一株金黄色葡萄球菌噬菌体SapLY01及其应用
本发明涉及生物，具体涉及一株金黄色葡萄球菌噬菌体saply01及其应用。
背景技术：
1、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)为葡萄球菌属的代表细菌，致病性强，在人和家畜可引起轻微的皮肤感染至严重危机生命的疾病，它不仅可引起局部化脓性感染，如疖、痈、毛囊炎和手术切口，还可引起全身感染，如肺炎、骨髓炎、脑膜炎、化脓性关节炎、心内膜炎、菌血症和败血症。金黄色葡萄球菌的营养需求低，对外界的抵抗力强，所以在可广泛存在于自然界中，在空气、土壤、各种水体和牲畜相关的环境上都有分布。据报道，全球范围内金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件约占细菌性中毒事件的33％，在我国每年的细菌性食物中毒事件居于第4位。在污染源中食品受到金黄色葡萄球菌的污染严重，其中乳及乳制品、生鲜肉、速冻食品最易受到污染。由此可见，抑制金黄色葡萄球菌的污染是全球食品安全的迫切需求。
2、在防治金黄色葡萄球菌上，传统的抗生素治疗法却普遍存在超剂量使用和超范围滥用，不能按照严格标准使用，导致耐药和多重耐药的金黄色葡萄球菌不断地出现和传播，抗生素的治疗方法逐渐失去作用，急需开发研究新型有效且不受耐药性影响的抑菌制剂。
3、噬菌体是(bacteriophages)以细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物为宿主的病毒，可以引起宿主菌裂解并且具有专一性，自我增值快，安全性高，广泛存在于环境中。噬菌体制剂有特异性强、高效、容易大量制备等特点，近年来被认为是克制耐药菌的有利武器，美国、欧洲等国已经批准某些噬菌体制剂用于疾病治疗和食品杀菌并取得了显著成果，如ryland young教授利用3株噬菌体治愈了感染“超级细菌”——多重耐药鲍曼不动杆菌的患者，dedrick rm教授利用噬菌体成功治愈了双肺移植后耐药结核分枝杆菌感染的患者。
4、现有技术中已经公开了一些金黄色葡萄球菌噬菌体，但是这些噬菌体很多存在宿主谱窄、温度和ph稳定性差等局限。
技术实现思路
1、本发明针对上述技术问题，提供一株金黄色葡萄球菌噬菌体saply01，该噬菌体裂解谱宽，能对抗生素无法发挥作用的细菌进行抑制或杀灭，旨为金黄色葡萄球菌的感染提供新的治疗方案，以及为金黄色葡萄球菌造成的环境污染和多种疾病提供新型的消毒手段。
2、为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：
3、一株金黄色葡萄球菌噬菌体saply01，所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01为staphylococcus aureus phage saply01，2024年01月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctcc no：m 2024014，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路武汉大学中国典型培养物保藏中心。
4、本发明以金黄色葡萄球菌为宿主分离出一株效价高、裂解谱宽、温度和ph稳定性好、裂解能力强的噬菌体，并对其生物学特性进行研究并进行分类鉴定和基因组测序。
5、如上所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01在抑制金黄色葡萄球菌中的应用。
6、如上所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01制成噬菌体悬液后28℃下抑制金黄色葡萄球菌中的应用。
7、优选地，所述的噬菌体悬液为将所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01和宿主菌培养物按照体积比1：1混合作用15min，加入10ml lb液体培养基，37℃培养6h，4℃、12000rpm离心20min，取上清，0.22μm滤膜过滤，滤液即为噬菌体裂解液，在噬菌体裂解液中加入dnase i、rnase a至终浓度均为1μg/ml，37℃温育30min，加入终浓度为1m的nacl冰浴1h(即加入氯化钠使混合溶中氯化钠的最终浓度为1m)，4℃、12000rpm离心10min，取上清加入终浓度为10％的peg8000，4℃过夜，然后4℃、12000rpm离心10min，弃上清，倒置5min，向剩余的固体物质加入sm缓冲液重悬，加入等体积的氯仿温和震荡30s，4℃、5000rpm离心15min，回收含有噬菌体颗粒的亲水相，即得噬菌体悬液。
8、优选地，所述的宿主菌培养物为宿主菌yz4划线接种于1.2％lb固体培养基上，培养过夜后，挑取单克隆接种于5ml lb(luria broth)液体培养基中，37℃振荡培养8h后作为宿主菌培养物。
9、优选地，所述的sm缓冲液为称取6.055g tris-hci(ph为7.5)定容至100ml，加入5.800g nacl，2.000g mgso4后，加入ddh2o定容至1l后所得；所述的lb(luria broth)液体培养基为蛋白胨10g、酵母粉5g、nacl 10g，加ddh2o至1l，调节ph至7.0，121℃、20min高压灭菌所得。
10、一种噬菌体组合物，包括如上所述的金黄色葡萄球菌噬菌体saply01或所述噬菌体悬液。
