抗体-药物偶联物的制作方法

本发明涉及靶向c-kit的抗体-药物偶联物及其用途。

背景技术：

1、若干细胞因子(scf)与c-kit(又称cd117)结合时，可激活多种信号转导途径，包括磷酸肌醇-3-激酶、磷脂酶c-γ、src激酶、janus激酶-信号转导及转录激活因子(yasuda aet al.,dig dis sci 52,2292-2300.(2007)；sun j,pedersen m&ronnstrand l,j biolchem 284,11039-11047.(2009))。

2、先前的研究报道，具有致癌性突变的c-kit的表达在各种癌症中不受调节或上调，导致scf非依赖性c-kit激活和细胞增殖。c-kit的过表达由包括ap-2、ets、sp1、myb及mitf的各种转录因子激活和缺氧症诱导。目前已在人类肿瘤中确认到500个以上的c-kit突变(sanger institute catalog of somatic mutations in cancer,https://cancer.sanger.ac.uk)。在约85％、30％、25％、25％及90％的胃肠道间质瘤(gist)、急性骨髓性白血病、末端黑色素瘤、睾丸癌及全身肥大细胞瘤(sm)中检测到scf非依赖性自发激活c-kit突变(lennartsson j&ronnstrand l,physiol rev 92,1619-1649.(2012))。

3、用于去除携带c-kit的组成型激活突变的癌症干细胞的诸如伊马替尼等小分子的功效在不同位点携带突变的肿瘤细胞中其功效受限。为了克服c-kit突变诱变治疗抗性，开发了达沙替尼、舒尼替尼、阿昔替尼等各种小分子(abbaspour babaei m et al.,drug desdevel ther 10,2443-2459.(2016))。但是，接受这些小分子治疗的患者中3/4级异常反应比例高于接受伊马替尼治疗的患者，因此限制了其在癌症治疗中的有效应用(kantarjianhm et al.,blood 119,1123-1129.(2012))。

4、抗体-药物偶联物(adc)利用单克隆抗体对癌细胞的特异性，可以实现强细胞毒性制剂的传递。近年来，靶向cd30(维布妥昔单抗/本妥昔单抗(brentuximab vedotin))、cd22(奥加伊妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin))、cd79b(泊洛妥珠单抗(polatuzumabvedotin))、以及her2(恩美曲妥珠单抗(trastuzumab emtansine)和德曲妥珠单抗(trastuzumab deruxtecan))的各种adc已被美国食品药品监督管理局(fda)批准(leung det al.,antibodies(basel)9,2.(2020))。这些adc是与靶分子的细胞外结构域结合的基于抗体的药物，因此具有没有主要发生在细胞内结构域中的突变，且能够无关于各种突变来应用的相对优点。

技术实现思路

1、发明要解决的技术问题

2、本发明的目的在于，提供以下式的抗体-药物偶联物：

3、ab-(l1)m-(s)n-(l2)p-(d)q

4、在所述式中，ab是序列号9及序列号10中特异性结合人c-kit的表位的抗-c-kit抗体或其抗原结合片段；l1是连接所述ab和s或连接ab和l2的接头；s是连接有聚合物或未连接有聚合物的形式的间隔子(spacer)；l2是可裂解接头(cleavable linker)；d是药物部分；m是0至8的整数；n是0至8的整数；p是1至8的整数；q是1至8的整数。

5、本发明的再一目的在于，提供以下式的抗体-药物偶联物：

6、ab-(l)x-(d)y

7、在所述式中，ab是序列号9及序列号10中特异性结合人c-kit的表位的抗-c-kit抗体或其抗原结合片段；l是包括可裂解接头(cleavable linker)的接头；d是药物部分；x是1至8的整数；y是1至8的整数。

8、本发明的另一目的在于，提供包含所述抗体-药物偶联物的组合物。

9、本发明的还一目的在于，提供癌症的预防或治疗方法，该方法包括：将药物学有效量的所述组合物施用于需要该组合物的受试体的步骤。

10、本发明的又一目的在于，提供所述组合物的治疗用途(for use in therapy)。

11、本发明的又一目的在于，提供包含所述抗体-药物偶联物的癌症预防或治疗用药物学组合物。

12、本发明的又一目的在于，提供用于制备所述药物学组合物的用途。

13、本发明的又一目的在于，提供包含所述抗体-药物偶联物的癌症诊断用组合物。

14、本发明的又一目的在于，提供用于癌症诊断的信息提供方法，该方法包括：将所述抗体-药物偶联物处理到从受试体分离的样品的步骤。

15、本发明的又一目的在于，提供抗-c-kit抗体-药物偶联物的生产方法，该方法包括：将(l1)m-(s)n-(l2)p-(d)q偶联到特异性结合人c-kit的抗体或其抗原结合片段(ab)的步骤：

16、在所述式中，l1是连接所述ab和s或连接ab和l2的接头；s是连接有聚合物或未连接有聚合物的形式的间隔子(spacer)；l2是可裂解接头(cleavable linker)；d是药物部分；m是0至8的整数；n是0至8的整数；p是1至8的整数；q是1至8的整数。

