酸序列的正义链和具有包含seq id no:28所示的核苷酸序列的反义链，所述正义链和反义链的长度各自独立地不超过23个核苷酸。
39、在本发明的所述双链sirna，其缀合物或其盐的一些实施例中，双链sirna或其缀合物选自本发明说明书表1中的s1至s143、s146、s147和s150之一。在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，所述双链sirna缀合物包含所述双链sirna和缀合基团，即，所述双链sirna缀合物为所述双链sirna与缀合基团缀合后的缀合物，其中所述缀合基团包括但不限于l-96或daw40007-4，所述l-96和daw40007-4的结构分别为：
40、
41、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，所述缀合基团与双链sirna的正义链的3’末端或5’末端缀合。
42、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，所述缀合基团与双链sirna的正义链的3’末端缀合。
43、在本发明的所述双链sirna、其缀合物或其盐的一些实施例中，所述双链sirna通过磷酸酯基团、硫代磷酸酯基团或磷酸基团与所述缀合基团链接。
44、另一方面，本发明还涉及一种核苷酸残基y，其结构为：
45、另一方面，本发明还涉及一种化合物，其具有如式(i)所示的结构，或如式(i)所示的化合物的立体异构体、互变异构体或可接受的盐，
46、
47、r1为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基，所述各甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基独立地任选地被1、2、3或4个选自氘、羟基、氰基、f、cl、br、i、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代；
48、z和y1各自独立地为h、氘、羟基保护基团、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、磷酸酯基基团、硫代磷酸酯基团、亚磷酸酰胺基基团或氢磷酸盐基团；
49、m为固相支持体，优选为羟基或氨基功能化的固相支持体，更优选为树脂或cpg，进一步优选为大孔树脂或cpg，更进一步为优选胺甲基树脂、羟基树脂或-nhcpg；
50、r为-nhr2或-n＝ch-nrarb；
51、r2为氨基保护基团；
52、各ra和rb独立地为h或氨基保护基团，或ra、rb和与它们所连接的n原子一起形成5-6个环原子组成的杂环基，所述各5-6个环原子组成的杂环基独立地任选地被1、2、3或4个选自氘、羟基、氰基、f、cl、br、i、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代；
53、其中，各j独立地为1、2、3、4或5。
54、在本发明所述化合物的一些实施例中，z和y1各自独立地为h、氘、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、对甲氧基苄基二苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、c1-12烷基、c1-12烷基c(＝o)-、c1-12烷硅基、c6-10芳基c1-6烷基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、其中，各j、m、x、rx、ry、rc和rd具有本发明所述的含义。
55、在本发明所述化合物的一些实施例中，z和y1各自独立地为h、氘、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、对甲氧基苄基二苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、c1-10烷基、c1-10烷基c(＝o)-、c1-10烷硅基、c6-10芳基c1-4烷基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、其中，各j、m、x、rx、ry、rc和rd具有本发明所述的含义。
56、在本发明所述化合物的一些实施例中，z和y1各自独立地为h、氘、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、对甲氧基苄基二苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、c1-8烷基、c1-8烷基c(＝o)-、c1-8烷硅基、苯基c1-3烷基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、其中，各j、m、x、rx、ry、rc和rd具有本发明所述的含义。
57、在本发明所述化合物的一些实施例中，z和y1各自独立地为h、氘、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、对甲氧基苄基二苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、c1-6烷基、c1-6烷基c(＝o)-、c1-6烷硅基、苄基、苯乙基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、其中，各j、m、x、rx、ry、rc和rd具有本发明所述的含义。
58、在本发明所述化合物的一些实施例中，x为cl或br。
59、在本发明所述化合物的一些实施例中，各rx和ry独立地为羟基保护基团。
60、在本发明所述化合物的一些实施例中，各rc和rd独立地为h或氨基保护基团；或rc、rd和与它们所连接的n原子一起形成5-6个环原子组成的杂环基，所述5-6个环原子组成的杂环基独立地任选地被1、2、3或4个选自氘、羟基、氰基、f、cl、br、i、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代。
61、在本发明所述化合物的一些实施例中，r2为9-芴基甲氧基羰基、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、甲基、叔丁基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、苄基、对甲氧基苄基二苯甲基、三苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、c1-6烷氧基或r3c(＝o)-，其中，r3具有本发明所述的含义。
