一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法和应用与流程
本发明属于检测试剂，具体涉及一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法和应用。
背景技术：
1、谷胱甘肽还原酶（gr）是人体氧化还原体系中最为重要的酶之一，是维持细胞中还原型谷胱甘肽含量的主要黄素酶。目前，测定谷胱甘肽还原酶的方法主要为谷胱甘肽底物法，检测原理在于：谷胱甘肽还原酶在nadph的参与下，催化氧化型谷胱甘肽（gssg）还原成还原型谷胱甘肽（gsh），nadph在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与血清中gr的活性成正比，在340nm处测定nadph吸光度下降的速率，即可计算出gr活性。但是现有检测试剂中nadph容易失活，导致测值不稳定，影响检测结果。
技术实现思路
1、本发明的目的在于弥补现有技术的不足，保护nadph的活性和稳定性，提高谷胱甘肽还原酶检测试剂的稳定性，提高谷胱甘肽还原酶检测结果的准确性。
2、为了实现上述目的，本发明提供了一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒包括独立包装的试剂r1和独立包装的试剂r2；
3、所述试剂r1包括：ph值为8.0~8.5的tris缓冲液20~100mmol/l、氧化型谷胱甘肽8~25g/l、干扰剂0.1~0.5g/l、表面活性剂1~15g/l、proclin300 0.1~2g/l；所述干扰剂包括乙二胺四乙酸二钠和/或乙二醇双(2-氨基乙基)四乙酸；
4、所述试剂r2包括：ph值为9.0~9.5的tris缓冲液80~200mmol/l、proclin300 0.1~2g/l、表面活性剂1~15g/l、氯化钠0.5~4g/l、nadph 1~3mmol/l和三(2-羧乙基)膦盐酸盐0.5~3g/l。
5、优选的，所述试剂r1包括：ph值为8.0~8.5的tris缓冲液30~70mmol/l、氧化型谷胱甘肽10~20g/l、干扰剂0.2~0.4g/l、表面活性剂5~10g/l、proclin300 0.5~1g/l；
6、所述试剂r2包括：ph值为9.0~9.5的tris缓冲液100~150mmol/l、proclin300 0.5~1g/l、表面活性剂5~10g/l、氯化钠1~2g/l、nadph 1~2mmol/l和三(2-羧乙基)膦盐酸盐1~2g/l。
7、优选的，所述试剂r1包括：ph值为8.1的tris缓冲液50~60mmol/l、氧化型谷胱甘肽15g/l、干扰剂0.3g/l、表面活性剂8g/l、proclin300 0.7g/l；
8、所述试剂r2包括：ph值为9.4的tris缓冲液110~140mmol/l、proclin300 0.7g/l、表面活性剂8g/l、氯化钠1.5g/l、nadph 1.5mmol/l和三(2-羧乙基)膦盐酸盐1.8g/l。
9、优选的，所述试剂r1和所述试剂r2的体积比为4：1。
10、优选的，所述试剂r1和所述试剂r2中的表面活性剂分别包括tween20。
11、本发明还提供了上述技术方案所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
12、按照试剂r1的组分含量，将tris缓冲液、氧化型谷胱甘肽、干扰剂、proclin300和表面活性剂依次溶于纯水中，调节ph至8.0~8.5，得到所述试剂r1；
13、按照试剂r2的组分含量，将tris缓冲液、proclin300、表面活性剂、氯化钠和三(2-羧乙基)膦盐酸盐，依次溶于纯水中，调节ph至9.0~9.5，再加入nadph，调节ph至9.0~9.5，得到所述试剂r2。
14、本发明还提供了上述技术方案所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒在检测谷胱甘肽还原酶中的应用；
15、所述应用为非诊断和非治疗目的。
16、本发明还提供了一种非诊断和非治疗目的的检测谷胱甘肽还原酶的方法，利用上述技术方案所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，使用全自动生化分析仪检测，检测主波长为340nm，副波长为380nm。
17、优选的，所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒中试剂r1和待测样品的体积比为12：1。
18、有益效果：