17、本发明的又一目的在于，提供抗-c-kit抗体-药物偶联物的生产方法，该方法包括：包括序列号1的重链cdr1、序列号2的重链cdr2、序列号3的重链cdr3、序列号4的轻链cdr1、序列号5的轻链cdr2以及序列号6的轻链cdr3的抗体或其抗原结合片段中偶联接头(l)-药物(d)的步骤，该方法的特征在于，所述l是包括可裂解接头的接头，所述d是药物部分。

18、通过以下发明的详细说明、发明要求保护范围以及附图，本发明的其他目的和优点更加明确。

19、用于解决技术问题的手段

20、本发明涉及抗体-药物偶联物及其用途，并且表明例如通过包含特异性结合到人c-kit的抗体或其抗原结合片段的抗体-药物偶联物的给药，可以控制、治疗、缓解或减少癌症或抑制癌症复发。

21、为了便于本发明的理解，定义多个术语和语句。在整个详细说明中提出附加定义。

22、i.定义

23、在本说明书中，术语“约”用作大概(approximately)、大致(roughly)、大约(around)、或～～的区域内。当术语“约”与数值范围一同使用时，通过将边界向上和向下扩展提出数值来改变该范围。通常，术语“约”可以将数值改变为提出的值的上下值，例如，向上或向下(更高或更低)10％的变动。

24、此外，“和/或”应被解释为两个规定的特征或成分中的每一个与剩余的一个一起或单独具体公开。因此，“a和/或b”等语句中使用的术语“和/或”旨在包括“a和b”、“a或b”、“a”(单独)、以及“b”(单独)。同样，在“a、b和/或c”等语句中使用的术语“和/或”旨在分别包括a、b及c；a、b或c；a或c；a或b；b或c；a和c；a和b；b和c；a(单独)；b(单独)；以及c(单独)的方式。

25、本说明书中使用的术语“治疗”、“治疗的”以及“治疗”是指逆转、改善、缓解、阻碍或延缓与疾病相关的症状、并发症、状态或生化指标的进行、发生、严重程度或复发为目的，对受试者进行的任意一种干预或过程，或向受试者施用活化剂。治疗可以对有疾病的受试者或没有疾病的受试者(例如，预防)进行。

26、本说明书中使用的术语“给药”是指，使用本发明所属技术领域的普通技术人员已知的各种方法及递送系统(delivery systems)中的任何一种，向受试者物理性地引入治疗剂或包含治疗剂的组合物。用于本说明书中公开的抗体-药物偶联物的不同给药途径包括静脉内、腹腔内、肌肉内、皮下、脊椎或其他肠外给药途径，例如，通过注射(injection)或输注(infusion)的给药途径。本说明书中使用的术语“肠外给药”一般是指除通过注射的消化道(enteral)给药和局部(topical)给药以外的其他给药方式，虽然没有限制，但包括静脉内、腹腔内、肌肉内、动脉内，脊椎腔内、淋巴内、病灶内、囊内(intracapsular)、眼眶内(intraorbital)、心脏内、皮内、经气管(transtracheal)、气管内、肺、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脑室内、玻璃体内、硬膜外、以及胸骨下注射和输注，以及体内电穿孔。或者，本说明书中公开的抗体-药物偶联物可通过肠外途径给药，例如可通过局部、上皮或粘膜给药途径给药，例如，可通过鼻内、口服、阴道、直肠，舌下或局部途径给药。此外，给药可经过例如，一次、多次、和/或一次以上的延长期间进行。

27、本说明书中使用的术语“治疗有效量”是指单独或与其他治疗剂联合使用，有效“治疗”受试者的疾病或障碍，或者有效降低疾病或障碍(例如，癌症)的风险、潜在性、可能性或发生的药物剂量。“治疗有效量”包括为患有疾病或障碍(例如，癌症)或具有风险的受试者提供部分改善或益处的药物或治疗剂的量。因此，“治疗有效量”是降低疾病或障碍的风险、潜在性、可能性或发生，或提供部分缓解、减轻和/或减少至少一项指标(例如，癌症)和/或减少疾病或障碍的至少一种临床症状的剂量。

28、本说明书中使用的术语“癌症”(cancer)是指以体内异常细胞的不受控制的生长作为特征的广泛人群的各种疾病。“癌症”或“癌组织”可包括肿瘤(tumor)。不受调节的细胞分裂和生长会导致侵犯邻里组织的恶性肿瘤(malignant tumors)的形成，这也可以通过淋巴系统或血流转移到身体的远处部位。可以说，转移后，远端肿瘤(distal tumors)“来源于”转移前肿瘤。例如，从黑色素瘤“来源的肿瘤”是指作为转移的黑色素瘤的结果的肿瘤。由于远端肿瘤来源于转移前肿瘤，因此“来源于”肿瘤还可包括转移前肿瘤，例如，来源于黑色素瘤的肿瘤可包括黑色素瘤。