62、在本发明所述化合物的一些实施例中，各ra和rb独立地为独立地为h、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、9-芴基甲氧基羰基、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、苄基、对甲氧基苄基二苯甲基、三苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基或r4c(＝o)-，或ra、rb和与它们所连接的n原子一起形成吡咯烷基、吗啉基、哌啶基或哌嗪基，所述吡咯烷基、吗啉基、哌啶基和哌嗪基各自独立地任选地被1、2、3或4个选自氘、羟基、氰基、f、cl、br、i、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代，其中，r4具有本发明所述的含义。
63、在本发明所述化合物的一些实施例中，各r3和r4独立地为c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、苯基、卤素取代的苯基、c1-6烷基苯基或苄基。
64、在本发明所述化合物的一些实施例中，各r3和r4独立地为c1-4烷基、卤代c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯基、卤素取代的苯基、c1-4烷基苯基或苄基。
65、在本发明所述化合物的一些实施例中，各r3和r4独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、三氟甲基、二氟甲基、一氟甲基、三氯甲基、二氯甲基、一氯甲基、2,2,2-三氯乙基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-l-丙氧基、2-丁氧基、叔丁氧基、苯基、卤素取代的苯基、c1-3烷基苯基或苄基。
66、在本发明所述化合物的一些实施例中，各rx和ry独立地为苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、对甲氧基苄基二苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、氰基c1-6烷基、c1-6烷基、c1-6烷基c(＝o)-、c1-6烷硅基、苯基、卤素取代的苯基、苄基或苯乙基。
67、在本发明所述化合物的一些实施例中，各rx和ry独立地为苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、对甲氧基苄基二苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、cnch2-、cn(ch2)2-、cnch(ch3)2ch2-、cn(ch2)3-、cnch(ch3)2ch2ch2-、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、、c1-4烷基c(＝o)-、c1-4烷硅基、苯基、卤素取代的苯基、苄基或苯乙基。
68、在本发明所述化合物的一些实施例中，各rc和rd独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、9-芴基甲氧基羰基、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、苄基、对甲氧基苄基二苯甲基、三苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基或r4c(＝o)-，或rc、rd与它们所连接的n原子一起形成吡咯烷基、吗啉基、哌啶基或哌嗪基，所述吡咯烷基、吗啉基、哌啶基和哌嗪基各自独立地任选地被1、2、3或4个选自氘、羟基、氰基、f、cl、br、i、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代。
69、在本发明所述化合物的一些实施例中，本发明所述化合物具有如式(ii)所示的结构，
70、
71、在本发明的另一方面，本发明还涉及一种药物组合物，其包含本发明所述的双链sirna、其缀合物或其盐，和药学上可接受的载体。
72、在本发明的另一方面，本发明还涉及本发明所述的双链sirna缀合物、其缀合物和本发明所述所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防乙型肝炎疾病的药物中的用途。
73、在本发明的另一方面，本发明还涉及本发明所述的核苷酸残基在作为用于sirna的药物研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的应用，所述核苷酸残基的结构为：
74、在本发明所述的核苷酸残基应用的一些实施例中，所述sirna药物为本发明所述的双链sirna药物。
75、在本发明的另一方面，本发明还涉及本发明所述的化合物在dna核苷酸固相合成的原料、寡核苷酸药物的合成原料、sirna药物的合成原料、sirna药物研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的应用。
76、在本发明的再一方面，本发明还涉及本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用，其中，所述寡聚核苷酸是含有10～50个核苷酸或核苷酸碱基对的核苷酸序列，且所述寡聚核苷酸能够抑制或阻断基因的表达，所述核苷酸残基的结构为：
77、在本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用的一些实施例中，其中，所述基因为hbv基因。
78、在本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用的一些实施例中，其中，所述寡聚核苷酸为sirna。
79、在本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用的一些实施例中，其中，所述sirna包括正义链和反义链。
80、在本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用的一些实施例中，其中，所述核苷酸残基仅嵌入到所述sirna的正义链上。
81、在本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用的一些实施例中，其中，所述核苷酸残基仅嵌入到所述sirna的反义链上。
82、在本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用的一些实施例中，其中，所述核苷酸残基嵌入到所述sirna的正义链和反义链上。
83、在本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用的一些实施例中，其中，所述sirna的正义链包含如seq id no:19所示的序列。
84、在本发明所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用的一些实施例中，其中，所述sirna的反义链包含如seq id no:36或seq id no:33所示的序列。
