转基因大豆品系GM_CSM63714及其检测方法和用途与流程
本公开大体上涉及农业、植物生物技术和分子生物学领域。更具体地说，本公开涉及用于在转基因大豆植物中提供除草剂耐受性的组合物和方法。更具体地说，提供了大豆品系(event)gm_csm63714的重组dna分子。还提供了包含大豆品系gm_csm63714的转基因大豆植物、植物部分、种子、细胞和农产品，以及生产和使用包含大豆品系gm_csm63714的转基因大豆植物、植物部分、种子、细胞和农产品的方法；检测大豆品系gm_csm63714的方法；以及控制杂草的方法。包含大豆品系gm_csm63714的转基因大豆植物、植物部分、种子和细胞表现出对以下各物的耐受性：苯甲酸类生长素，例如麦草畏(dicamba)；谷氨酰胺合成酶抑制剂，例如草铵膦(glufosinate)；苯氧基类生长素，例如2,4-d；和β-三酮类除草剂(4-羟基苯基丙酮酸双加氧酶或hppd的抑制剂)，例如甲基磺草酮(mesotrione)。
背景技术：
1、提高可持续作物产量对于满足不断增长的全球人口的粮食需求、满足发展中国家日益增长的动物性饮食需求以及在使用有限的自然资源同时，扩大作物产品生产生物燃料、纤维和其他农产品类商品的用途都至关重要。在农业系统中，有效管理农田中的杂草种类是维持良好的作物生长条件和产量必不可少的。杂草与作物争夺空间、养分、水分和光照，并且可能损害收成，是可持续作物生产的重大挑战之一。仅就大豆而言，在美国，杂草控制不当会导致产量减少高达约50％，并且每年造成高达160亿美元的损失(美国杂草科学学会(weed science society of america))。在部署除草剂耐受性作物之前，选择性除草剂对杂草管理做出了巨大贡献。施用除草剂是减小杂草压力、提高生产力和增加全球作物生产安全性的重要手段。
2、大豆(glycine max)是世界许多地区的重要作物。含有除草剂耐受性状的经过基因修饰的作物的引入成功地为农民提供了更好地控制杂草的额外手段。转基因除草剂耐受性使得能够在作物生长环境中使用除草剂，而不会对作物造成损伤或对作物造成的损伤极小(例如损伤小于约10％)。转基因大豆性状已被用于赋予对草甘膦(glyphosate)和/或麦草畏的耐受性，并且被广泛用于商业大豆生产的杂草管理。然而，杂草已经进化出对除草剂的抗性，而杂草抗性仍然是当今大豆生产的一大难题。因此，需要另外的除草剂耐受性状选择来有效地管理杂草和维持作物生产力。一个解决方案是采用多种除草剂作用方式。
3、除草剂耐受性状的组合对于提供杂草控制选择是理想的，这将增加栽培者的灵活性并能够使用多种除草剂作用模式来控制具有挑战性的杂草。在基因组中组合多种所需性状可以通过以下方式实现：通过在各自具有所需性状的两个亲本之间进行杂交，并鉴别具有所需性状组合的子代植物，或者通过用一个或多个有关额外所需性状的基因，经由随机整合或经由一个或多个有关额外所需性状的基因的靶向整合再转化包含一个或多个所需性状的转基因植物。或者，可以通过将多个基因以单个dna分子形式插入基因组中的一个位置或基因座来实现多种所需性状的组合。在大豆的单一基因座处组合多种除草剂耐受性状将提供有用的杂草控制手段，使得在后续繁育成一系列不同的优良种质过程中维持起来更加简单且成本更低。
4、转基因在转基因植物、植物部分、种子、细胞或子代中的表达且因此其有效性可能受到许多因素的影响，例如转基因表达盒中使用的调控元件、这些调控元件的组合和/或相互作用、转基因插入位点的染色体位置、在转基因插入位点处或附近的基因组的染色质结构，以及靠近转基因插入位点的任何内源性顺式和/或反式调控元件或基因的存在或接近性。此外，当转基因插入物包含多个表达盒，且每个表达盒都有赋予不同性状的不同转基因时，转基因植物中性状的表现会变得更加复杂。这些差异或因素可能导致同一表达盒中不同转基因插入品系之间转基因表达水平或者转基因表达的空间或时间模式的变化。此外，不同的转基因品系在这些品系的分子质量方面也会有所不同。例如，转基因品系可在一个或多个染色体位置处含有两个或更多个转基因插入物拷贝，或者转基因插入物可以相对于预定插入物为截短的或含有载体骨架序列，或者转基因可以被插入到内源基因或重复区域中。这些特征可能会导致不期望的后果，例如基因沉默、转基因的模式和/或表达的改变、内源基因的模式和/或表达的改变。不同品系间也可能存在不期望的表型或农艺差异。
5、即使在靶序列插入的情况下，在转基因品系的亚群中也观察到独立但基因上相同的靶序列插入(tsi)品系之间转基因表达水平的变化(verkest等人,2019)。这种表达变化和沉默的发生与转基因序列无关，并且可以归于dna甲基化，而dna甲基化又与不同的dna甲基化机制相关联。在单纯的tsi品系亚群中观察到转基因表达的显著变化的事实表明，即使当整合品系成为目标时，为了鉴别几代中具有稳定的感兴趣基因表达的tsi品系，仍然需要进行选择，类似于随机整合品系的实践。
6、在商业上有用的多基因转基因品系要求转基因插入物中的每个转基因以成功获得该性状所需的方式表达，并且涉及严格缜密的测试、评估和选择。一旦选择了一个或多个耐受性状，就设计出各个表达盒并在体外和/或植物体内进行测试，以选出针对每种性状的最佳表达盒。这些测试包括针对转基因的期望空间和时间表达测试不同调控元件(例如启动子、内含子、前导序列和3'utr)和不同调控元件的组合，以及检查是否将转基因产物(蛋白质)靶向亚细胞区室，例如叶绿体。接着，将针对每种性状选择的表达盒组合于一个构建体中，并且对所述构建体进行测试以确保所有表达盒一起良好地发挥作用且每个转基因都得到正确表达。然后，使用选定的表达盒组合进行转化，以产生转基因植物。由于用包含一个或多个转基因表达盒的t-dna构建体进行农杆菌(agrobacterium)介导的转化可在植物基因组中插入一个或多个转基因的位置方面具有很大的可变性和随机性，故每个转基因品系都是独特的，且转基因dna随机且独特地插入不同的植物基因组位置。因此，所选择的表达盒组合被用于产生数百个独特的多基因转基因品系，每个品系都是外来dna随机插入不同植物基因组位置中的结果。
7、由于这些原因，来自同一转化构建体的不同转化品系的性能可能会有所不同，并且需要鉴别赋予最有利性状或特征而没有其他潜在的异常类型或问题的转化品系，以选择用于商业用途的优质品系。因此，必须产生大量独立转化品系并进行分析，以选择具有优质商业特性的品系，这将是一项重大的项目，涉及在许多不同的转化品系中进行分析和选择。
8、为了产生用于商业用途的多基因品系，需要严格缜密的分子表征、温室测试以及在多个地点和多种条件下进行多年田间试验，由此允许获得大量的农艺、表型和分子数据。然后，对所得数据进行分析以选出适于商业目的的品系。商业多基因品系在被鉴别为具有所期望的转基因表达、分子特征、功效和田间表现后，就可以使用植物育种方法将其作为具有多种除草剂耐受性状的单一基因座渗入到其他大豆基因背景中。由此产生的大豆品种含有新性状以及其他期望的品质，例如天然性状、疾病耐受性状、昆虫控制性状、高产种质或性状，和/或一种或多种其他转基因除草剂耐受性状。
技术实现思路