29、本说明书中使用的语句“阻碍肿瘤生长”包括肿瘤生长的任意可测定的减少，例如，包括至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约99％、或100％为止的肿瘤生长的阻碍。

30、术语“有效量”、“药物学有效量”或“有效剂量”被定义为足以实现或至少部分实现预期效果的量。药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是单独或与其他治疗剂组合使用时，通过疾病症状的严重程度的减少来证明的疾病退化(regression)、无疾病症状期间的频率及持续时间的增加、或促进预防疾病引起的障碍或伤害的药物量。药物的治疗有效量或有效剂量包括“预防有效量”或“预防有效剂量”，这是单独或与其他治疗剂并用以施用于具有发生疾病风险或可能因疾病复发而遭受痛苦风险的受试者时，阻碍疾病的发生或复发的药物剂量。促进疾病退化或阻碍疾病的发生或复发的治疗剂的功效可使用本发明所属技术领域的普通技术人员已知的各种方法进行评价，例如，在临床试验期间，可以通过在人类受试者中、预测人类中的功效的动物模型系统中、或者在体外测定中分析制剂的活性来进行评价。

31、例如，抗癌剂是促进受试者的癌症退化的药物。在一些具体例中，该药物的治疗有效量会促进癌症退化，直到癌症被消除。“促进癌症退化”是指单独或与抗新生物药物联合来给药药物的药物学有效量带来肿瘤的生长或尺寸减小、肿瘤坏死、至少一个疾病症状的严重程度降低、无疾病症状期间的频率以及持续时间的增加、疾病引起的障碍或伤害的预防、或患者的疾病症状的其他改善。此外，术语“有效的”和“有效性”既包括与治疗相关的药物有效性也包括生理安全性。药物有效性是指能够促进患者的癌症退化的药物的功效。生理安全性是指毒性水平、或药物的给药引起的细胞、器官和/或有机体水平的其他不良生理效果(副作用)。

32、例如，对于肿瘤治疗，与未治疗受试者相比，药物的治疗有效量或有效剂量对细胞生长或肿瘤生长至少阻碍约20％、至少约40％、至少约60％、或至少约80％为止。在一些具体例中，药物的治疗有效量或有效剂量完全阻碍细胞生长或肿瘤生长，即，阻碍细胞生长或肿瘤生长达到100％。阻碍肿瘤生长的抑制剂的能力可使用以下说明的分析来进行评价。或者，组合物的该特性可通过测试阻碍细胞生长的抑制剂的能力来进行评价，并且这种阻碍可通过本发明所属技术领域的普通技术人员已知的分析来在体外进行测定。在本说明书中公开的其他具体例中，可以观察肿瘤退化，并可以持续至少约20天、至少约40天、或至少约60天。

33、本发明的一些方面涉及受试者的癌症诊断。

34、本说明书中使用的术语“诊断”是指可用于确定或预测患者是否以给定疾病或状态来承受痛苦的方法。本发明所属技术领域的普通技术人员可基于一种以上的诊断标记物(例如，c-kit的表达量)来作出诊断，其中，诊断标记物的存在、不存在，量、或量的变化表示该状态的存在、严重程度或不存在。在一些具体例中，来自受试者的生物样本中的c-kit的表达的增加是对肿瘤的标记(indicative)。术语“诊断”并不是指以100％的准确性确定特定疾病的存在或不存在的能力，甚至也不是指预定的过程或成果比并非如此的情况更有可能发生。相反，本发明所属技术领域的普通技术人员应理解，术语“诊断”是指特定疾病存在于受试者中的所增加概率。

35、术语“诊断标记物”(例如，c-kit表达)是指能够从正常细胞中分离肿瘤以进行诊断的物质，包括有机生物分子，例如多肽，或核酸(例如，mrna)、脂质、糖脂、糖蛋白、以及糖(单糖、二糖、寡糖等)，它们在肿瘤细胞中增加或减少。对于癌症，本说明书中公开的诊断标记物可以是肿瘤细胞中表达增加的从c-kit的基因表达的蛋白质。

36、用于诊断癌症的组合物包括用于测定c-kit基因的mrna的表达水平或表达的蛋白质的量的制剂。这些制剂包括具有与c-kit mrna互补序列的寡核苷酸、与c-kit mrna特异性结合的引物或核酸探针、以及与c-kit蛋白质特异性结合的抗体或其抗原结合片段(以下简称抗-c-kit抗体)或抗-c-kit抗体通过接头与药物连接的抗体-药物偶联物(antibodydrug conjugate)。

37、本说明书中使用的术语“受试者”包括任意人类或非人动物。术语“非人动物”包括脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物，例如非人类灵长类、羊、狗、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。

38、术语“c-kit”属于受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase，rtk)的iii型(class iii)，又称scf的受体。