85、本发明详细说明书
86、定义和一般术语
87、在本发明中，术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
88、在本发明中，术语“小干扰rna(small interfering rna；sirna)”是一类长度为17到30个核苷酸的双链rna分子，包含正义链和反义链。sirna通过形成沉默复合体(rna-induced silencing complex，risc)，介导risc途径的rna转录物靶向切割。具体地，sirna通过已知的rna干扰(rnai)过程指导mrna序列的特异性降解，抑制mrna翻译成氨基酸和转化为蛋白质。例如，sirna可调节(例如抑制)乙肝病毒在细胞中的表达。
89、在本发明中，术语“反义链(或称引导链)”是指包括与靶序列(如乙肝病毒的mrna中一段序列)基本上互补的区域的sirna链。“正义链(或称随从链)”是指含有与反义链基本上互补的区域的sirna链。本发明所述双链sirna中的反义链或正义链中的含有一个或多个(例如，2、3、4或5个)核苷酸残基y，所述y具有本发明所述的结构。
90、术语“基本上互补”是指完全互补或至少部分互补，例如反义链与靶序列完全互补或至少部分互补。在部分互补的情况下，错配可以存在于分子的内部或末端区域内，其中，最耐受的错配存在于末端区域内，例如在sirna任一链的5’-和/或3’-末端的5、4、3或2个核苷酸内部。
91、需要说明的是，反义链与mrna的“至少部分基本上互补”是指反义链具有与感兴趣的mrna(例如编码乙肝病毒的mrna)的一个连续部分基本互补的多核苷酸。或者，如果一种多核苷酸与编码乙肝病毒的mrna的部分基本上非间断互补，则该反义链与所述乙肝病毒的mrna的至少一部分互补。
92、在本发明中，术语“靶序列”是指在编码乙肝病毒基因的转录期间形成的mrna分子的核苷酸序列的连续部分，包括为初级转录产物的rna加工产物的mrna。
93、本公开中，双链sirna类似物是指核糖核酸分子的复合体，其具有双链结构，包含两条反向平行的且基本上互补的核酸链，其相对于靶rna具有“正义”和“反义”定向。在本公开中，“互补”具有本领域技术人员周知的含义，即，在双链核酸分子中，一条链的碱基与另一条链上的碱基以互补的方式相配对。嘌吟碱基腺嘌吟(a)始终与嘧啶碱基尿嘧啶(u)相配对；嘌呤碱基鸟嘌呤(g)始终与嘧啶碱基胞嘧啶(c)相配对。每个碱基对都包括一个嘌呤和一个嘧啶。当一条链上的腺嘌呤始终与另一条链上的尿嘧啶配对，以及鸟嘌呤始终与胞嘧啶配对时，两条链被认为是彼此相互补的，以及从其互补链的序列中可以推断出该链的序列。
94、在本发明中，术语“抑制乙型肝炎病毒基因的表达”包括任何水平的乙型肝炎病毒(简称乙肝病毒)基因的抑制，例如，乙肝病毒基因表达的至少部分抑制，如抑制至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。其中，可以基于与乙肝病毒基因表达相关的任何变量的水平来评价乙肝病毒基因的表达，例如，乙肝病毒的mrna水平或乙肝病毒蛋白水平。可以通过与对照水平相比，这些变量中一个或多个的绝对或相对水平的降低来评价抑制。对照水平可以是本领域中利用的任何类型的对照水平，例如，给药前的基线水平，或从未处理或用对照(如，仅用缓冲剂的对照或无活性剂对照)处理的相似受试者、细胞或样品测定的水平。
95、在本发明中，“药物组合物”可指用于疾病的治疗，也可用于细胞的体外培养实验。用于疾病的治疗时，术语“药物组合物”通常是指单位剂量形式，并且可以通过制药领域中熟知的方法的任何一种进行制备。所有的方法包括使活性成分与构成一种或多种附属成分的辅料相结合的步骤。通常，通过均匀并充分地使活性双链sirna与液体辅料、细碎固体辅料或这两者相结合，制备组合物。
96、本发明所述的sirna含有核苷酸基团作为基本结构单元，本领域技术人员公知，所述核苷酸基团含有磷酸基团、核糖基团和碱基，在此不再赘述。所述sirna中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，优先为未修饰的核苷酸。本发明的双链sirna含有正义链和反义链。
97、本发明所述“嵌入”表示嵌入基团与序列中至少一个核苷酸残基相连接，包括在序列中使用嵌入基团(如y)替换了一个核苷酸残基。
98、本发明所述“嵌入基团”为天然核苷酸碱基的类似物的残基，不同于任何公开专利的天然核苷酸碱基，将其引入核酸序列后，可使序列具备一定功能(如带来不可预料的活性)。如本发明所述y，其作为嵌入基团嵌入寡聚核苷酸序列中后，能够抑制基因的表达，进而产生不可预料的活性。
99、本发明所述“寡聚核苷酸嵌入基团”是指所述嵌入基团与寡聚核苷酸中至少一个核苷酸残基相连接，包括在寡聚核苷酸中使用嵌入基团(如y)替换了一个核苷酸残基。
100、本发明所述y嵌入的序列是指所述序列中存在至少一个核苷酸残基与y相连接，包括如在序列中使用y替换了一个核苷酸残基的序列。本发明所述y嵌入的序列还可以任选被修饰，如甲氧基修饰、氟代修饰和硫代磷酸酯基连接等。本发明所述y嵌入的序列包括但不限于：y嵌入的sirna、y嵌入的正义链和y嵌入的反义链。
101、本发明所述的缀合基团包括药学上可接受的缀合基团，一般来说，药学上可接受的缀合基团包含药学上可接受的靶向分子和任选的接头(linker)。示例性的缀合基团、接头、靶向分子的种类可参见wo2015006740a2和cn114555188a的公开内容。示例性的缀合基团包括但不限于本发明所述的l96、nag37或daw40007-4。
102、除非另有说明，“缀合”是指两个或多个各自具有特定功能的化学部分之间以共价连接的方式彼此连接；相应地，“缀合物”是指该各个化学部分之间通过共价连接而形成的化合物。
103、本发明所述双链sirna缀合物是双链sirna和药学上可接受的缀合基团连接形成的化合物，并且双链sirna和药学上可接受的缀合基团共价连接。
104、在本发明中，术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。优选地，本发明所述的“药学上可接受的”是指联邦监管机构或国家政府批准的或美国药典或其他一般认可药典上列举的在动物中、特别是人体中使用的。
105、在本发明中，术语“药学上可接受的辅料”均可包括任何溶剂、固体赋形剂、稀释剂或其他液体赋形剂等等，适合于特有的目标剂型。除了任何常规的辅料与本发明的双链sirna或其缀合物或其盐不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本发明所考虑的范围。
106、在本文中，术语“治疗”是指用于获得期望的药理学和/或生理学效果。所述效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病导致的不良作用而言可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物、特别是人的疾病，包括：(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病或病症发生；(b)抑制疾病，例如阻滞疾病发展；或(c)缓解疾病，例如减轻与疾病相关的症状。本文使用的“治疗”涵盖将药物、rnai试剂或sirna给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药，包括但不限于将含本文所述rnai试剂、sirna或sirna缀合物的药物给予有需要的个体。