1、本文提供了重组dna分子。此类重组dna分子的实例包括选自由以下组成的组的序列：seq id no:10；seq id no:1；seq id no:2；seq id no:3；seq id no:4；seq id no:5；seq id no:6；seq id no:7；seq id no:8；seq id no:9；具有与seq id no:10的全长或seqid no:9的全长至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％相同的核苷酸序列的多核苷酸；以及前述任一者的完整互补序列。在一些实施方案中，重组dna分子源自于包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、种子、植物部分、植物细胞、子代植物或商品产品，包含所述品系的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。在一些实施方案中，重组dna分子被包含在含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、种子、植物部分、植物细胞、子代植物或由其生产的商品产品中，包含所述品系的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。重组dna分子可以通过将异源核酸分子插入大豆植物或大豆细胞的基因组dna中形成。重组dna分子可以包含用于诊断大豆品系gm_csm63714的存在的扩增子。
2、提供了充当dna探针的dna分子。此类dna分子的实例是包含长度足以充当dna探针的多核苷酸区段的dna分子，它在严格杂交条件下与样品中的大豆品系gm_csm63714 dna特异性杂交。检测到dna分子在严格杂交条件下杂交将诊断样品中存在大豆品系gmcsm63714。
3、还提供了这样一种dna分子，该dna分子包含长度足以充当dna探针的多核苷酸区段，该多核苷酸区段特异性检测样品中的以下至少之一者：在侧接大豆基因组dna与大豆品系gm_csm63714的转基因插入物之间的5'接合序列；在大豆品系gm_csm63714的转基因插入物与侧接大豆基因组dna之间的3'接合序列；seq id no:9；以及seq id no:9的片段，所述片段包含seq id no:9的足够长度的连续核苷酸以将该序列鉴别为gm_csm63714的转基因插入物的片段。
4、dna探针可以包含seq id no:16。或者，充当dna探针的dna分子可以包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10以及前述任一者的互补序列，样品可源自于大豆植物、种子、植物部分、植物细胞、子代植物或商品产品。
5、提供了dna分子对。所述dna分子对包含第一dna分子和第二dna分子。第一dna分子和第二dna分子包含seq id no:10的片段或其互补序列，并且当在扩增反应中与包含大豆品系gm_csm63714的dna一起使用时充当dna引物，以产生用于诊断样品中的大豆品系gm_csm63714的扩增子。例如，第一dna分子和第二dna分子可以包含seq id no:14和seq idno:15。扩增子可包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：seq id no:1；seq id no:2；seqid no:3；seq id no:4；seq id no:5；seq id no:6；seq id no:7；seq id no:8；seq idno:9；seq id no:10；以及seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq idno:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8中任一者的片段，其中所述片段是至少10个核苷酸长并包含seq id no:10的核苷酸1,000-1,001或11,196-11,197。
6、提供了用于检测源自于大豆种子、植物、植物部分、植物细胞、子代植物或商品产品的样品中大豆品系gm_csm63714的存在的方法。在此类方法的第一个实例中，所述方法包括：a)使样品与本文所描述的充当探针的任何dna分子接触；b)使样品和充当探针的dna分子经历严格杂交条件；以及c)检测充当探针的dna分子与样品中dna分子的杂交情况。充当探针的dna分子与样品中dna分子杂交将诊断样品中存在大豆品系gm_csm63714。
7、提供了检测源自于大豆种子、植物、植物部分、植物细胞、子代植物和商品产品的样品中大豆品系gm_csm63714的存在的另一种方法。所述方法包括：a)使样品接触本文所描述的任何dna分子对；b)进行足以产生dna扩增子的扩增反应；以及c)检测dna扩增子的存在；其中dna扩增子包含以下中的至少一者：在侧接大豆基因组dna与大豆品系gm_csm63714的转基因插入物之间的5'接合序列；在侧接大豆基因组dna与大豆品系gm_csm63714的转基因插入物之间的3'接合序列；seq id no:9；以及seq id no:9的片段，该片段包含seq idno:9的足够长度的连续核苷酸以将所述序列鉴别为gm_csm63714的转基因插入物。dna扩增子的存在表明样品中大豆品系gm_csm63714的存在。dna扩增子可以是至少10个核苷酸长、至少11个核苷酸长、至少12个核苷酸长、至少13个核苷酸长、至少14个核苷酸长、至少15个核苷酸长、至少16个核苷酸长、至少17个核苷酸长、至少18个核苷酸长、至少19个核苷酸长、至少20个核苷酸长、至少25个核苷酸长、至少30个核苷酸长、至少35个核苷酸长、至少40个核苷酸长、至少45个核苷酸长、至少50个核苷酸长、至少60个核苷酸长、至少70个核苷酸长、至少80个核苷酸长、至少90个核苷酸长或至少100个核苷酸长。dna扩增子可包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：seq id no:10；seq id no:9；seq id no:8；seq id no:7；seqid no:6；seq id no:5；seq id no:4；seq id no:3；seq id no:2；seq id no:1；以及seqid no:10、seq id no:8、seq id no:7、seq id no:6、seq id no:5、seq id no:4、seq idno:3、seq id no:2和seq id no:1中任一者的片段，所述片段是至少10个核苷酸长并包含seq id no:10的核苷酸1,000-1,001或11,196-11,197。
8、提供了检测源自于大豆种子、植物、植物部分、植物细胞、子代植物或商品产品的dna样品中大豆品系gm_csm63714的存在的另一种方法。所述方法包括：a)使样品与本文所描述的充当探针的任何dna分子接触；以及b)进行测序反应以产生靶序列。靶序列包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：seq id no:1；seq id no:2；seq id no:3；seq id no:4；seq id no:5；seq id no:6；seq id no:7；seq id no:8；seq id no:9；seq id no:10；其中任一者的完整互补序列；以及seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seqid no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8和seq id no:10中任一者的片段，所述片段是至少10个核苷酸长并包含seq id no:10的核苷酸1,000-1,001或11,196-11,197。
9、提供了检测源自于大豆种子、植物、植物部分、细胞、子代植物或商品产品的样品中大豆品系gm_csm63714的存在的另一种方法。所述方法包括：a)使样品与至少一种抗体接触，所述至少一种抗体对大豆品系gm_csm63714编码的至少一种蛋白质具有特异性；以及b)检测所述抗体与样品中蛋白质的结合。抗体的结合表明样品中存在大豆品系gm_csm63714。