39、“c-kit”包括通过细胞自然表达的c-kit的任意变体或亚型。因此，本说明书中公开的抗-c-kit抗体或抗体-药物偶联物可以与同种不同亚型(例如，人c-kit的不同亚型)发生交叉反应，或者与除人类以外的物种的c-kit(例如，小鼠c-kit)发生交叉反应。或者，抗-c-kit抗体可能对人c-kit具有特异性，而对其他物种无法表现出交叉反应性。c-kit、或其任意变体和亚型可以从自然表达的细胞或组织分离或重组产生。除25个信号肽外的人c-kit的结构域1至3的序列(q26至d309)可以是序列号12。

40、术语“抗体”是本发明所属技术领域的术语，本说明书中可互换使用，是指具有与抗原特异性结合的抗原结合位点的分子。本说明书中使用的术语包括全抗体和任意抗原结合片段(即“抗原-结合部分”)或其单链。在一个具体例中，“抗体”是指包括通过二硫键相互连接的至少两个重链(h)和两个轻链(l)的糖蛋白或其抗原-结合部分。在其他具体例中，“抗体”是指包括单个可变结构域的短链抗体，例如，包括vhh结构域的短链抗体。每个重链由重链可变区(略记为vh)和重链恒定区组成。在特定天然存在的抗体中，重链恒定区由三个结构域ch1、ch2以及ch3组成。在特定天然存在的抗体中，每个轻链由轻链可变区(略记为vl)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域cl组成。

41、vh和vl区域可进一步细分为被称为框架区(fr)的、分散有进一步保存的区域的、被称为互补决定区(cdr)的超变区。每个vh和vl由三个cdr和四个fr组成，它们按照fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、以及fr4的顺序从氨基酸末端向羧基末端排列。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)以及经典补体系统的第一组分(c1q)。

42、抗体可具有免疫球蛋白分子的任意类型(例如igg、ige、igm、igd、iga或igy)、任意类型(例如igd、igg2、igg3、igg4、iga1或iga2)、或任意亚型(例如人类中的igg1、igg2、igg3以及igg4；以及小鼠中的igg1、igg2a、igg2b以及igg3)。免疫球蛋白，例如igg1以几个同种异型存在，它们最多有几个氨基酸互不相同。本说明书中公开的抗体可来源于常规已知的同种型、类型、亚型、或同种异型中的任一种。在特定具体例中，本说明书中公开的抗体是igg1、igg2、igg3、或igg4亚型或它们的任意杂交。在特定具体例中，抗体是人igg1亚型或人igg2或人igg4亚型的抗体。

43、“抗体”包括：例如，天然存在的抗体和非天然存在的抗体；单克隆抗体和多克隆抗体；嵌合抗体和人源化抗体；人抗体和非人抗体、全合成抗体；短链抗体；单特异性抗体；多特异性抗体(包括双特异性抗体)；包括两个重链和两个轻链分子的四聚体抗体；抗体轻链单体；抗体重链单体；抗体轻链二聚体；抗体重链二聚体；抗体轻链-抗体重链对；胞内抗体；双特异抗体；单价抗体；骆驼化抗体；亲和体；抗独特型(抗-id)抗体(如包括抗-抗-id抗体)、以及包括由能够充分结合抗原的单聚体可变抗体结构域(例如，vh结构域或vl结构域)组成的结合分子的单域抗体(sdab)(harmen m.m.and haard h.j.appl microbiolbiotechnol.77(1):13-22(2007))。

44、本说明书中使用的术语抗体的“抗原-结合部分”，即“抗原结合片段”是指保留特异性结合抗原(如人c-kit的结构域2/3)的能力的一种以上抗体片段。这些“片段”是例如约8个至约1500个氨基酸长度，适宜地为约8个至约745个氨基酸长度，更适宜地为约8个至约300个，例如为约8个至约200个氨基酸，或为约10个至约50或100个氨基酸长度。据发现，抗体的抗原-结合功能可由全长抗体的片段来进行。抗体，例如，本说明书中公开的抗-c-kit抗体的“抗原-结合部分”或“抗原结合片段”的术语中所包含的结合片段的示例包括：(i)fab片段，由vl、vh、cl、以及ch1结构域组成的单价片段；(ii)f(ab’)2片段，是二价片段，该二价片段包括在铰链区由二硫化物桥连接的两个fab片段；(iii)fd片段，由vh和ch1结构域组成；(iv)由抗体单臂的vl和vh结构域组成的fv片段和二硫化物连接的fvs(sdfv)；(v)由vh结构域组成的dab片段(ward et al.,(1989)nature 341:544-546)；以及(vi)分离的互补决定区(cdr)或(vii)两个以上能够由合成接头选择性连接的分离的cdr的组合，但不限于此。此外，作为fv片段的两个结构域的vl和vh由单独的基因编码，但它们可以通过合成接头，使用重组方法连接，从而vl和vh区域成为配对形成单价分子的单蛋白链(称为短链fv(scfv))(例如，参见bird et al.,(1988)science242:423-426；和huston et al.,(1988)proc.natl.acad.sci.usa 85:5879-5883)。这些短链抗体也包含在所谓抗体的“抗原-结合部分”或“抗原结合片段”的术语内。这些抗体片段是使用本发明所属技术领域的普通技术人员已知的现有技术获得的，片段以与无损抗体相同的方式来对有用性进行筛选。抗原-结合部分可以通过重组dna技术产生，或者通过无损免疫球蛋白的酶或化学裂解产生。