107、如无特别说明，在本发明上下文中，大写字母c、g、u、a表示天然核苷酸的碱基组成；小写字母c、g、u、a分别表示其相应大写字母所代表的核苷酸上的核糖2位被甲氧基修饰；大写字母下面的下划线 表示该字母所代表的核苷酸上的核糖2位被氟修饰；间隔号“●”表示与间隔号“●”左右相邻的两个核苷酸残基之间为硫代磷酸酯基连接，如核苷酸残基之间无“●”，则表示核苷酸残基之间是通过磷酸酯基链接例如，“g●u"表示g和u残基之间通过硫代磷酸酯基连接，“gu"表示g和u残基之间通过磷酸酯基连接；agn为腺苷-乙二醇核酸(glycol nucleic acid，gna，)；双链sirna中的y表示其中，本发明所述的核糖2位被氟修饰是指核糖2位的羟基被f替换；所述的核糖2位被甲氧基修饰是指核糖2位的羟基被甲氧基替换。
108、在本发明上下文中，bz表示苯甲酰基；mmtr表示4’-甲氧基三苯甲基；dmtr表示4’,4’-二甲氧基三苯基甲基。
109、本发明中，“磷酸酯基团”、“磷酸酯基”、“磷酸酯键”可互换使用，包括磷酸一酯基、磷酸二酯基或磷酸三酯基。“硫代磷酸酯基团”中的“磷酸酯基团”也具有同样的含义。若无特别说明，天然核苷酸间磷酸酯基为磷酸二酯基。如无特殊说明，本发明所述的y替换了一或多个核苷酸残基的序列，是指1个y对应替换1个核苷酸残基，而非1个y替换2个或以上核苷酸残基，如果是替换2个核苷酸残基则应当是2个y分别替换2个核苷酸残基。如，反义链包含在如seq id no：40所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，则应当是表示，反义链包含在如seq id no：40所示的序列中使用0个、1个、2个、3个、4个或5个y分别替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列。
110、术语“氧代”指＝o基团。例如，碳原子与氧原子通过双键连接，其中形成酮或醛。
111、如本文所使用，“化学修饰”或“修饰”意指当与天然存在的对应物相比时具有化学差异的结构，包括经化学手段的所有改变，例如化学部分的添加或去除，或以一个化学部分取代另一个化学部分。
112、本发明化合物可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本发明含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
113、可以通过手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(r)-和(s)-异构体以及d和l异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
114、本发明还包括一些与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本发明化合物。可结合到本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2h、3h、11c、13c、14c、13n、15n、15o、17o、18o、31p、32p、35s、18f、123i、125i和36cl等。
115、除另有说明，当一个位置被特别地指定为氘(d)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即，至少10％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘、至少2000倍的丰度的氘、至少3000倍的丰度的氘、至少4000倍的丰度的氘、至少5000倍的丰度的氘、至少6000倍的丰度的氘或更高丰度的氘。本发明还包括各种氘化形式的式(i)化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式(i)化合物。在制备氘化形式的式(i)化合物时可使用市售的氘代起始物质，或可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
116、本发明所述的缀合基团可以增强治疗剂向诸如人或动物的对象内特定靶位置(例如，特定器官或组织)的递送。在本发明的一些实施方式中，所述缀合基团可以增强表达抑制性双链sirna的靶向递送。在本发明的一些实施方式中，所述缀合基团可以增强表达抑制性双链sirna向肝脏的递送。
117、本发明所述的缀合基团可以直接或间接地连接至化合物，诸如治疗剂，例如，表达抑制性寡聚核苷酸，例如，表达抑制性寡聚核苷酸的3’或5’末端。在本发明的一些实施方式中，表达抑制性寡聚核苷酸包括一个或多个修饰的核苷酸。在本发明的一些实施方式中，表达抑制性寡聚核苷酸是rnai试剂，诸如包含正义链和反义链的双链sirna试剂。在本发明的一些实施方式中，本发明所公开的缀合基团连接至双链sirna试剂的正义链的3’末端。在一些实施方式中，本发明所公开的缀合基团经由磷酸酯、硫代磷酸酯或膦酸酯基团在双链sirna试剂正义链3’末端与表达抑制性寡聚核苷酸试剂连接。
118、本发明中立体化学的定义和惯例的使用通常参考以下文献：s.p.parker,ed.,mcgraw-hill dictionary of chemical terms(1984)mcgraw-hill book company,newyork；and eliel,e.and wilen,s.,"stereochemistry of organic compounds",johnwiley&sons,inc.,new york,1994.本发明的化合物可以包含不对称中心或手性中心，因此存在不同的立体异构体。本发明的化合物所有的立体异构形式，包括但绝不限于，非对映异构体，对映异构体，阻转异构体，和它们的混合物，如外消旋混合物，组成了本发明的一部分。很多有机化合物都以光学活性形式存在，即它们有能力旋转平面偏振光的平面。在描述光学活性化合物时，前缀d、l或r、s用来表示分子手性中心的绝对构型。前缀d、l或(+)、(-)用来命名化合物平面偏振光旋转的符号，(-)或l是指化合物是左旋的，前缀(+)或d是指化合物是右旋的。这些立体异构体的化学结构是相同的，但是它们的立体结构不一样。特定的立体异构体可以是对映体，异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。50：50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，这可能导致化学反应过程中没有立体选择性或立体定向性。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指等摩尔的两个对映异构体的混合物，缺乏光学活性。