10、提供了用于检测样品中大豆品系gm_csm63714的存在的dna检测试剂盒。这种dna检测试剂盒的一个实例是包含本文所描述的任何dna引物对的试剂盒。dna检测试剂盒的另一个实例是包含本文所描述的充当探针的任何dna分子的试剂盒。
11、还提供了用于检测样品中大豆品系gm_csm63714的存在的蛋白质检测试剂盒。这种试剂盒的一个实例是包含至少一种抗体的试剂盒，所述抗体对大豆品系gm_csm63714编码的至少一种蛋白质具有特异性。检测到所述至少一种抗体与样品中大豆品系gm_csm63714编码的至少一种蛋白质的结合将诊断样品中存在大豆品系gm_csm63714。
12、还提供了一种包含重组dna分子的大豆植物、植物种子、植物部分和植物细胞，所述重组dna分子包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:1；seq id no:2；seq id no:3；seq id no:4；seq id no:5；seq id no:6；seq id no:7；seq id no:8；seq id no:9；seqid no:10；具有与seq id no:10的全长或seq id no:9的全长至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％相同的序列的多核苷酸；以及前述任一者的完整互补序列。大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞可以表达至少一种除草剂耐受性基因，所述基因选自由以下组成的组：麦草畏单加氧酶(dmo)、膦丝菌素(phosphinothricin)n-乙酰转移酶(pat)、α-酮戊二酸依赖性非血红素铁双加氧酶变体ft_tv7、三酮双加氧酶(tdo)及其任何组合。大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞可以耐受至少一种选自由以下组成的组的除草剂：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。苯甲酸类生长素可以包含麦草畏；苯氧基类生长素可以包含2,4-d；谷氨酰胺合成酶抑制剂可以包含草铵膦；并且β-三酮hppd抑制剂可以选自由以下组成的组：甲基磺草酮(mesotrione)、双环磺草酮(benzobicyclon，bbc)、环磺酮(tembotrione)、磺草酮(sulcotrione)、特糠酯酮(tefuryltrione)及其任何组合。例如，β-三酮hppd抑制剂可以包含甲基磺草酮。大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞还可包含提供对至少一种额外除草剂的耐受性的额外转基因。例如，所述至少一种额外除草剂是草甘膦。当所述至少一种额外除草剂是草甘膦时，所述额外转基因可以包含多核苷酸序列，所述编码具有seq id no:57的氨基酸序列的蛋白质。大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞可包含大豆品系gm_csm63714，包含所述品系的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞还可定义为包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物的任一代的子代植物，或由其得到的大豆植物部分、植物种子或植物细胞。
13、还提供了大豆植物、植物部分、植物种子和植物细胞。大豆植物、植物部分、植物种子和植物细胞包含大豆品系gm_csm63714，包含大豆品系gm_csm63714的种子的代表性样品以atcc登录号pta-127099保藏。
14、本文所描述的任何大豆植物部分可包含小孢子、花粉、花药、胚珠、子房、花、豆荚、胚、茎、叶、根或愈伤组织。
15、提供了用于控制或防止一个区域内的杂草生长的方法。此类方法的一个实例包括在所述区域内种植包含品系gm_csm63714的大豆，并施用有效量的至少一种除草剂以控制所述区域内的杂草，同时不会对大豆造成损伤或对大豆的损伤小于约10％，所述除草剂选自由以下组成的组：麦草畏、草铵膦、2,4-d、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。施用有效量的至少一种除草剂可以包括在生长季施用至少两种或更多种除草剂，所述除草剂选自由以下组成的组：麦草畏、草铵膦、2,4-d、β-三酮类hppd抑制剂及其任何组合。β-三酮hppd抑制剂可选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。在生长季中，麦草畏的有效量可以是约0.5磅/英亩至约2磅/英亩。在生长季中，草铵膦的有效量可以是约0.4磅/英亩至约1.6磅/英亩。在生长季中，2,4-d的有效量可以是约0.5磅/英亩至约4磅/英亩。当β-三酮hppd抑制剂包含甲基磺草酮时，在生长季中甲基磺草酮的有效量可以是约0.09磅/英亩至约0.36磅/英亩。
16、提供了用于控制一个区域内包含大豆品系gm_csm63714的自生大豆的方法。此类方法的一个实例包括施用除草有效量的至少一种除麦草畏、草铵膦、2,4-d或β-三酮hppd抑制剂之外的除草剂，其中所述除草剂的施用将防止包含大豆品系gm_csm63714的大豆的生长。除二甲苯胺、草铵膦、2,4-d或β-三酮hppd抑制剂之外的除草剂可以选自由以下组成的组：莠去津(atrazine)、溴苯腈(3,5-二溴-4-羟基苯甲腈)、二氯吡啶酸(clopyralid)、嘧草硫醚(pyrithiobac)、异噁唑草酮(isoxaflutole)、苯唑草酮(topramezone)、氟草隆(fluometuron)、三氟啶磺隆(trifloxysulfuron)、甲基砷酸单钠(msma)、原卟啉原氧化酶(ppo)抑制剂及其任何组合。原卟啉原氧化酶(ppo)抑制剂的实例包括苯嘧磺草胺(saflufenacil)、丙炔氟草胺(flumioxazin)、甲磺草胺(sulfentrazone)及其任何组合。
17、提供了获得对苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂或其任何组合具有耐受性的大豆植物的种子或大豆植物的方法。在此类方法的一个实例中，所述方法包括：a)获得子代种子或由其生长的植物的群体，其中至少一者包含大豆品系gm_csm63714；以及b)鉴别包含大豆品系gm_csm63714的至少一第一子代种子或由其生长的植物。鉴别包含大豆品系gm_csm63714的子代种子或由其生长的植物可以包括：a)使所述子代种子或植物生长以产生子代植物；b)用有效量的至少一种除草剂处理所述子代植物，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合；以及c)选择对所述至少一种除草剂具有耐受性的子代植物，所述至少一种除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。苯甲酸类生长素可以包含麦草畏。苯氧基类生长素可以包含2,4-d。谷氨酰胺合成酶抑制剂可以包含草铵膦。β-三酮hppd抑制剂可选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。例如，β-三酮hppd抑制剂可以包含甲基磺草酮。或者或另外，鉴别包含大豆品系gm_csm63714的子代种子或由其生长的植物包括检测源自于子代种子或由其生长的植物的样品中大豆品系gm_csm63714的存在。或者或另外，鉴别包含大豆品系gm_csm63714的子代种子或由其生长的植物可以包括检测源自于子代种子或由其生长的植物的样品中大豆品系gm_csm63714编码的至少一种蛋白质的存在。
