一种鸽蛋清功能肽及其制备方法与应用与流程

本发明涉及生物，具体涉及一种鸽蛋清功能肽及其制备方法与应用。

背景技术：

1、鸽蛋自古以来便是益气补血、美容养颜的佳品，其中富含高质量蛋白、人体所需的微量元素及多种维生素。目前鸽蛋的加工处理方法较为单一，多为直接煮制，鸽蛋中的营养成分在人体内的吸收利用较为有限。同时，鸽蛋中的优质蛋白质资源也未被发掘。因此，提供一种鸽蛋清功能肽的制备方法，有利于鸽蛋营养物质的进一步开发利用。

2、生物活性肽又叫功能肽，来源于微生物或动植物，具有一定的生物学活性或生理功能，其相对分子量通常低于60000，易于被机体吸收利用。随着人们对小分子功能肽的研究愈发深入，各行各业展现除对功能肽的需求。在化妆品、保健品和药物领域，寻找具有抗氧化、辅助铁离子转运吸收的天然活性物质一直是研究的重点。酶解法是制备功能肽最常用的方法，因为酶解反应条件温和、反应速度快、成本较低且反应易于控制，使用该方法制备活性肽不仅能提高蛋白质的功能性质和生物学特性，同时也能提高蛋白质的商业价值。然而，鸽蛋清来源的功能肽还未被挖掘，因此以鸽蛋清作为原料制备功能肽具有重要意义。

3、铁元素缺乏易导致婴幼儿、孕妇以及老年人等敏感人群发生营养不良的症状，包括影响免疫系统、生长发育迟缓及智力低下等，但目前的补铁制剂存在一定的不足，以氯化亚铁为代表的无机铁盐吸收率低，胃肠道刺激强；乳酸亚铁等有机铁稳定性差。研究发现，以蛋白多肽为载体整合亚铁离子制得的肽亚铁补充剂可有效避免这些不足，兼具补铁作用和肽的营养功能，能被人体有效吸收。因此，开发肽亚铁营养补充剂具有重要的实际意义。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种鸽蛋清功能肽。

2、本发明还要解决的技术问题是提供上述鸽蛋清功能肽的制备方法。

3、本发明最后要解决的技术问题是提供上述鸽蛋清功能肽在在制备抗氧化制剂或促进上皮细胞铁吸收、转运制剂中的应用。

4、为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

5、一种鸽蛋清功能肽，所述鸽蛋清功能肽的氨基酸序列为下所示：ala-his-leu-arg-ala-phe-trp-arg，即ahlrafwr。

6、其中，所述鸽蛋清功能肽可以通过鸽蛋清天然提取或人工合成得到。

7、在本发明的一些实施例中，所述鸽蛋清功能肽是从鸽蛋清干粉中提取得到的。

8、其中，所述鸽蛋清功能肽，经测定，其分子量为1182.225da。

9、其中，所述鸽蛋清功能肽，其对细胞的毒性很低，具有显著的抗氧化性，能够有效螯合亚铁离子，促进亚铁离子的跨膜转运和吸收。

10、编码所述鸽蛋清功能肽的核酸分子也在本发明所保护的范围之内。

11、一种本发明所述鸽蛋清功能肽的制备方法，利用硫酸铵盐析法纯化鸽蛋清蛋白，使用蛋白酶对纯化后的鸽蛋清蛋白进行酶解制备得到鸽蛋清酶解液，再将鸽蛋清酶解液经分离纯化、冷冻干燥，即得所述鸽蛋清功能肽。

12、其中，所述利用硫酸铵盐析法纯化鸽蛋清蛋白，具体是将鸽蛋清干粉溶于水中，再加入饱和硫酸铵，盐析后离心取上清液，调节ph、静置离心后收集沉淀，再将沉淀复溶于水，经透析、干燥得到纯化的鸽蛋清蛋白。

13、具体的，所述鸽蛋清干粉、水和饱和硫酸铵的质量比为1：10～30：50～80；优选的，所述鸽蛋清干粉、水和饱和硫酸铵的质量比为1：25：65。

14、具体的，所述盐析，其条件为：4℃过夜盐析。

15、具体的，所述调节ph至4.0～6.0，优选的调节ph至4.5～5.5，更优选的调节ph至4.5。

16、其中，所述使用蛋白酶对纯化后的鸽蛋清蛋白进行酶解制备得到鸽蛋清酶解液，具体是将所述鸽蛋清蛋白溶于水制成蛋白溶液，再将蛋白溶液热处理、调节ph后，加入蛋白酶进行酶解即得鸽蛋清酶解液。

17、具体的，所述蛋白溶液，其浓度为50～80g/l，优选的所述蛋白溶液浓的度为60g/l。

18、具体的，所述热处理，其条件为：80～90℃水浴15～25min。

19、具体的，所述调节ph至5.0～6.0，优选的，调节ph至5.5。

20、具体的，所述蛋白酶为食品级、安全性较高的木瓜蛋白酶，其添加量为所述鸽蛋清蛋白的2～4wt％。

21、具体的，所述酶解，其条件为：45～60℃、100～300r/min酶解3～5h。

22、其中，所述分离纯化，先利用超滤膜超滤收集分子量在3000da以下的组分，再使用凝胶色谱继续分离纯化。

23、具体的，所述超滤膜超为3000da的滤膜；所述超滤在0.3mpa的条件下进行；所述凝胶色谱为sephadex g-15凝胶色谱，所用洗脱液为纯水，检测波长为280nm。