119、术语“互变异构体”或“互变异构的形式”是指不同能量的结构的同分异构体可以通过低能垒互相转化。例如质子互变异构体(即质子转移的互变异构体)包括通过质子迁移的互变，如酮-烯醇和亚胺-烯胺的同分异构化作用。
120、术语“组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体的药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
121、术语“可药用赋形剂”或“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何已经被美国食品和药物管理局批准对于人类或家畜动物使用可接受的任何助剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增香剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
122、如无特殊说明，本发明的“化合物”、“配体”、“核酸缀合物”、“双链sirna缀合物”、“双链sirna”、“核酸”均可独立地以盐、混合盐或非盐(例如游离酸或游离碱)的形式存在。当以盐或混合盐的形式存在时，其可为药学上可接受的盐。
123、术语“可接受的盐”包括可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。“可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、2,2-二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、十一碳烯酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、癸二酸盐、己二酸盐、戊二酸盐、丙二酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、肉桂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、谷氨酸盐、焦谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、萘二磺酸盐等。这些盐可通过本领域已知的方法制备。
124、“药学上可接受的碱加成盐”是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐及镁盐，优选钠盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下的盐：伯胺类、仲胺类及叔胺类，被取代的胺类，包括天然的被取代胺类、环状胺类及碱性离子交换树脂，例如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶、聚胺树脂等。优选的有机碱包括异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱及咖啡因。这些盐可通过本领域已知的方法制备。
125、像本发明所描述的，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基所取代，如上面的通式化合物，或者像实施例里面特殊的例子，子类，和本发明所包含的一类化合物。一般而言，术语“取代的”，表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以有一个取代基在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不止一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。
126、另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本文中通篇采用的描述方式“各…和…独立地为”、“…和…各自独立地为”和“…和…分别独立地为”可以互换，应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
127、在本发明中，术语“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。
128、在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“c1-6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、c3烷基、c4烷基、c5烷基和c6烷基。
129、本发明使用的术语“烷基”包括1-20个碳原子饱和直链或支链的单价烃基，其中烷基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。其中一些实施例是，烷基基团含有1-12个碳原子，另外一些实施例是，烷基基团含有1-10个碳原子，另外一些实施例是，烷基基团含有1-8个碳原子，另外一些实施例是，烷基基团含有1-6个碳原子，另外一些实施例是，烷基基团含有1-4个碳原子，另外一些实施例是，烷基基团含有1-3个碳原子。烷基基团更进一步的实例包括，但并不限于，甲基(me，-ch3)、乙基(et，-ch2ch3)、正丙基(n-pr，-ch2ch2ch3)、异丙基(i-pr，-ch(ch3)2)、正丁基(n-bu，-ch2ch2ch2ch3)、2-甲基丙基或异丁基(i-bu，-ch2ch(ch3)2)、1-甲基丙基或仲丁基(s-bu，-ch(ch3)ch2ch3)、叔丁基(t-bu，-c(ch3)3)、正戊基(-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、正己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3)、正庚基、正辛基、正壬基、正葵基，等等。
130、术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另外详细说明，所述烷氧基基团含有1-12个碳原子。在一些实施方案中，烷氧基基团含有1-8个碳原子；在另一些实施方案中，烷氧基基团含有1-6个碳原子；在另一些实施方案中，烷氧基基团含有1-4个碳原子；在又一些实施方案中，烷氧基基团含有1-3个碳原子。所述烷氧基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