45、本说明书中使用的术语“可变区”或“可变结构域”通常在本发明所属技术领域中互换使用。可变区是指典型的部分抗体，通常是轻链或重链的一部分，典型的是成熟的重链中约氨基末端110个至120个氨基酸以及成熟的轻链中约90个至115个氨基酸，它们与抗体序列差异很大，并且由于特定抗体与其的特定抗原的结合和特异性而被使用。序列变异性集中在被称为互补决定区(cdr)的区域中，可变结构域中进一步高度保守的区域被称为框架区(fr)。

46、轻链和重链的cdr被认为主要负责抗原和抗体的相互作用和特异性。在特定具体例中，可变区是人可变区。在特定具体例中，可变区包括啮齿动物或鼠cdr和人框架区(fr)。在特定具体例中，可变区是灵长类(例如，非人类灵长类)可变区。在特定具体例中，可变区包括啮齿动物或鼠cdr和灵长类(例如，非人类灵长类)框架区(fr)。

47、当本说明书中使用的术语“重链”与抗体相关联使用时，基于不变结构域的氨基酸序列，可以指任意不同的类型，例如，阿尔法(α)、德尔塔(δ)、艾普西隆(ε)、伽马(γ)以及谬(μ)，它们分别igg的亚型，包括例如，igg1、igg2、igg3以及igg4，以产生抗体的iga、igd、ige、igg以及igm型。

48、当本说明书中使用的术语“轻链”与抗体相关联使用时，基于不变结构域的氨基酸序列，可以指任意不同的类型，例如，卡帕(κ)和兰姆达(λ)。轻链氨基酸序列在本发明所属技术领域中是众所周知的。在特定具体例中，轻链是人的轻链。

49、术语“vl”和“vl结构域”互换使用，并指抗体的轻链可变区。

50、术语“vh”和“vh结构域”互换使用，并指抗体的重链可变区。

51、本说明书中使用的术语“恒定区”或“不变结构域”可互换使用，并具有本发明所属技术领域的一般含义。不变结构域是抗体部分，例如，轻链和/或重链的羧基末端部分，其虽然不直接与抗体与抗原的结合，但是能够表现出与fc受体之间的相互作用等各种效应功能。与免疫球蛋白可变结构域相比，通常，免疫球蛋白分子的恒定区具有更保守的氨基酸序列。

52、“fc区域”(片段可结晶区)或“fc结构域”或“fc”是指介导宿主组织或因子与免疫球蛋白的结合的抗体的重链的c-末端区域，包括与位于免疫系统的各种细胞(如效应细胞)上的fc受体或正统补体系统的第一成分(c1q)之间的结合。因此，fc区域包括除第一恒定区免疫球蛋白结构域(例如，ch1或cl)之外的抗体的恒定区。在igg、iga以及igd抗体同种型中，fc区域包括来源于抗体的两个重链的第二(ch2)和第三(ch3)不变结构域的两个相同蛋白质片段；igm及ige fc区域在每个多肽链包括三个重链不变结构域(ch结构域2至4)。对于igg，fc区域包括免疫球蛋白结构域cγ2和cγ3以及cγ1和cγ2之间的铰链。免疫球蛋白重链的fc区域的边界不同，但人igg重链fc区域通常仅限于从c226或p230位氨基酸残基(或它们的两个氨基酸之间的氨基酸)延伸到重链的羧基末端，其中，编号遵循eu索引(euindex)，例如kabat。人igg fc区域的ch2结构域从约氨基酸231延伸至氨基酸340，ch3结构域在fc区域中位于cm结构域的c-末端侧，即其从igg的约氨基酸341延伸至约氨基酸447。fc区域可以是包含任意同种异型变体的自生序列fc，或变体fc(例如，非天然存在的fc)。此外，fc是指处理分离状态的区域，或者是指还被称为“fc融合蛋白”(如抗体或免疫粘连(immunoadhesion))的与含fc蛋白多肽相关的区域，例如“包括fc区域的结合蛋白质”等。

53、“铰链”、“铰链结构域”或“铰链区”或“抗体铰链区”是指将ch1结构域与ch2结构域连接，并包括铰链上部、中央、以及下部的部分的重链恒定区的结构域(rouxetal.j.immunol.1998 161:4083)。铰链改变抗体的结合区域与效应区域之间的挠性水平，并且两个重链恒定区之间提供用于分子间二硫键的位点。野生型igg1、igg2、igg3以及igg4铰链的序列在本发明所属技术领域中是已知的(例如，参见kabat ea et al.,(1991)sequences of proteins of immunological interest,fifth edition,u.s.departmentof health and human services,nih publication no.91-3242；vidarsson g.etal.,front immunol.5:520(2014年10月20日网络公开))。

54、本说明书中使用的“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类型(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd、以及ige抗体)。