11、一种水体消毒剂，有效成分包括如上所述的金黄色葡萄球菌噬菌体saply01、所述噬菌体悬液或所述的噬菌体组合物；其中还包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分。
12、其中，所述消毒剂可通过喷雾、浸泡的方式对养殖环境、饲养器具和饲料进行金黄色葡萄球菌的消毒。
13、一种用于水产品消毒的生物抑菌剂，包括如上所述的金黄色葡萄球菌噬菌体saply01、所述噬菌体悬液或所述的噬菌体组合物；生物抑菌剂的使用方法为：对水产品产品表面进行浸泡或者喷雾消毒，来抑制产品加工或保鲜过程中金黄色葡萄球菌的增殖。
14、与现有技术相比，本发明的有益效果：
15、本发明金黄色葡萄球菌噬菌体saply01潜伏期短，裂解谱宽，裂解能力强，能快速杀死的宿主菌，且毒副作用小，安全性高，温度、酸碱耐受范围比较广且具有良好的亲水性，易制成喷洒剂和注射剂，可有效杀灭临床上分离的金黄色葡萄球菌，可以有效抑制金黄色葡萄球菌对环境的污染，并对感染金黄色葡萄球菌的动物有很好的治疗作用。
16、保藏信息说明
17、金黄色葡萄球菌噬菌体saply01(staphylococcus aureus phage saply01)于2024年01月04日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称cctcc)，保藏号为cctcc no：m2024014。
技术特征：
1.一株金黄色葡萄球菌噬菌体saply01，其特征在于：所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01为staphylococcus aureus phage saply01，保藏号为cctcc no：m 2024014。
2.如权利要求1所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01在抑制金黄色葡萄球菌中的应用。
3.如权利要求1所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01制成噬菌体悬液后28℃下抑制金黄色葡萄球菌中的应用。
4.根据权利要求3所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01制成噬菌体悬液后28℃下抑制金黄色葡萄球菌中的应用，其特征在于：所述的噬菌体悬液为将所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01和宿主菌培养物按照体积比1：1混合作用，加入lb液体培养基，37℃培养6h，离心，取上清，滤膜过滤，滤液即为噬菌体裂解液，在噬菌体裂解液中加入dnase i、rnase a至终浓度均为1μg/ml，37℃温育30min，加入nacl冰浴，离心，取上清加入peg8000，4℃过夜，然后离心，弃上清，倒置，向剩余的固体物质加入sm缓冲液重悬，加入等体积的氯仿震荡，离心，回收含有噬菌体颗粒的亲水相，即得噬菌体悬液。
5.根据权利要求4所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01制成噬菌体悬液后28℃下抑制金黄色葡萄球菌中的应用，其特征在于：所述的宿主菌培养物为宿主菌yz4划线接种于1.2％lb固体培养基上，培养过夜后，挑取单克隆接种于5ml lb液体培养基中，37℃振荡培养8h后作为宿主菌培养物。
6.根据权利要求4所述金黄色葡萄球菌噬菌体saply01制成噬菌体悬液后28℃下抑制金黄色葡萄球菌中的应用，其特征在于：所述的sm缓冲液为称取6.055g tris-hci定容至100ml，加入5.800g nacl，2.000g mgso4后，加入ddh2o定容至1l后所得；所述的lb液体培养基为蛋白胨10g、酵母粉5g、nacl 10g，加ddh2o至1l，调节ph至7.0，121℃、20min高压灭菌所得。
7.一种噬菌体组合物，其特征在于：包括权利要求1所述的金黄色葡萄球菌噬菌体saply01或权利要求3所述噬菌体悬液。
8.一种水体消毒剂，其特征在于：有效成分包括如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌噬菌体saply01、权利要求3所述噬菌体悬液或权利要求7所述的噬菌体组合物；其中还包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分。
9.根据权利要求8所述水体消毒剂，其特征在于：所述消毒剂可通过喷雾、浸泡的方式对养殖环境、饲养器具和饲料进行金黄色葡萄球菌的消毒。
10.一种用于水产品消毒的生物抑菌剂，其特征在于：权利要求1所述的金黄色葡萄球菌噬菌体saply01、权利要求3所述噬菌体悬液或权利要求7所述的噬菌体组合物。
技术总结
本发明公开了一株金黄色葡萄球菌噬菌体SapLY01，所述金黄色葡萄球菌噬菌体SapLY01为Staphylococcus aureus phage SapLY01，保藏号为CCTCCNO：M 2024014。本发明金黄色葡萄球菌噬菌体SapLY01潜伏期短，裂解谱宽，裂解能力强，能快速杀死的宿主菌，且毒副作用小，安全性高，温度、酸碱耐受范围比较广且具有良好的亲水性，易制成喷洒剂和注射剂，可有效杀灭临床上分离的金黄色葡萄球菌，可以有效抑制金黄色葡萄球菌对环境的污染，并对感染金黄色葡萄球菌的动物有很好的治疗作用。
技术研发人员：王晓晔,李逸楠,李茂宁,莫玉鹏,黄炜乾,刘辉,李珣,韦懿仙
受保护的技术使用者：广西大学
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5