24、在本发明的一些实施例中，将各洗脱峰收集后冻干，通过测定体外螯合铁的活性，将活性较高的f2组分冷冻干燥即得本发明所述鸽蛋清功能肽ahlrafwr。

25、所述鸽蛋清功能肽或所述核酸分子在制备抗氧化制剂或促进上皮细胞铁吸收、转运制剂中的应用也在本发明所保护的范围之内。

26、一种制剂，所述制剂含有所述的鸽蛋清功能肽也在本发明所保护的范围之内。

27、有益效果：

28、(1)本发明以蛋白酶酶解制备得到了一种新的鸽蛋清功能肽ahlrafwr，其制备工艺简单，过程温和，较好地保持了鸽蛋清功能肽的活性，且成本低廉。本发明提高了鸽蛋的附加价值，拓宽了鸽蛋的商业用途。

29、(2)本发明提供了一种简便可行的鸽蛋清功能肽的制备方法，本发明制备过程未添加任何有机溶剂，所用蛋白酶为食品级，因此对环境无污染且对人体无害。

30、(3)本发明制备得到的鸽蛋清功能肽ahlrafwr具有优异的抗氧化活性，对dpph和abts显示出良好的抗氧化能力，可有效减轻氧化应激、清除自由基，预防细胞损伤和老化。同时，能够有效螯合亚铁离子，促进铁离子向肠上皮细胞的转运吸收，从而有助于改善由缺铁造成的贫血症状，维持免疫系统的稳定。

技术特征：

1.一种鸽蛋清功能肽，其特征在于，所述鸽蛋清功能肽的氨基酸序列为ahlrafwr。

2.编码权利要求1所述鸽蛋清功能肽的核酸分子。

3.权利要求1所述的鸽蛋清功能肽的制备方法，其特征在于，利用硫酸铵盐析法纯化鸽蛋清蛋白，使用蛋白酶对纯化后的鸽蛋清蛋白进行酶解制备得到鸽蛋清酶解液，再将鸽蛋清酶解液经分离纯化、冷冻干燥，即得所述鸽蛋清功能肽。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述利用硫酸铵盐析法纯化鸽蛋清蛋白，是将鸽蛋清干粉溶于水中，再加入饱和硫酸铵，盐析后离心取上清液，调节ph、静置离心后收集沉淀，再将沉淀复溶于水，经透析、干燥得到纯化的鸽蛋清蛋白。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述鸽蛋清干粉、水和饱和硫酸铵的质量比为1：10～30：50～80；所述盐析，其条件为：4℃过夜盐析；所述调节ph至4.0～6.0，优选的调节ph至4.5～5.5。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述使用蛋白酶对纯化后的鸽蛋清蛋白进行酶解制备得到鸽蛋清酶解液，具体是将所述鸽蛋清蛋白溶于水制成蛋白溶液，再将蛋白溶液热处理、调节ph后，加入蛋白酶进行酶解即得鸽蛋清酶解液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述蛋白溶液，其浓度为50～80g/l；所述热处理，其条件为：80～90℃水浴15～25min；所述调节ph至5.0～6.0；所述蛋白酶为木瓜蛋白酶，其添加量为所述鸽蛋清蛋白的2～4wt％；所述酶解，其条件为：45～60℃、100～300r/min酶解3～5h。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述分离纯化，先利用超滤膜超滤收集分子量在3000da以下的组分，再使用凝胶色谱继续分离纯化。

9.权利要求1所述鸽蛋清功能肽或权利要求2所述核酸分子在制备抗氧化制剂或促进上皮细胞铁吸收、转运制剂中的应用。

10.一种制剂，其特征在于，所述制剂含有权利要求1所述鸽蛋清功能肽。

技术总结
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鸽蛋清功能肽及其制备方法与应用。本发明利用硫酸铵盐析法，再经蛋白酶酶解、分离纯化、冷冻干燥，制备得到了一种鸽蛋清功能肽，其氨基酸序列为AHLRAFWR。该制备工艺简单，过程温和，较好地保持了鸽蛋清功能肽的活性，且成本低廉，提高了鸽蛋的附加价值，拓宽了鸽蛋的商业用途。制备得到的鸽蛋清功能肽具有优异的抗氧化活性，对DPPH和ABTS显示出良好的抗氧化能力，可有效减轻氧化应激、清除自由基，预防细胞损伤和老化，同时能够促进铁离子转运吸收，从而改善由缺铁造成的贫血症状，维持免疫系统的稳定。

技术研发人员：孟俊,杨海明,马银洁,周慧,周俊
受保护的技术使用者：南京卫斯登生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5