55、“同种异型”是指在几个氨基酸存在差异的特定同种型组内天然存在的变体(例如，参见jefferis et al.(2009)mabs 1:1)。本说明书中提出的抗体可具有任意同种异型。igg1、igg2、igg3、以及igg4的同种异型在本发明所属技术领域中已知(例如，参见kabat eaet al.,(1991)(同源)；vidarsson g.et al.,front immunol.5:520(2014年10月20日网络公开)；以及lefranc mp,mabs 1:4,1-7(2009))。

56、术语“识别抗原的抗体”和“抗原特异性抗体”在本说明书中与术语“抗原特异性结合的抗体”互换使用。

57、本说明书中使用的“分离抗体”是指基本上没有具有不同的抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与c-kit特异性结合的分离抗体基本上不存在与除c-kit以外的其他抗原特异性结合的抗体)。然而，与c-kit的表位特异性结合的分离抗体可对来自不同物种的其他c-kit蛋白具有交叉反应性。

58、“结合亲和力”通常是指分子(如抗体)的单一结合位点与其结合伴侣(如抗原)之间的非共价相互作用的总和强度。除非另有说明，本说明书中使用的“结合亲和力”是指反映结合对的成员(如抗体和抗原)之间的1：1相互作用的固有的结合亲和力。分子x对伴侣y的亲和力通常可以由解离常数(kd)表示。虽然不是限制，但亲和力能够以本发明所属技术领域已知的多种方式测定和/或显示，包括平衡解离常数(kd)和平衡结合常数(ka)。kd由koff/kon的份额计算，并以摩尔浓度(m)表示，ka由kon/koff的份额计算。kon例如是指抗体对抗原的结合速率常数，koff例如是指抗体对抗原的解离速率常数。kon和koff可通过本发明所属技术领域的普通技术人员已知的技术来确定，例如免疫分析(如酶联免疫吸附试验(elisa))、或动力学排除分析

59、本说明书中使用的术语“特异性结合”、“特异性识别”、“特异结合”、“选择结合”以及“选择性结合”是类似于与抗体相关联的术语，并且是有关与抗原(例如表位或免疫复合物)相结合的分子(例如抗体)的术语，这些结合如同本发明所属技术领域的普通技术人员所理解的。例如，当通过免疫分析、3000仪器(制造商：sapidyneinstruments，美国博伊西(boise，id))、或本发明所属技术领域已知的其他分析来确定与抗原特异性结合的分子时，通常能够以更低的亲和力与其他肽或多肽结合。

60、抗体通过典型地由10-5至10-11m以下的解离常数反映的高亲和力特异性结合在同源抗原中。超过约10-4m的kd通常被视为表现出非特异性结合。与抗原“特异性结合的”抗体是指以高亲和力与抗原及基本相同的抗原结合的抗体，这意味着例如，使用预定的抗原，通过免疫分析(例如，elisa)或在2000仪器中通过表面等离子共振(spr)技术来确定时，具有10-7m以下，优选地，具有10-8m以下，更优选地，具有10-9m以下，进一步优选地，具有10-10m以下或10-11m以下的kd，这与不相关的抗原不会以高亲和力结合。

61、本说明书中使用的术语“抗原”是指任意天然或合成免疫原性物质，例如蛋白质、肽或半抗原。抗原可以是c-kit或其片段。

62、本说明书中使用的“表位”是本发明所属技术领域的术语，是指抗体能够特异性结合的抗原的局部化的区域。表位可以是例如，多肽的连续(contiguous)氨基酸(线性或连续表位)，或者表位可以是例如，多肽或多肽的两个以上的非连续区域合成的(立体形式、非线性、不连续或非连续表位)。虽然不是一如既往，但由连续氨基酸形成的表位典型的是暴露于变性溶剂时保留，而由三次折叠形成的表位典型地在用变性溶剂处理时丧失。表位在典型独特的空间构象中至少包括1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个或20个氨基酸。确定表位由给定抗体偶联的方法(即表位作图)在本发明所属技术领域中已被广泛公知，这包括如免疫印迹和免疫沉淀分析，测试重叠或连续肽(如c-kit结构域2及3)与给定抗体(如抗-c-kit抗体)之间的反应性。确定表位的空间构象的方法包括本发明所属技术领域的技术以及本说明书中公开的，例如，x射线晶体学、二维核磁共振以及hdx-ms(例如参见epitope mapping protocols in methods in molecularbiology,vol.66,g.e.morris,ed.(1996))。

63、关于两种以上的抗体，术语“结合同一表位”是指当通过预定方法确定时，抗体与氨基酸残基的同一片段结合。确定抗体是否与本说明书中提出的抗体在“c-kit上的同一表位”结合的技术包括例如表位作图方法，例如，提供表位的原子分解能力的抗原：抗体复合物晶体的x射线分析以及氢/氘交换质谱(hdx-ms)。其他方法监测抗体和抗原片段或抗原的突变变体的结合，其中，在抗原序列内，氨基酸残基的修饰导致的结合损失主要被视为表位成分的标记。此外，还可使用用于表位作图的计算机组合方法。这些方法依赖于感兴趣的抗体从组合噬菌体展示肽文库中亲和力分离特定短肽的能力。预计具有同一vh及vl或同一cdr1、2及3序列的抗体与同一表位结合。