131、烷氧基基团的实例包括，但并不限于，甲氧基(meo、-och3)、乙氧基(eto,-och2ch3)、1-丙氧基(n-pro,n-丙氧基,-och2ch2ch3)、2-丙氧基(i-pro,i-丙氧基,-och(ch3)2)、1-丁氧基(n-buo,n-丁氧基,-och2ch2ch2ch3)、2-甲基-l-丙氧基(i-buo,i-丁氧基,-och2ch(ch3)2)、2-丁氧基(s-buo,s-丁氧基,-och(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙氧基(t-buo,t-丁氧基,-oc(ch3)3)、1-戊氧基(n-戊氧基,-och2ch2ch2ch2ch3)、2-戊氧基(-och(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊氧基(-och(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁氧基(-oc(ch3)2ch2ch3)，3-甲基-2-丁氧基(-och(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-l-丁氧基(-och2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-l-丁氧基(-och2ch(ch3)ch2ch3)等等。
132、术语“烯基”表示含有2-12个碳原子，或2-8个碳原子，或2-6个碳原子，或2-4个碳原子的直链或支链的一价、二价或多价烃基，其中至少有一个位置的c-c为sp2双键，其中烯基的基团可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基所取代，包括有“顺”、“反”或"z"、"e"异构体，其中具体的实例包括，但并不限于，乙烯基(-ch＝ch2)，丙烯基(-ch＝chch3)、烯丙基(-ch2ch＝ch2)等等，其中所述烯基基团可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
133、术语“m-m1个环原子组成的”表示所述环状基团由m-m1个环原子所组成，所述的环原子包括碳原子和/或o、n、s、p等杂原子。例如，“3-6个环原子组成的杂环基”代表其包括3、4、5或6个环原子组成的单杂环基。
134、术语“杂环基”是指包含3-12个环原子的，非芳香族的饱和或部分不饱和的单环、双环或三环体系，其中至少一个环原子选自氮、硫或氧原子。其中，所述杂环基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。除非另外说明，杂环基可以是碳基或氮基，且-ch2-基团可以任选地被-c(＝o)-或-c(＝s)-替代。环的硫原子可以任选地被氧化成s-氧化物。环的氮原子可以任选地被氧化成n-氧化物。在一些实施方案中，杂环基为3-12个环原子组成的杂环基，在一些实施方案中，杂环基为5-10个环原子组成的杂环基，在一些实施方案中，杂环基为3-6个环原子组成的杂环基，在一些实施方案中，杂环基为4-6个环原子组成的杂环基，在一些实施方案中，杂环基为5-6个环原子组成的杂环基，在另一些实施方案中，杂环基为4个原子组成的杂环基，是指包含4个环原子的单价或多价的，饱和或部分不饱和的，非芳香性的单环，其中至少一个环原子选自氮、硫和氧原子。在另一些实施方案中，杂环基为5个原子组成的杂环基，是指包含5个环原子的单价或多价的，饱和或部分不饱和的，非芳香性的单环，其中至少一个环原子选自氮、硫和氧原子。在另一些实施方案中，杂环基为6个原子组成的杂环基，是指包含6个环原子的单价或多价的，饱和或部分不饱和的，非芳香性的单环，其中至少一个环原子选自氮、硫和氧原子。“杂环基”同样也包括杂环基团与饱和或部分不饱和环或杂环稠合所形成的基团。杂环的实例包括，但并不限于，吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、哌嗪基、高哌嗪基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、高哌啶基、环氧丙基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二氧杂环己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3h-吲哚基喹嗪基和n-吡啶基尿素。杂环基团的实例还包括，1,1-二氧代硫代吗啉基，其中环上碳原子被氧代(＝o)取代的实例实例包括，但不限于嘧啶二酮基、1,2,4-噻二唑-5(4h)-酮基，1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮基，1h-1,2,4-三唑-5(4h)-酮基等，其中环上碳原子被基团＝s所取代的实例包括，但不限于1,2,4-噁二唑-5(4h)-硫酮基，1,3,4-噁二唑-2(3h)-硫酮基等。
135、术语“杂原子”表示一个或多个o、s、n、p和si，包括n、s和p任何氧化态的形式；伯、仲、叔胺和季铵盐的形式；或者杂环中氮原子上的氢被取代的形式，例如，n(像3,4-二氢-2h-吡咯基中的n)，nh(像吡咯烷基中的nh)或nr(像n-取代的吡咯烷基中的nr，其中，r表示本发明所述的取代基)。
136、术语“烷硅基”和“烷基硅基”表示甲硅基(-sih3)基团中的氢原子分别独立地被1个、2个或3个烷基基团所取代。其中，一些实施方案是，烷基硅基是1个、2个或3个c1-12烷基连接到硅原子上形成的较低级的烷基硅基基团。在另一些实施方案中，烷硅基是1个、2个或3个c1-9烷基连接到硅原子上形成的较低级的烷基硅基基团。在另一些实施方案中，烷硅基是1个、2个或3个c1-6烷基连接到硅原子上形成的较低级的烷基硅基基团。在另一些实施方案中，烷硅基是1个、2个或3个c1-4烷基连接到硅原子上形成的较低级的烷基硅基基团。还在另外一些实施方案中，烷硅基是1个、2个或3个c1-3烷基连接到硅原子上形成的较低级的烷基硅基基团。合适的烷硅基基团可以是单烷基硅基、二烷基硅基或三烷基硅基，烷硅基的实例包括，但并不限于，三甲基硅基(-si(ch3)3)、三乙基硅基(-si(ch2ch3)3)、三正丙基硅基(-si(ch2ch2ch3)3)等等。
137、术语“羟基保护基”是指一个不稳定的化学部分，它在一个或多个合成程序过程中保护羟基基团不发生不希望的反应。在该一个或多个合成程序后，该羟基保护基可被选择性地去除。本领域中已知的羟基保护基总体上描述于t.h.格林(greene)和p.g.m.伍兹(wuts)，有机合成中的保护基(protective groups in organic synthesis)，第3版，约翰威利父子公司(john wiley&sons)，纽约(1999)中。本发明羟基保护基的例子包括但不限于c1-12烷基、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、甲氧羰基、叔-丁氧基羰基、异丙氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、2-糠基氧基羰基、烯丙氧羰基、乙酰基(ac或-c(o)ch3)、甲酰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基(bz或-c(o)c6h5)、c1-10烷基(甲基，叔丁基等)、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、c6-10芳基c1-4烷基(如苄基，苯乙基等)、对甲氧基苄基二苯甲基、三苯甲基(triphenylmethyl或trityl)、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、c1-10烷硅基(如三甲基甲硅烷基(tms或-si(ch3)3))、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、mmtr、dmtr或4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基等。