18、提供了确定包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞的接合性的方法。此类方法的一个实例包括：a)使包含源自于大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞的dna的样品与引物集接触，所述引物集能够产生用于诊断大豆品系gm_csm63714的存在的第一扩增子和用于诊断不含大豆品系gm_csm63714的野生型大豆基因组dna的第二扩增子；b)进行核酸扩增反应；以及c)检测第一扩增子和第二扩增子。两种扩增子的存在表明，植物、植物部分、种子或细胞对于大豆品系gm_csm63714来说是杂合的。仅存在第一扩增子表明，植物、植物部分、种子或细胞对于大豆品系gm_csm63714来说是纯合的。可使用的引物集的示例性实例是包含seq id no:14、seq id no:15和seq id no:20的引物集。
19、提供了确定包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞的接合性的另一种方法。所述方法包括：a)使包含源自于大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞的dna的样品与探针集接触，所述探针集包含与大豆品系gm_csm63714特异性杂交的至少一第一探针，以及与大豆基因组dna特异性杂交且不与大豆品系gm_csm63714杂交的至少一第二探针，所述大豆基因组dna因大豆品系gm_csm63714的异源dna的插入而被破坏；以及b)使探针集与样品在严格杂交条件下杂交。仅检测到第一探针在杂交条件下杂交将诊断大豆植物、植物部分、种子或植物细胞关于大豆品系gm_csm63714为纯合的。检测到第一探针和第二探针在杂交条件下均杂交将诊断大豆植物、植物部分、种子或植物细胞关于大豆品系gm_csm63714为杂合的。可使用的探针集的示例性实例是包含seq id no:16和seq id no:21的探针集。
20、提供了dna构建体。此类dna构建体的一个实例是包含第一表达盒、第二表达盒、第三表达盒和第四表达盒的dna构建体。第一表达盒以可操作的连接包含：i)来自拟南芥(arabidopsis thaliana)的泛素(ub3)启动子、前导序列和内含子序列；ii)来自拟南芥的apg6(albino and pale green 6)的叶绿体转运肽编码序列；iii)密码子优化的来自嗜麦芽寡养单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)的麦草畏单加氧酶编码序列(dmo)；以及iv)来自蒺藜苜蓿(medicago truncatula)的铝诱导的sali3-2蛋白的3'utr序列。第二表达盒以可操作的连接包含：i)源自于拟南芥的多个启动子和内含子序列的启动子和内含子序列；ii)密码子优化的来自绿产色链霉菌(streptomyces viridochromogene)的膦丝菌素n-乙酰转移酶(pat)编码序列；以及iii)来自蒺藜苜蓿的小热休克蛋白(hsp20)的3'utr。第三表达盒以可操作的连接包含：i)来自拟南芥的多聚泛素(ubq10)启动子、前导序列和内含子序列；ii)来自食除草剂鞘脂菌(sphingobium herbicidovorans)的α-酮戊二酸依赖性非血红素铁双加氧酶变体编码序列(ft_tv7)；以及iii)来自蒺藜苜蓿的推定蛋白质的3'utr序列。第四表达盒以可操作的连接包含：i)源自于拟南芥的多个启动子、前导序列和内含子序列的启动子、前导序列和内含子序列；ii)密码子优化的来自水稻(oryza sativa)的三酮双加氧酶(tdo)的编码序列；以及iii)源自于玉蜀黍(zea mays)的多个3'utr序列的3'utr序列。例如，dna构建体可包含seq id no:9。dna构建体还可在所述构建体的5’端或3’端包含：a)seq id no:11或seq id no:98的至少50个连续核苷酸；和/或b)seq id no:12或seq idno:99的至少50个连续核苷酸。
21、提供了另一种dna构建体。dna构建体包含第一表达盒、第二表达盒、第三表达盒和第四表达盒。第一表达盒包含麦草畏单加氧酶编码序列，第二表达盒包含膦丝菌素n-乙酰转移酶(pat)编码序列，第三表达盒包含能够降解2,4-d的α-酮戊二酸依赖性非血红素铁双加氧酶变体编码序列(ft_tv7)，第四表达盒包含三酮双加氧酶(tdo)编码序列。dna构建体在所述构建体的5'端或3'端还包含：(i)seq idno:11或seq id no:98的至少50个连续核苷酸；和/或(ii)seq id no:12或seq id no:99的至少50个连续核苷酸。
22、提供了另一种dna构建体。所述构建体包含具有与seq id no:9的全长至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％相同的序列的多核苷酸。所述dna构建体在所述构建体的5’端或3’端包含：(i)seq id no:11或seq id no:98的至少50个连续核苷酸；和/或(ii)seqid no:12或seq id no:99的至少50个连续核苷酸。
23、本文所描述的任何dna构建体均可包含在构建体5’端的seq id no:11或seq idno:98的至少50个连续核苷酸和在构建体3’端的seq id no:12或seq id no:99的至少50个连续核苷酸。本文所描述的任何dna构建体可在所述构建体的5’端包含一个或多个选自seqid no:58–77和seq id no:100–139的核苷酸序列。本文所描述的任何dna构建体可在所述构建体的3’端包含一个或多个选自seq id no:78–97和seq id no:140–179的核苷酸序列。
24、提供了包含本文所描述的任何dna构建体的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞。
25、提供了一种提高大豆植物对至少一种除草剂的耐受性的方法，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。所述方法包括：a)将本文所描述的任何dna构建体插入大豆细胞的基因组中；b)由所述大豆细胞产生大豆植物；以及c)选择包含dna构建体的大豆植物。所述选择可以包括用有效量的至少一种除草剂处理大豆细胞或植物，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。苯甲酸类生长素可以包含麦草畏；苯氧基类生长素包含2,4-d；谷氨酰胺合成酶抑制剂可以包含草铵膦；并且β-三酮hppd抑制剂可以选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。例如，β-三酮hppd抑制剂可以包含甲基磺草酮。
26、还提供了一种在单个基因组位置处对具有至少三种不同除草剂作用模式的除草剂具有耐受性的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞。大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞包含本文所描述的任何dna构建体。
27、还提供了对至少一种除草剂具有耐受性的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞包含本文所提供的任何dna构建体。苯甲酸类生长素可以包含麦草畏；苯氧基类生长素可以包含2,4-d；谷氨酰胺合成酶抑制剂可以包含草铵膦；并且β-三酮hppd抑制剂可以选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。例如，β-三酮hppd抑制剂可以是甲基磺草酮。
