肿瘤抗原、树突状细胞肿瘤疫苗、制备方法及医药组合物与流程
本发明是关于一种肿瘤抗原、其制备方法、树突状细胞肿瘤疫苗、其制备方法及用于治疗癌症的医药组合物，特别是一种抑制肿瘤细胞抵抗压力基因表达的肿瘤抗原、其制备方法、树突状细胞肿瘤疫苗、其制备方法及用于治疗癌症的医药组合物。
背景技术：
1、癌症又名为恶性肿瘤，为细胞不正常增生，且这些增生的细胞可能侵犯身体的其他部分，为由控制细胞分裂增殖机制失常而引起的疾病。全世界罹患癌症的人口有不断增加的趋势，癌症是国人十大死因之一，且已连续二十七年位居十大死因的榜首。
2、常规的肿瘤治疗方法包括手术治疗、放射线治疗及化疗等。肿瘤疫苗为上述治疗方法以外的另一种治疗肿瘤的方法，通过激活患者自身免疫系统，利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、扩散和复发，以达到清除或控制肿瘤的目的。
3、现有技术中的肿瘤疫苗，都是以肿瘤细胞为标靶，将肿瘤细胞以压力处理后并通过裂解肿瘤细胞所得到的抗原，再将所得到的抗原负载到免疫细胞上，但因肿瘤细胞中具有抵抗压力处理的机制，例如放射线照射处理或化疗药物处理，因而如此得到的肿瘤疫苗用于治疗癌症，往往因肿瘤疫苗中免疫细胞成熟度不佳而导致治疗效果较差。因此，如何提供一种肿瘤抗原，可以有效地增强免疫细胞的成熟度，以提高所制得肿瘤疫苗的治疗效果，成为有待解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的一目的在于提出一种经特殊处理的肿瘤抗原，通过抑制肿瘤细胞的抵抗压力基因的表达，再经压力处理，以得到含有大量的损伤相关模式分子的肿瘤抗原，后续可用于制备树突状细胞肿瘤疫苗，引起树突状细胞强烈的免疫应答。
2、本发明的另一目的在于提出一种治疗效果优异的树突状细胞肿瘤疫苗，利用含有大量的损伤相关模式分子的肿瘤抗原制备树突状细胞肿瘤疫苗，可使其中的树突状细胞成熟度更好，并提高树突状细胞肿瘤疫苗的治疗效果，以解决因肿瘤疫苗中免疫细胞成熟度不佳而导致治疗效果较差的问题。
3、本发明的一态样在于提供一种肿瘤抗原的制备方法，包含：提供肿瘤组织检体、进行抑制步骤、进行压力处理步骤和进行细胞裂解步骤。提供肿瘤组织检体后对肿瘤组织检体进行原代分离和培养，以得到肿瘤细胞。抑制步骤是以抑制方法抑制肿瘤细胞的msi1基因的表达，以得到抑制后肿瘤细胞。压力处理步骤是以一压力处理方法处理抑制后肿瘤细胞，使抑制后肿瘤细胞的损伤相关模式分子(damage associated molecular patterns,damp)基因大量表达，以得到压力处理后肿瘤细胞。细胞裂解步骤是以细胞破碎法处理压力处理后肿瘤细胞，以得到肿瘤抗原。
4、依据前述的肿瘤抗原的制备方法，其中所述抑制方法可为以基因抑制(geneknockdown)、基因剔除(gene knockout)、化学抑制剂或其组合的方法进行抑制。
5、依据前述的肿瘤抗原的制备方法，其中所述基因抑制的方法可以一短干扰核糖核酸(sirna)抑制肿瘤细胞的msi1基因的表达，而短干扰核糖核酸可为seq id no:1所示序列、seq id no:2所示序列、seq id no:3所示序列、seq id no:4所示序列或其组合。
6、依据前述的肿瘤抗原的制备方法，其中所述压力处理方法可为放射线照射处理、uv照射处理、缺氧处理、化疗药物处理、化学药剂处理或其组合。
7、依据前述的肿瘤抗原的制备方法，其中当压力处理方法为放射线照射处理时，放射线剂量可为10gy至30gy。当压力处理方法为uv照射处理时，可以100j/cm2uvc辐射照射抑制后肿瘤细胞。当压力处理方法为缺氧处理时，可将抑制后肿瘤细胞于1％氧气含量的条件下培养16小时。
8、依据前述的肿瘤抗原的制备方法，其中所述损伤相关模式分子基因可包含hmg家族基因、hsp70家族基因、hsp90家族基因和s100家族基因。进一步地，损伤相关模式分子基因可包含hmgb1基因、hmgb2基因、hmgn1基因、hsp90aa1基因、hsp90ab1基因、hsp90b1基因、hspa1b基因、hspa5基因、hspa1a基因、s100a11基因、s100a10基因、s100a13基因、s100a4基因、s100a2基因、bsg基因、tlr4基因、calr基因、sra1基因、lrp1基因、bcl2基因和il1r1基因。
9、依据前述的肿瘤抗原的制备方法，其中所述细胞破碎法可为冻融破碎法、渗透压冲击破碎法、高压匀浆破碎法、振荡珠击破碎法、高速搅拌珠研磨破碎法或超音波破碎法。
10、本发明的另一态样在于提供一种肿瘤抗原，其利用前述的肿瘤抗原的制备方法制得。
11、本发明的再一态样在于提供一种树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，包含：提供前述的肿瘤抗原、分离树突状细胞以及进行共培养步骤。共培养步骤是将树突状细胞与肿瘤抗原共同培养，以得到树突状细胞肿瘤疫苗。
12、依据前述的树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，其中所述树突状细胞可为自体树突状细胞，所述树突状细胞亦可为异体树突状细胞。
13、本发明的又一态样在于提供一种树突状细胞肿瘤疫苗，其是利用前述的树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法制得。