64、“针对与靶标的结合，与其他抗体相互竞争(cross-compete)的”抗体是指阻碍剩余抗体与靶标的结合(部分或完全)的抗体。两个抗体是否相互竞争与靶标之间的结合，即，一种抗体是否阻碍剩余抗体与靶标的结合、以及阻碍的程度可使用已知的竞争实验来确定。在特定具体例中，抗体在其他抗体与靶标的结合中竞争，阻碍该结合至少至10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。阻碍或竞争的水平可根据抗体是否为“阻断抗体”(即，先与靶标孵育的低温抗体)而异。竞争分析可根据例如，e.d.harlow anddavid lane,cold spring harb protoc；2006；doi:10.1101/pdb.prot4277或根据e.d.harlow and david lane的"using antibodies"(cold spring harbor laboratorypress,cold spring harbor,ny,usa 1999)的第11章中提出的内容进行。竞争抗体与(例如，通过空间位阻)同一表位、重叠表位或相邻表位结合。

65、术语“对照抗体”或“reference antibody”是指作为分析与所述同一表位、重叠表位或相邻表位结合的竞争抗体的参考的抗体，在所述竞争抗体与表位的结合中相互竞争(cross-compete)。

66、其他竞争结合分析包括：固相直接或间接放射免疫分析(ria)、固相直接或间接酶联免疫分析(eia)、夹心竞争分析(参见stahli et al.,methods in enzymology 9:242(1983))；固相直接生物素-亲和素eia(参见kirkland et al.,j.immunol.137:3614(1986))；固相直接标记分析，固相直接标记夹心分析(参见harlow and lane，antibodies:a laboratory manual,cold spring harbor press(1988))；使用1-125标记的固相直接标记ria(参见morel et al.,mol.immunol.25(1):7(1988))；固相直接生物素-亲和素eia(参见cheung et al.,virology 176:546(1990))；以及直接标记ria(参见moldenhauer etal.,scand.j.immunol.32:77(1990))。

67、c-kit由五个细胞外结构域组成，所述五个细胞外结构域由细胞质激酶(kinase)结构域组成，所述细胞质激酶(kinase)结构域包括由igg like repeats、juxtamembrane以及kinase insert分裂的atp-binding(tk1)和phosphotransferase(tk2)结构域。配体结合时，c-kit由通过配体介导二聚化的自磷酸化来激活。最终，招募包括src、pi3k、stat1以及jak2的信号转导介质，以调节增殖、存活以及运动性等各种细胞特异性反应。此外，已知rtk的过表达自发激活以不依赖配体的方式诱导细胞生长。c-kit的过表达和激活已在包括gbm、星形细胞瘤、生殖细胞以及小细胞肺癌(sclc)的各种癌症中被报道，并且与不良预后具有相关关系。

68、2g4抗体是完整的人抗c-kit抗体(anti-c-kit抗体)，通过与c-kit的结构域2/3结合来阻断scf结合，从而表现出c-kit抑制效果。2g4的具体c-kit结合位点对2g4/c-kit复合对接模型进行确认(j.-o.kim et al.,international journal of biologicalmacromolecules 159(2020)66-78)，所述文献作为参考引入本说明书中。

69、为了理解2g4抗体的分子机制，采用haddock/zdock程序，进行了对2g4fab和c-kit(pdb id：2e9w)的晶体结构的分子对接分析。c-kit的残基26-309(d1-d3区域，序列号12)用于对接计算，如下所述。

70、首先，使用zdock进行了盲对接计算。zdock评分最高的10个模型结构通常表示2g4fab的cdr区与c-kit的d2及d3区域(d113-d309；序列号11)相互作用。基于2g4 fab：c-kit复合物的模型结构，从c-kit d2区域(序列号9)选择五个残基(r122、y125、r181、k203以及k205)，从c-kit d3区域(序列号10)选择了五个残基(s240、s241、y243、n260以及w262)。预计所述选择的残基负责2g4。接着，生成10个突变c-kit蛋白质，使用elisa，将2g4的结合亲和力与野生型和突变c-kit蛋白质进行比较(图14a至图14c)。elisa结果显示，c-kit的r122、y125、r181、k203、k205、s261以及h263残基对与2g4之间的结合很重要。

71、使用haddock进行第二次对接计算。通过突变诱发及elisa分析确认的c-kit的主要残基和构成2g4的cdr的所有残基都用作约束条件。通过haddock计算的对接模型显示，与2g4和c-kit(即，2g4的cdr环和c-kit的d2/d3区域)之间的相对方向和结合界面通过zdock计算的模型相似。在具有最高评分的2g4 fab：c-kit复合物的结构模型中，确认了2g4的重链与c-kit的d2-d3区域密切相关联(图14d)。具体而言，2g4 fab与c-kit之间的结合界面主要通过2g4的重链cdr与c-kit的d2区域之间的静电相互作用形成。据显示，包括r122、r181、k203及r205的c-kit的碱性氨基酸与2g4(d74h、e119h、d120h、e123h以及d126h)的带负电荷残基相互作用(图14e)。c-kit的d3区域的s261与h263和2g4的轻链残基(d82l、q118l、t119l)之间的附加相互作用也有助于复合物的形成(图14e)。