28、任何大豆种子、植物、植物部分或细胞均可通过本文所提供的提高大豆植物对至少一种除草剂的耐受性的方法获得，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。
29、任何大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞都可以对至少一种额外的除草剂具有耐受性。例如，所述至少一种额外的除草剂可以包含草甘膦。
30、提供了一种产生包含大豆品系gm_csm63714的子代大豆植物的方法。所述方法包括：a)使包含大豆品系gm_csm63714的第一大豆植物与其自身或第二大豆植物进行有性杂交；b)收集杂交产生的一个或多个种子；c)使一个或多个种子生长以产生一株或多株子代植物；以及d)选择包含大豆品系gm_csm63714的至少一第一子代植物或种子。还提供了通过所述方法产生的包含大豆品系gm_csm63714的自交型和杂交型大豆植物和种子。
31、还提供了无生命大豆植物材料和不可再生的大豆植物材料。所述材料可以包含本文所描述的任何重组dna分子或任何dna构建体。
32、还提供了包含大豆品系gm_csm63714的无生命大豆植物材料或不可再生的大豆植物材料，包含大豆品系大豆品系gm_csm63714的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。
33、还提供了商品产品。此类商品产品的一个实例是包含本文所描述的任何重组dna分子或任何dna构建体的商品产品。所述商品产品可以由包含大豆品系gm_csm63714的转基因大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞产生。所述商品产品可以包含例如完整或加工过的种子；有活力或无活力的种子；有活力的植物部分(如根和叶)；有活力的植物细胞；加工过的植物部分；加工过的植物组织；脱水的植物组织；脱水的植物部分；冷冻的植物组织；冷冻的植物部分；供人消费的食品，如大豆油、豆奶、豆粉、大豆粗粉、大豆蛋白、大豆浓缩蛋白、水解植物蛋白、组织化大豆蛋白、卵磷脂、凝乳、豆腐、菜用大豆(毛豆)、豆芽、豆皮(腐竹(yuba))、烤大豆、味噌(miso)、丹贝(tempeh)、酱油或纳豆(natto)；加工成用于动物饲料的植物部分，如豆粕；大豆纤维；生物柴油；生物复合建筑材料，如刨花板、层压胶合板或木材制品；大豆油基溶剂；大豆油基工业润滑剂；大豆油墨；大豆蜡烛；大豆蜡笔；大豆基液压油；或大豆基泡沫。
34、提供了一种生产商品产品的方法。所述方法包括：a)获得包含大豆品系gm_csm63714的转基因大豆植物、植物部分或植物种子；以及b)由所述转基因大豆植物、植物部分或植物种子生产商品产品。
35、提供了一种控制、防止或减少除草剂耐受性杂草的发育的方法。所述方法包括在作物生长环境中栽培包含转基因的大豆植物，所述转基因在单个基因组位置处提供对具有至少三种不同除草剂作用模式的除草剂的耐受性。所述至少三种不同除草剂作用模式可选自由以下组成的组：抑制谷氨酰胺合成酶、抑制4-羟基苯基丙酮酸双加氧酶(hppd)、苯氧基类生长素和苯甲酸类生长素。
36、还提供了一种用于控制、防止或减少除草剂耐受性杂草的发育的方法。所述方法包括：a)在作物生长环境中栽培大豆植物，所述大豆植物包含本文所描述的任何dna构建体，用于在单个基因组位置处提供对具有至少三种不同除草剂作用模式的除草剂的耐受性；以及b)向作物生长环境施用至少一种除草剂，所述除草剂选自由以下组成的组：麦草畏、草铵膦、2,4-d、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合，其中大豆植物对至少一种除草剂具有耐受性。大豆植物还可以包含针对额外的除草剂作用模式的至少一种额外的转基因。例如，所述至少一种额外的转基因可以是用于赋予草甘膦耐受性的epsps。epsps转基因可以包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码具有seq id no:57的氨基酸序列的蛋白质。
37、提供了一种减少供大豆育种的基因座的方法，所述方法是通过在单个基因组位置处插入转基因以提供对至少三种不同类别的除草剂的耐受性实现。转基因可以作为单分子连接的转基因插入物插入。单分子连接的转基因插入物可以针对每种除草剂作用模式的至少一种除草剂提供商业水平的耐受性。
38、还提供了大豆植物、植物细胞、植物部分和植物种子。大豆植物、植物细胞、植物部分和植物种子包含整合于13号染色体中的重组dna构建体。重组dna构建体赋予对至少一种除草剂的耐受性，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂和其任何组合。重组dna构建体整合于所述染色体中侧接seq id no:11的至少50个连续核苷酸和seq id no:12的至少50个连续核苷酸的位置。苯甲酸类生长素可以包含麦草畏；苯氧基类生长素可以包含2,4-d；谷氨酰胺合成酶抑制剂可以包含草铵膦；并且β-三酮hppd抑制剂可以选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。例如，β-三酮hppd抑制剂可以是甲基磺草酮。seq id no:11的至少50个连续核苷酸可包含选自seq id no:58-77的一个或多个核苷酸序列。seq id no:12的至少50个连续核苷酸可包含选自seq id no:78–97的一个或多个核苷酸序列。
技术特征：
1.一种重组dna分子，包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：seq id no:10；seq idno:1；seq id no:2；seq id no:3；seq id no:4；seq id no:5；seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8；seq id no:9；具有与seq id no:10的全长或seq id no:9的全长至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％相同的核苷酸序列的多核苷酸；以及前述任一者的完整互补序列。
2.如权利要求1所述的重组dna分子，其中所述重组dna分子源自于包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、种子、植物部分、植物细胞、子代植物或商品产品，包含所述品系的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。
3.如权利要求1所述的重组dna分子，其中所述重组dna分子被包含在含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、种子、植物部分、植物细胞或子代植物中，或由其生产的商品产品中，包含所述品系的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。
4.如权利要求1所述的重组dna分子，其中所述重组dna分子是通过将异源核酸分子插入大豆植物或大豆细胞的基因组dna中而形成。
5.如权利要求1所述的重组dna分子，其中所述重组dna分子包含诊断大豆品系gm_csm63714的存在的扩增子。