138、术语“氨基保护基”是指在合成程序过程中保护氨基基团不发生不希望的反应的不稳定化学部分。在该一个或多个合成程序后，如此处所述的氨基保护基可被选择性地去除。本领域中已知的氨基保护基总体上描述于t.h.格林(greene)和p.g.m.伍兹(wuts)，有机合成中的保护基(protective groups in organic synthesis)，第3版，约翰威利父子公司(john wiley&sons)，纽约(1999)中。氨基保护基的实例包括但不限于乙酰基、叔丁氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基以及苄氧基羰基等。
139、术语“固相支持体”具体表示在其上可发生寡核苷酸合成的任何颗粒、珠或表面。例如无机固相支持体和有机固相支持体，均可选择用于在本发明实施例中。无机固相支持体优选地选自硅胶和可控微孔玻璃珠(controlled-pore glass，简称cpg)。有机固相支持体为树脂，优选大孔树脂，更优选高度交联的聚苯乙烯、tentagel(由低交联的聚苯乙烯基质组成的接枝共聚物，聚乙二醇(peg或poe)接枝于其上)、聚乙烯乙酸酯(pva)、波罗斯(poros)-聚苯乙烯/二乙烯基苯的共聚物、氨基聚乙二醇和纤维素等。本发明的优选实施例利用基于cpg的固相支持体。许多其他可购买的固相支持体均属于本发明。
技术特征：
1.一种双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述双链sirna包括一条正义链和一条反义链，且所述双链sirna包含一个或多个y，所述y为所述双链sirna中的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的。
2.根据权利要求1所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述反义链包含如5’-ugugaagcgaagugcacacuu-3’(seq id no:40)所示的序列，或在如seq id no:40所示序列中使用y替换了一个或多个核苷酸残基的序列；其中，所述反义链中的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述反义链的长度不超过23个核苷酸。
3.根据权利要求1或2所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述正义链包含如5’-gugugcacuucgcuucaca-3’(seq id no:20)所示的序列，或在如seq id no:20所示序列中使用y替换了一个或多个核苷酸残基的序列，其中，所述正义链中的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述正义链的长度不超过23个核苷酸。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述正义链或反义链中的70％、75％、80％、85％、90％或95％以上的核苷酸和y都是经修饰的；任选地，所述双链sirna中的每一个核苷酸和y都是经修饰的。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中所述修饰选自以下中的至少之一：2’-甲氧基修饰、2’-甲氧基乙基修饰、2’-氟代修饰、硫代磷酸酯基连接、2’-脱氧修饰、2’-氨基修饰、锁核酸修饰、解锁核酸修饰、乙二醇核酸修饰和5’-乙烯基磷酸酯修饰。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述正义链包含在如seq id no:20所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中所述正义链中的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的。
7.根据权利要求1-6任一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，反义链包含在如seq id no:40所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中所述反义链的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述y替换发生在如seq id no:20所示序列的5’端的第1位～第19位。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述y替换发生在如seq id no:40所示序列的5’端的第1位～第21位。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述正义链包含在如5’-g●u●gugcacuucgcuucaca-3’(seq id no:19)所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中，所述正义链的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述y替换发生在所述seq id no:19的5’端的第1～第19位，所述正义链的长度不超过23个核苷酸。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述反义链包含在如5’-u●g●ugaagcgaagugcacac●u●u-3’(seq id no:36)所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中，所述反义链的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述y替换发生在所述反义链seq id no:36的5’端的第1～第21位，所述反义链的长度不超过23个核苷酸。