19、本发明提供了一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，包括独立包装的试剂r1和独立包装的试剂r2；所述试剂r1包括：ph值为8.0~8.5的tris缓冲液20~100mmol/l、氧化型谷胱甘肽8~25g/l、干扰剂0.1~0.5g/l、表面活性剂1~15g/l、proclin300 0.1~2g/l；所述干扰剂包括乙二胺四乙酸二钠和/或乙二醇双(2-氨基乙基)四乙酸；所述试剂r2包括：ph值为9.0~9.5的tris缓冲液80~200mmol/l、proclin300 0.1~2g/l、表面活性剂1~15g/l、氯化钠0.5~4g/l、nadph 1~3mmol/l和三(2-羧乙基)膦盐酸盐0.5~3g/l。nadph在水溶液中不稳定，极其容易被氧化导致失活，导致测值不稳定，影响检测结果，三(2-羧乙基)膦盐酸盐具有富含电子的磷和氧原子，可以与多种金属结合，如铑、铱、帕。在室温下它可在二恶烷中与铑和铱快速络合，可以还原各种肽和蛋白质中的二硫键，对nadph中的巯基具有保护作用，能提高谷胱甘肽还原酶检测试剂中nadph的稳定性，最大程度保持nadph活性，从而不影响试剂性能，提高试剂的稳定性和谷胱甘肽还原酶检测结果的准确性，延长试剂的有效期，在2~8℃条件下试剂至少稳定12个月。本发明以三(2-羧乙基)膦盐酸盐作为试剂盒成分，结合其他特定的缓冲液和适宜浓度的其他组分，得到的试剂盒在精密度，线性，稳定性表现都高于行业标准及市售对照试剂盒，具有较高的临床使用价值。
技术特征：
1.一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒包括独立包装的试剂r1和独立包装的试剂r2；
2.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r1包括：ph值为8.0~8.5的tris缓冲液30~70mmol/l、氧化型谷胱甘肽10~20g/l、干扰剂0.2~0.4g/l、表面活性剂5~10g/l、proclin300 0.5~1g/l；
3.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r1包括：ph值为8.1的tris缓冲液50~60mmol/l、氧化型谷胱甘肽15g/l、干扰剂0.3g/l、表面活性剂8g/l、proclin300 0.7g/l；
4.根据权利要求1~3任一项所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r1和所述试剂r2的体积比为4：1。
5.根据权利要求1~3任一项所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r1和所述试剂r2中的表面活性剂分别包括tween20。
6.权利要求1~5任一项所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.权利要求1~5任一项所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒或权利要求6所述制备方法得到的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒在检测谷胱甘肽还原酶中的应用；
8.一种非诊断和非治疗目的的检测谷胱甘肽还原酶的方法，其特征在于，利用权利要求1~5任一项所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒或权利要求6所述制备方法得到的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，使用全自动生化分析仪检测，检测主波长为340nm，副波长为380nm。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒中试剂r1和待测样品的体积比为12：1。
技术总结
本发明属于检测试剂技术领域，具体涉及一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明提供一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法和应用，三(2‑羧乙基)膦盐酸盐能提高谷胱甘肽还原酶检测试剂中NADPH的稳定性，最大程度保持NADPH活性。利用三(2‑羧乙基)膦盐酸盐和NADPH制备谷胱甘肽还原酶检测试剂，结合其他特定的缓冲液和适宜浓度的其他组分，能提高试剂的稳定性和谷胱甘肽还原酶检测结果的准确性，延长试剂的有效期。实施例结果表明，得到的试剂盒在精密度，线性，稳定性表现都高于行业标准及市售对照试剂盒，具有较高的临床使用价值。
技术研发人员：申文君,张麟,王青泉,周健强,朱荫华,李宝玉,党敏
受保护的技术使用者：上海执诚生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5