6.一种dna分子，包含长度足以充当dna探针的多核苷酸区段，所述多核苷酸区段在严格杂交条件下与样品中的大豆品系gm_csm63714 dna特异性杂交，其中检测到所述dna分子在所述严格杂交条件下杂交将诊断所述样品中大豆品系gm_csm63714的存在。
7.一种dna分子，包含长度足以充当dna探针的多核苷酸区段，所述多核苷酸区段对于检测样品中以下至少一者具有特异性：
8.如权利要求6或7所述的dna分子，其中所述dna探针包含seq id no:16。
9.如权利要求6或7所述的dna分子，其中所述dna分子包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10以及前述任一者的互补序列。
10.如权利要求6-9中任一项所述的dna分子，其中所述样品源自于大豆植物、种子、植物部分、植物细胞、子代植物或商品产品。
11.一种dna分子对，包含第一dna分子和第二dna分子，其中所述第一dna分子和所述第二dna分子包含seq id no:10的片段或其互补序列，并且当与包含大豆品系gm_csm63714的dna一起用于扩增反应时充当dna引物以产生诊断样品中的大豆品系gm_csm63714的扩增子。
12.如权利要求11所述的dna分子对，其中所述第一dna分子和所述第二dna分子包含seq id no:14和seq id no:15。
13.如权利要求11所述的dna分子对，其中所述扩增子包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：
14.一种检测源自于大豆种子、植物、植物部分、植物细胞、子代植物或商品产品的样品中大豆品系gm_csm63714的存在的方法，所述方法包括：
15.一种检测源自于大豆种子、植物、植物部分或植物细胞、子代植物和商品产品的样品中大豆品系gm_csm63714的存在的方法，所述方法包括：
16.如权利要求15所述的方法，其中所述dna扩增子是至少10个核苷酸长、至少11个核苷酸长、至少12个核苷酸长、至少13个核苷酸长、至少14个核苷酸长、至少15个核苷酸长、至少16个核苷酸长、至少17个核苷酸长、至少18个核苷酸长、至少19个核苷酸长、至少20个核苷酸长、至少25个核苷酸长、至少30个核苷酸长、至少35个核苷酸长、至少40个核苷酸长、至少45个核苷酸长、至少50个核苷酸长、至少60个核苷酸长、至少70个核苷酸长、至少80个核苷酸长、至少90个核苷酸长或至少100个核苷酸长。
17.如权利要求15或16所述的方法，其中所述dna扩增子包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：seq id no:10；seq id no:9；seq id no:8；seq id no:7；seq id no:6；seq idno:5；seq id no:4；seq id no:3；seq id no:2；seq id no:1；以及seq id no:10、seq idno:8、seq id no:7、seq id no:6、seq id no:5、seq id no:4、seq id no:3、seq id no:2和seq id no:1中任一者的片段，所述片段是至少10个核苷酸长且包含seq id no:10的核苷酸1,000–1,001或11,196-11,197。
18.一种检测源自于大豆种子、植物、植物部分、植物细胞、子代植物或商品产品的dna的样品中大豆品系gm_csm63714的存在的方法，所述方法包括：
19.一种检测源自于大豆种子、植物、植物部分、细胞、子代植物或商品产品的样品中大豆品系gm_csm63714的存在的方法，所述方法包括：
20.一种用于检测样品中大豆品系gm_csm63714的存在的dna检测试剂盒，其中所述试剂盒包括：
21.一种用于检测样品中大豆品系gm_csm63714的存在的蛋白质检测试剂盒，其中所述试剂盒包含至少一种抗体，所述至少一种抗体对大豆品系gm_csm63714编码的至少一种蛋白质具有特异性；其中检测所述至少一种抗体与样品中所述大豆品系gm_csm63714编码的至少一种蛋白质的结合将诊断所述样品中大豆品系gm_csm63714的存在。
22.一种包含重组dna分子的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，所述重组dna分子包含选自由以下组成的组的序列：seq id no:1；seq id no:2；seq id no:3；seq idno:4；seq id no:5；seq id no:6；seq id no:7；seq id no:8；seq id no:9；seq id no:10；具有与seq id no:10的全长或seq id no:9的全长至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％相同的序列的多核苷酸；以及前述任一者的完整互补序列。
23.如权利要求22所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述植物、植物种子、植物部分或植物细胞表达至少一种除草剂耐受性基因，所述基因选自由以下组成的组：麦草畏单加氧酶(dmo)、膦丝菌素n-乙酰转移酶(pat)、α-酮戊二酸依赖性非血红素铁双加氧酶变体ft_tv7、三酮双加氧酶(tdo)及其任何组合。
24.如权利要求22或23所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述植物、植物种子、植物部分或植物细胞对至少一种选自由以下组成的组的除草剂具有耐受性：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。
25.如权利要求24所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中：所述苯甲酸类生长素包含麦草畏；所述苯氧基类生长素包含2,4-d；所述谷氨酰胺合成酶抑制剂包含草铵膦；并且所述β-三酮hppd抑制剂选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。
26.如权利要求25所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述植物、植物种子、植物部分或植物细胞对甲基磺草酮具有耐受性。
27.如权利要求22-27中任一项所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述植物、植物种子、植物部分或植物细胞还包含提供对至少一种额外除草剂的耐受性的额外转基因。
28.如权利要求27所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述至少一种额外除草剂是草甘膦。
29.如权利要求28所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述额外转基因包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码具有seq id no:57的氨基酸序列的蛋白质。
30.如权利要求22–29中任一项所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述植物、植物种子、植物部分或植物细胞包含大豆品系gm_csm63714，包含所述品系的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。
