一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法与流程

本申请涉及高效液相色谱分析领域，尤其是涉及一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法。

背景技术：

1、贝美素噻吗洛尔滴眼液为贝美前列素与噻吗洛尔组成的复方制剂。贝美前列素为一种合成的前列酰胺，是具有降低眼压活性的前列腺素结构类似物。贝美前列素选择性地模拟了前列酰胺的作用，通过增加房水经小粱网及葡萄巩膜两条外流途径而降低眼压(iop)。噻吗洛尔是一种非选择性β-肾上腺能受体阻滞剂，对高眼压患者和正常人均有降低眼压作用。噻吗洛尔的降低眼压确切机理尚不清楚，眼压描记和房水荧光光度研究提示其降眼压作用与减少房水生成有关。噻吗洛尔没有明显的内源性拟交感活性和局麻作用，对心肌无直接抑制作用。

2、通常来说，复方药物引入的杂质种类较多，且杂质间性质差异大，需对引入的杂质进行控制。目前，贝美素噻吗洛尔滴眼液质量标准在美国药典、日本药典、国家药品监督管理局进口药品注册标准等均未有收载。有鉴于此，开发一种专属性强、高效且精确的分析方法，对贝美素噻吗洛尔滴眼液进行质量分析，具有重要意义。

技术实现思路

1、为实现贝美素噻吗洛尔滴眼液中杂质含量的精确分析控制，本申请提供了一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法。

2、一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，采用hplc法，包括如下步骤：

3、配制供试品溶液：取供试样品用水溶解稀释即得；

4、配制对照溶液：取马来酸噻吗洛尔用水溶解稀释即得；

5、配制系统适用性溶液：取贝美素噻吗洛尔滴眼液及其相关杂质，混合后用水稀释即得；

6、配制空白辅料溶液：取氯化钠、磷酸氢二钠七水合物、枸橼酸、苯扎氯铵和贝美前列素，加水溶解稀释即得；

7、保留时间确定：取空白辅料溶液和系统适用性溶液进样分析，确定贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的保留时间；

8、目标物质分离检测：取供试品溶液和对照溶液进样检测，按主成分外标法计算供试品溶液中相关杂质的含量；

9、所述hplc以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以辛烷磺酸钠缓冲液为流动相a，以甲醇为流动相b，进行梯度洗脱。

10、本申请的贝美素噻吗洛尔滴眼液的主要成分为贝美前列素和马来酸噻吗洛尔，其分子结构如下所示。基于此，本申请的分析方法采用的对照品为马来酸噻吗洛尔，其有利于提高分析结果的可靠性和准确度。

11、贝美前列素

12、

13、马来酸噻吗洛尔

14、优选的，所述相关杂质包括：

15、杂质b：3-(叔丁基氨基)-2-((4-吗啉-1,2,5-噻二唑-3-基)氧基)-1-丙醇马来酸盐；

16、杂质c：n-(叔丁基)-2,3-双((4-吗啉-1,2,5-噻二唑-3-基)氧基)-1-丙胺马来酸盐；

17、杂质d：4-吗啉-1,2,5-噻二唑-3-醇；

18、杂质e：(s,z)-4-((1-(叔丁基氨基)-3-((4-吗啉-1,2,5-噻二唑-3-基)氧基)丙-2-基)氧)-4-氧代丁-2-烯酸；

19、杂质f：4-(4-氯-1,2,5-噻二唑-3-基)吗啉；

20、杂质g：4-吗啉-1,2,5-噻二唑-3(2h)-酮1-氧化物；

21、杂质h：2-(3-(叔丁基氨基)-2-羟丙基)-4-吗啉-1,2,5-噻二唑-3(2h)-酮；

22、杂质i：1-(乙基氨基)-3-((4-吗啉-1,2,5-噻二唑-3-基)氧基)-2-丙醇；

23、杂质j：3,3'-((1,2,5-噻二唑-3,4-二基)双(氧))双(1-(叔丁基氨基)丙醇)。

24、优选的，所述梯度洗脱设置如下：

25、0～20min：45～50％a→27～33％a；

26、20～30min：27～33％a→27～33％a；

27、30～31min：27～33％a→45～50％a；

28、31～40min：45～50％a→45～50％a。

29、优选的，所述梯度洗脱设置如下：

30、0～20min：48％a→30％a；

31、20～30min：30％a→30％a；

32、30～31min：30％a→48％a；

33、31～40min：48％a→48％a。

34、优选的，所述梯度洗脱的流速为0.9～1.1ml/min，更优选为1.0ml/min。

35、优选的，所述供试品溶液中，噻吗咯尔含量为1mg/ml。

36、优选的，所述对照溶液中，噻吗咯尔含量为2μg/ml。

37、优选的，所述辛烷磺酸钠缓冲液的ph值为2.8～3.2；更优选为3.0。

38、优选的，所述辛烷磺酸钠缓冲液中辛烷磺酸钠盐浓度为4.3～4.34g/l；更优选为4.32g/l。

39、优选的，辛烷磺酸钠缓冲液通过向辛烷磺酸钠盐水溶液中加入冰醋酸调节得到。

40、优选的，所述十八烷基硅烷键合硅胶的填料颗粒粒径为2～5μm；所述hplc采用的色谱柱柱温为33～37℃。

41、优选的，所述hplc采用的检测器的检测波长为295±2nm。

42、综上所述，本申请具有如下有益效果：

43、本发明的方法可以有效的分离贝美素噻吗洛尔滴眼液的相关杂质并测定其含量，且该方法具有专属性强、灵敏度高、高效精确、重复性及耐用性良好，操作简单，结果稳定可靠等优点。对于实现贝美素噻吗洛尔滴眼液的质量控制具有极其重要的意义。

技术特征：

1.一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，采用hplc法，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，所述相关杂质包括：

3.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱设置如下：

4.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱设置如下：

5.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，所述供试品溶液中，噻吗咯尔含量为1mg/ml；所述对照溶液中，噻吗咯尔含量为2μg/ml。

6.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，所述辛烷磺酸钠缓冲液的ph值为2.8～3.2。

7.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，所述辛烷磺酸钠缓冲液的ph值为3.0。

8.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，述辛烷磺酸钠缓冲液中辛烷磺酸钠盐浓度为4.3～4.34g/l。

9.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶的填料颗粒粒径为2-5μm；所述hplc采用的色谱柱柱温为33-37℃。

10.根据权利要求1所述的一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，其特征在于，所述hplc采用的检测器的检测波长为295±2nm。

技术总结
本申请公开了一种贝美素噻吗洛尔滴眼液相关杂质的分离测定方法，采用HPLC法：供试品溶液：取供试样品用水溶解稀释；对照溶液：取马来酸噻吗洛尔用水溶解稀释；系统适用性溶液：取贝美素噻吗洛尔滴眼液及其相关杂质，混合后用水稀释；空白辅料溶液：取氯化钠、磷酸氢二钠七水合物、枸橼酸、苯扎氯铵和贝美前列素，加水稀释；保留时间确定：取空白辅料溶液和系统适用性溶液进样分析，确定保留时间；目标物质分离检测：取供试品溶液和对照溶液进样，按主成分外标法计算供试品溶液相关杂质含量；固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为辛烷磺酸钠缓冲液，流动相B为甲醇。本申请的方法专属性强、灵敏度高、重复性及耐用性良好。

技术研发人员：李健,竺昱祺,朱婷
受保护的技术使用者：杭州民生药业股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5