14、本发明的再一态样在于提供一种用于治疗癌症的医药组合物，包含前述树突状细胞肿瘤疫苗以及医药上可接受载剂。
15、依据前述的用于治疗癌症的医药组合物，可还包含t细胞。
16、依据前述的用于治疗癌症的医药组合物，可还包含化疗药物、靶向治疗药物、抗体药物、免疫调节剂或其组合。
17、上述
技术实现要素：
旨在提供本揭示内容的简化摘要，以使阅读者对本揭示内容具备基本的理解。此发明内容并非本揭示内容的完整概述，且其用意并非在指出本发明实施例的重要/关键元件或界定本发明的范围。
技术特征：
1.一种肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，该抑制方法为以一基因抑制(gene knockdown)、一基因剔除(gene knockout)、一化学抑制剂或其组合的方法进行抑制。
3.根据权利要求2所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，该基因抑制的方法以一短干扰核糖核酸(sirna)抑制该肿瘤细胞的msi1基因的表达，该短干扰核糖核酸为seq idno:1所示序列、seq id no:2所示序列、seq id no:3所示序列、seq id no:4所示序列或其组合。
4.根据权利要求1所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，该压力处理方法为一放射线照射处理、一uv照射处理、一缺氧处理、一化疗药物处理、一化学药剂处理或其组合。
5.根据权利要求4所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，当该压力处理方法为该放射线照射处理时，放射线剂量为10gy至30gy。
6.根据权利要求4所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，当该压力处理方法为该uv照射处理时，以100j/cm2 uvc辐射照射该抑制后肿瘤细胞。
7.根据权利要求4所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，当该压力处理方法为该缺氧处理时，将该抑制后肿瘤细胞于1％氧气含量的条件下培养16小时。
8.根据权利要求1所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，该损伤相关模式分子基因包含hmg家族基因、hsp70家族基因、hsp90家族基因和s100家族基因。
9.根据权利要求1所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，该损伤相关模式分子基因包含hmgb1基因、hmgb2基因、hmgn1基因、hsp90aa1基因、hsp90ab1基因、hsp90b1基因、hspa1b基因、hspa5基因、hspa1a基因、s100a11基因、s100a10基因、s100a13基因、s100a4基因、s100a2基因、bsg基因、tlr4基因、calr基因、sra1基因、lrp1基因、bcl2基因和il1r1基因。
10.根据权利要求1所述的肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，该细胞破碎法为一冻融破碎法、一渗透压冲击破碎法、一高压匀浆破碎法、一振荡珠击破碎法、一高速搅拌珠研磨破碎法或一超音波破碎法。
11.一种肿瘤抗原，其特征在于，利用如权利要求1至权利要求10任一项所述的肿瘤抗原的制备方法制得。
12.一种树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，包含：
13.根据权利要求12所述的树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，该树突状细胞为自体树突状细胞。
14.根据权利要求12所述的树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，该树突状细胞为异体树突状细胞。
15.一种树突状细胞肿瘤疫苗，其特征在于，利用如权利要求12所述的树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法制得。
16.一种用于治疗癌症的医药组合物，其特征在于，包含：
17.根据权利要求16所述的用于治疗癌症的医药组合物，其特征在于，还包含一t细胞。
18.根据权利要求16所述的用于治疗癌症的医药组合物，其特征在于，还包含一化疗药物、一靶向治疗药物、一抗体药物、一免疫调节剂或其组合。
技术总结
本发明提供一种肿瘤抗原及其制备方法，所述肿瘤抗原由下列步骤制得。提供肿瘤组织检体，并对肿瘤组织检体进行原代分离和培养得到肿瘤细胞。以抑制方法抑制肿瘤细胞的MSI1基因的表达以得到抑制后肿瘤细胞。以压力处理方法处理抑制后肿瘤细胞，再进行细胞裂解步骤以得到肿瘤抗原。借此，通过抑制肿瘤细胞的MSI1基因的表达，再经压力处理，所得到的肿瘤抗原含有大量的损伤相关模式分子，后续可用于制备树突状细胞肿瘤疫苗。使所制得的树突状细胞肿瘤疫苗中的树突状细胞成熟度更好，并提高树突状细胞肿瘤疫苗的治疗效果。
技术研发人员：周德阳,邱绍智,潘志明,黃士维
受保护的技术使用者：洪明奇
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5