12.根据权利要求1-10任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述反义链包含在如5’-u●g●uga(agn)gcgaagugcacac●u●u-3’(seq id no:33)所示的序列中使用y替换了0个、1个、2个、3个、4个或5个核苷酸残基的序列，其中，反义链的每一个核苷酸和y各自独立地是经修饰的或未修饰的，所述y替换发生在如seq id no:33所述序列5’端的第1～第21位，所述反义链的长度不超过23个核苷酸。
13.根据权利要求1-12任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，所述正义链包含以下核苷酸序列中的之一：
14.根据权利要求1-13任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，所述反义链包含以下核苷酸序列之一：
15.根据权利要求1-14任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述双链sirna包含以下之一：
16.根据权利要求1-15任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述双链sirna或其缀合物选自s1至s143、s146、s147和s150中的之一。
17.根据权利要求1-16任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述双链sirna缀合物为所述双链sirna与缀合基团l96或daw40007-4缀合后的缀合物，所述缀合基团l-96和daw40007-4的结构分别为：
18.根据权利要求17所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述缀合基团与双链sirna的正义链的3’末端或5’末端缀合，优选地与双链sirna的正义链的3’末端缀合。
19.根据权利要求17或18所述的双链sirna、其缀合物或其盐，其中，所述双链sirna通过磷酸酯基团、硫代磷酸酯基团或磷酸基团与所述缀合基团链接。
20.一种核苷酸残基y，其结构为：
21.一种化合物，其具有如式(i)所示的结构，或如式(i)所示的化合物的立体异构体、互变异构体或可接受的盐，
22.根据权利要求21所述化合物，其中，z和y1各自独立地为h、氘、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、对甲氧基苄基二苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、c1-12烷基、c1-12烷基c(＝o)-、c1-12烷硅基、c6-10芳基c1-6烷基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、或
23.根据权利要求21或22所述化合物，其中，r2为9-芴基甲氧基羰基、苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、甲基、叔丁基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、苄基、对甲氧基苄基二苯甲基、三苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、c1-6烷氧基或r3c(＝o)-；
24.根据权利要求22-23任意一项所述化合物，各rx和ry独立地为苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、联苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、对甲氧基苄基二苯甲基、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、氰基c1-6烷基、c1-6烷基、c1-6烷基c(＝o)-、c1-6烷硅基、苯基、卤素取代的苯基、苄基或苯乙基；或
25.根据权利要求21-24任意一项所述化合物，其具有如式(ii)所示的结构，
26.一种药物组合物，其包含权利要求1-19任意一项所述的双链sirna、其缀合物或其盐，和药学上可接受的载体。
27.如权利要求1-19任意一项所述的双链sirna缀合物、其缀合物和其盐或如权利要求26所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防乙型肝炎疾病的药物中的用途。
28.如权利要求21-25任意一项所述的化合物在dna核苷酸固相合成的原料、寡核苷酸药物的合成原料、sirna药物的合成原料、sirna药物研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的应用。
29.如权利要求20所述的核苷酸残基作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用，其中，所述寡聚核苷酸是含有10～50个核苷酸或核苷酸碱基对的核苷酸序列，且所述寡聚核苷酸能够抑制或阻断基因的表达。
30.根据权利要求29所述的应用，其中，所述基因为hbv基因。
31.根据权利要求29或30所述的应用，其中，所述寡聚核苷酸为sirna。
32.根据权利要求31任意一项所述的应用，其中，所述sirna包括正义链和反义链。
33.根据权利要求32所述的应用，其中，所述核苷酸残基仅嵌入到所述sirna的正义链上。
34.根据权利要求32或33所述的应用，其中，所述核苷酸残基仅嵌入到所述sirna的反义链上。
35.根据权利要求32-34任意一项所述的应用，其中，所述核苷酸残基嵌入到所述sirna的正义链和反义链上。
36.根据权利要求32-35任意一项所述的应用，其中，所述sirna的正义链包含如seq idno:19所示的序列。
37.根据权利要求32-36任意一项所述的应用，其中，所述sirna的反义链包含如seq idno:36或seq id no:33所示的序列。
技术总结
本发明提供一种新型的双链siRNA、其缀合物及其用途。本发明提供了一种双链siRNA、其缀合物或其盐，还涉及所述双链siRNA及其缀合物在制备用于治疗和/或预防乙型肝炎疾病的药物中的用途。另外还涉及一种新型的化合物，以及所述化合物在DNA核苷酸固相合成的原料、siRNA药物合成的原料、siRNA药物的研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的用途，尤其是在本发明所述双链siRNA药物的合成原料方面的用途。并且，本发明还涉及一种新型的核苷酸残基，以及其在用于siRNA药物研究、基因功能研究和/或全基因库的筛选方面的应用，以及在作为寡聚核苷酸嵌入基团的应用。
技术研发人员：任青云,邹致富,陈允甫,陈慧梦,汪璞,张英俊
受保护的技术使用者：广东东阳光药业股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5