31.如权利要求22-30中任一项所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述植物、植物种子、植物部分或植物细胞另外定义为包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物的任一代的子代植物，或由其得到的大豆植物部分、植物种子或植物细胞。
32.一种包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞，包含大豆品系gm_csm63714的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。
33.如权利要求22-32中任一项所述的大豆植物部分，其中所述植物部分包含小孢子、花粉、花药、胚珠、子房、花、豆荚、胚、茎、叶、根或愈伤组织。
34.一种用于控制或防止一个区域中的杂草生长的方法，所述方法包括在所述区域中种植包含品系gm_csm63714的大豆，并施用有效量的至少一种除草剂，以控制所述区域中的杂草，同时不会对所述大豆造成损伤或对所述大豆的损伤小于约10％，所述除草剂选自由以下组成的组：麦草畏、草铵膦、2,4-d、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。
35.如权利要求34所述的方法，其中施用所述有效量的至少一种除草剂包括在生长季内施用至少两种或更多种除草剂，所述除草剂选自由以下组成的组：麦草畏、草铵膦、2,4-d、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。
36.如权利要求34或35所述的方法，其中所述β-三酮hppd抑制剂选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。
37.如权利要求34-36中任一项所述的方法，其中麦草畏的有效量在生长季内是约0.5磅/英亩至约2磅/英亩；其中草铵膦的有效量在生长季内是约0.4磅/英亩至约1.6磅/英亩；其中2,4-d的有效量生长季内是约0.5磅/英亩至约4磅/英亩；和/或其中所述β-三酮hppd抑制剂包含甲基磺草酮并且甲基磺草酮的有效量在生长季内是约0.09磅/英亩至约0.36磅/英亩。
38.一种用于控制一个区域内包含大豆品系gm_csm63714的自生大豆的方法，所述方法包括施用除草有效量的至少一种除麦草畏、草铵膦、2,4-d或β-三酮hppd抑制剂之外的除草剂，其中所述除草剂的施用防止包含大豆品系gm_csm63714的大豆的生长。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述除麦草畏、草铵膦、2,4-d或β-三酮hppd抑制剂之外的除草剂选自由以下组成的组：莠去津、溴苯腈(3,5-二溴-4-羟基苯甲腈)、二氯吡啶酸、嘧草硫醚、异噁唑草酮、苯唑草酮、伏草隆、三氟啶磺隆、甲基砷酸单钠(msma)、原卟啉原氧化酶(ppo)抑制剂及其任何组合。
40.如权利要求39所述的方法，其中原卟啉原氧化酶(ppo)的抑制剂包括苯嘧磺草胺、丙炔氟草胺、甲磺草胺或其任何组合。
41.一种获得对苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂或其任何组合具有耐受性的大豆植物的种子或大豆植物的方法，所述方法包括：
42.如权利要求41所述的方法，其中鉴别包含大豆品系gm_csm63714的所述子代种子或由其生长的植物包括：
43.如权利要求41或42所述的方法，其中：所述苯甲酸类生长素包含麦草畏；所述苯氧基类生长素包含2,4-d；所述谷氨酰胺合成酶抑制剂包含草铵膦；并且所述β-三酮hppd抑制剂选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。
44.如权利要求41-43中任一项所述的方法，其中鉴别包含大豆品系gm_csm63714的所述子代种子或由其生长的植物包括检测源自于所述子代种子或由其生长的植物的样品中大豆品系gm_csm63714的存在。
45.如权利要求41-44中任一项所述的方法，其中鉴别包含大豆品系gm_csm63714的所述子代种子或由其生长的植物包括检测源自于所述子代种子或由其生长的植物的样品中大豆品系gm_csm63714编码的至少一种蛋白质的存在。
46.一种确定包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞的接合性的方法，所述方法包括：
47.如权利要求46所述的方法，其中所述引物集包含seq id no:14、seq id no:15和seq id no:20。
48.一种确定包含大豆品系gm_csm63714的大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞的接合性的方法，所述方法包括：
49.如权利要求48所述的方法，其中所述探针集包含seq id no:16和seq id no:21。
50.一种dna构建体，包含第一表达盒、第二表达盒、第三表达盒和第四表达盒，其中：
51.如权利要求50所述的dna构建体，其中所述dna构建体包含seq id no:9。
52.一种提高大豆植物对至少一种除草剂的耐受性的方法，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合，所述方法包括：
53.如权利要求52所述的方法，其中所述选择包括用有效量的至少一种除草剂处理所述大豆细胞或植物，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合。
54.如权利要求52或53所述的方法，其中：所述苯甲酸类生长素包含麦草畏；所述苯氧基类生长素包含2,4-d；所述谷氨酰胺合成酶抑制剂包含草铵膦；并且所述β-三酮hppd抑制剂选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。
55.一种在单个基因组位置处对具有至少三种不同除草剂作用模式的除草剂具有耐受性的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞。
56.如权利要求55所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞包含权利要求50或51所述的dna构建体。
57.一种对至少一种除草剂具有耐受性的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合，其中所述大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞包含权利要求50或51所述的dna构建体。
58.如权利要求57所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中：所述苯甲酸类生长素包含麦草畏；所述苯氧基类生长素包含2,4-d；所述谷氨酰胺合成酶抑制剂包含草铵膦；并且所述β-三酮hppd抑制剂选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。
59.如权利要求55-58中任一项所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述大豆种子、植物、植物部分或细胞是通过权利要求52-54中任一项所述的方法获得的。
60.如权利要求55–59中任一项所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述植物、植物种子、植物部分或植物细胞对至少一种额外除草剂具有耐受性。
61.如权利要求60所述的大豆植物、植物种子、植物部分或植物细胞，其中所述至少一种额外除草剂包含草甘膦。
62.一种产生包含大豆品系gm_csm63714的子代大豆植物的方法，所述方法包括：
63.一种自交型或杂交型大豆植物或种子，包含由权利要求62所述的方法产生的大豆品系gm_csm63714。
64.一种无生命或不可再生的大豆植物材料，包含权利要求1-4中任一项所述的重组dna分子或者权利要求50或51所述的dna构建体。
65.一种包含大豆品系gm_csm63714的无生命或不可再生的大豆植物材料，包含所述大豆品系大豆品系gm_csm63714的种子的代表性样品已以atcc登录号pta-127099保藏。
66.一种商品产品，包含权利要求1–4中任一项所述的重组dna分子或者权利要求50或51所述的dna构建体。
67.如权利要求66所述的商品产品，其中所述商品产品是由包含所述大豆品系gm_csm63714的转基因大豆植物、植物部分、植物种子或植物细胞生产的。
68.如权利要求66或67所述的商品产品，其中所述商品产品包含完整或加工过的种子；有活力或无活力的种子；有活力的植物部分(如根和叶)；有活力的植物细胞；加工过的植物部分；加工过的植物组织；脱水的植物组织；脱水的植物部分；冷冻的植物组织；冷冻的植物部分；供人消费的食品，如大豆油、豆奶、豆粉、大豆粗粉、大豆蛋白、大豆浓缩蛋白、水解植物蛋白、组织化大豆蛋白、卵磷脂、凝乳、豆腐、菜用大豆(毛豆)、豆芽、豆皮(腐竹)、烤大豆、味噌、丹贝、酱油或纳豆；加工成用于动物饲料的植物部分，如豆粕；大豆纤维；生物柴油；生物复合建筑材料，如刨花板、层压胶合板或木材制品；大豆油基溶剂；大豆油基工业润滑剂；大豆油墨；大豆蜡烛；大豆蜡笔；大豆基液压油；或大豆基泡沫。
69.一种生产商品产品的方法，所述方法包括：
70.一种控制、防止或减少除草剂耐受性杂草的发育的方法，所述方法包括在作物生长环境中栽培包含转基因的大豆植物，所述转基因在单个基因组位置处提供对具有至少三种不同除草剂作用模式的除草剂的耐受性。
71.如权利要求70所述的方法，其中所述至少三种不同除草剂作用模式选自由以下组成的组：抑制谷氨酰胺合成酶、抑制4-羟基苯基丙酮酸双加氧酶(hppd)、苯氧基类生长素和苯甲酸类生长素。
72.一种用于控制、防止或减少除草剂耐受性杂草的发育的方法，所述方法包括：
73.如权利要求70-72中任一项所述的方法，其中所述大豆植物还包含针对额外的除草剂作用模式的至少一种额外的转基因。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述至少一种额外的转基因是用于赋予对草甘膦的耐受性的epsps。
75.如权利要求74所述的方法，其中所述epsps转基因包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码具有seq id no:57的氨基酸序列的蛋白质。
76.一种减少大豆育种的基因座的方法，所述方法是通过在单个基因组位置处插入转基因以提供对至少三种不同类别的除草剂的耐受性实现。
77.如权利要求76所述的方法，其中所述转基因是以单分子连接的转基因插入物形式插入。
78.如权利要求77所述的方法，其中所述单分子连接的转基因插入物提供针对每种除草剂作用模式的至少一种除草剂的商业水平的耐受性。
79.如权利要求50或51所述的dna构建体，所述dna构建体在所述构建体的5'端或3'端还包含：
80.一种dna构建体，包含第一表达盒、第二表达盒、第三表达盒和第四表达盒，其中：(a)所述第一表达盒包含麦草畏单加氧酶编码序列；(b)所述第二表达盒包含膦丝菌素n-乙酰转移酶(pat)编码序列；(c)所述第三表达盒包含能够降解2,4-d的α-酮戊二酸依赖性非血红素铁双加氧酶变体编码序列(ft_tv7)；以及(d)所述第四表达盒包含三酮双加氧酶(tdo)编码序列；并且其中所述dna构建体在所述构建体的5’或3’端还包含(i)seq id no:11或seq id no:98的至少50个连续核苷酸；或者(ii)seq id no:12或seq id no:99的至少50个连续核苷酸。
81.一种dna构建体，包含具有与seq id no:9的全长至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％相同的序列的多核苷酸；并且其中所述dna构建体在所述构建体的5’端或3’端包含：(i)seq id no:11或seq id no:98的至少50个连续核苷酸；或(ii)seq id no:12或seqid no:99的至少50个连续核苷酸。
82.如权利要求79-81中任一项所述的dna构建体，其中所述dna构建体在所述构建体的5'端包含seq id no:11或seq id no:98的至少50个连续核苷酸并且在所述构建体的3'端包含seq id no:12或seq id no:99的至少50个连续核苷酸。
83.如权利要求79-82中任一项所述的dna构建体，其中所述构建体在所述构建体的5'端包含选自seq id no:58-77和seq id no:100-139的一个或多个核苷酸序列。
84.如权利要求79-83中任一项所述的dna构建体，其中所述构建体在所述构建体的3'端包含选自seq id no:78–97和seq id no:140–179的一个或多个核苷酸序列。
85.一种大豆植物、植物细胞、植物部分或植物种子，包含权利要求79-84中任一项所述的dna构建体。
86.一种大豆植物、植物细胞、植物部分或植物种子，包含整合于13号染色体中的重组dna构建体，其中所述重组dna构建体赋予对至少一种除草剂的耐受性，所述除草剂选自由以下组成的组：苯甲酸类生长素、苯氧基类生长素、谷氨酰胺合成酶抑制剂、β-三酮hppd抑制剂及其任何组合，并且其中所述重组dna构建体整合于所述染色体中侧接seq id no:11或seq id no:98的至少50个连续核苷酸和seq id no:12或seq id no:99的50个连续核苷酸的位置。
87.如权利要求86所述的大豆植物、植物细胞、植物部分或植物种子，其中：所述苯甲酸类生长素包含麦草畏；所述苯氧基类生长素包含2,4-d；所述谷氨酰胺合成酶抑制剂包含草铵膦；并且所述β-三酮hppd抑制剂选自由以下组成的组：甲基磺草酮、双环磺草酮(bbc)、环磺酮、磺草酮、特糠酯酮及其任何组合。
88.如权利要求86或87所述的大豆植物、植物细胞、植物部分或植物种子，其中所述seqid no:11或seq id no:98的至少50个连续核苷酸包含选自seq id no:58–77和seq id no:100–139的一个或多个核苷酸序列。
89.如权利要求86-88中任一项所述的大豆植物、植物细胞、植物部分或植物种子，其中所述seq id no:12或seq id no:99的至少50个连续核苷酸包含选自seq id no:78–97和seq id no:140–179的一个或多个核苷酸序列。
技术总结
提供了一种转基因大豆品系Gm_CSM63714。还提供了含有品系Gm_CSM63714的转基因植物细胞、植物部分、植物、种子、子代植物以及农产品和商品产品。还提供了品系Gm_CSM63714特有的重组DNA分子，以及使用和检测Gm_CSM63714的方法。含有品系Gm_CSM63714的大豆植物对以下各物表现出耐受性：苯甲酸类生长素，例如麦草畏；苯氧基类生长素，例如2,4‑D；谷氨酰胺合成酶抑制剂，例如草铵膦；以及4‑羟基苯基丙酮酸双加氧酶(HPPD)的P‑三酮抑制剂，例如甲基磺草酮。
技术研发人员：S·布朗,C·M·埃利斯,T·E·克林格曼,C·拉吕,齐群刚,绍爱华,J·维赫
受保护的技术使用者：孟山都技术公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5