72、通过所述对接计算，证明了2g4与c-kit的d2/3区域的r122、y125、r181、k203、r205、s261以及h263结合。

73、因此，本发明提供所述抗体或其抗原结合片段与c-kit特异性结合的抗体-药物偶联物。在抗体-药物偶联物的特定实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段与人c-kit的结构域1-3(序列号12)，更具体地，与人c-kit的结构域2/3(序列号11)、进一步具体地，与人c-kit的结构域2的r122至r205区域(序列号9)和结构域3的s240至h263区域(序列号10)，最具体地，与人c-kit的结构域2/3的r122、y125、r181、k203、r205、s261以及h263的表位特异性结合。

74、本说明书中使用的术语“单克隆抗体”是指对特定表位表现出单一结合特异性和亲和力的抗体或所有抗体对特定表位表现出单一结合特异性和亲和力的抗体的组合物。因此，术语“人单克隆抗体”是指表现出单一结合特异性，并且具有来源于人胚系免疫球蛋白序列的可变和选择性恒定区的抗体或抗体组合物。在一个具体例中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，该杂交瘤包括从转基因非人动物(例如转基因小鼠)中获得的b细胞，该转基因小鼠具有与永生化细胞融合的人重链转基因和轻链转基因的基因组。

75、术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，诸如(a)从对人免疫球蛋白基因进行转基因或作为反式染色体(transchromosomal)的动物(例如，小鼠)分离的抗体或从中制备的杂交瘤，(b)从转化成表达抗体的宿主细胞分离的抗体，例如，从转染瘤(transfectoma)分离的抗体，(c)从重组、组合人抗体文库分离的抗体，以及(d)通过伴随剪接的任意其他手段来对针对其他dna序列的人免疫球蛋白基因序列进行制备、表达、产生或分离的抗体。这些重组人抗体由胚系基因编码，但包括利用特定人胚系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区，例如该特定人胚系免疫球蛋白序列包括抗体成熟期间发生的后续重排和突变。如本发明所属技术领域中所已知(例如，参见lonberg(2005)naturebiotech.23(9):1117-1125)，可变区包含抗原结合结构域，该抗原结合结构域由为了针对外源抗原形成特异性抗体而重排的各种基因编码而成。除了重排以外，可变区可通过多个单氨基酸变化(体细胞突变或超突变)来进一步修饰，以增加抗体对外源抗原的亲和力。恒定区将在对抗原的进一步反应(即同种型转换)中发生变化。因此，响应于抗原编码轻链和重链免疫球蛋白多肽、且重排并体细胞突变的核酸分子可能无法与原始核酸分子具有序列同一性，但基本上相同或相似(即具有至少80％的同一性)。

76、“人”抗体(humab)是指框架区和cdr区均具有来源于人胚系免疫球蛋白序列的可变区的抗体。此外，若该抗体含有恒定区，恒定区也来源于人胚系免疫球蛋白序列。本说明书中提出的抗体可包括不由人胚系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特定突变诱发或者由体内体细胞突变引入的突变)。然而，术语“人抗体”不包括来源于另一种哺乳动物物种(诸如小鼠)的胚系的cdr序列嫁接到人框架序列的抗体。术语“人”抗体和“完整的人”抗体用作同义词。

77、术语“人类化的抗体”是指非人抗体的cdr结构域外的氨基酸的一部分、大部分或全部被来源于人免疫球蛋白的相应氨基酸取代的抗体。在抗体的人类化形式的一个具体例中，cdr结构域外的氨基酸的一部分、大部分或全部被来源于人免疫球蛋白的氨基酸取代，一个以上cdr区内的氨基酸的一部分、大部分或全部保持不变。只要不消除抗体与特定抗原结合的能力，就可接受氨基酸的添加、缺失、插入、取代或修饰。“人类化的”抗体具有与原始抗体相似的抗原特异性。

78、“嵌合抗体”是指可变区来源于一个物种，恒定区来源于另一物种的抗体，例如，可变区来源于小鼠抗体，恒定区来源于人抗体的抗体。

79、本说明书中使用的术语“交叉反应”是指本说明书中提出的抗体与来自不同物种的c-kit结合的能力。例如，与人c-kit结合的本说明书中提出的抗体还可与其他物种c-kit(例如，小鼠c-kit)结合。这些交叉反应性可通过结合分析(例如，spr、elisa)中检测与纯化的抗原的特异性反应性，或者通过检测与生理表达c-kit的细胞的结合或功能性相互作用来测定。确定交叉反应性的方法包括本说明书中公开的标准结合分析，例如，使用2000spr仪器(制造商：biacore ab，瑞典乌普萨拉(uppsala，sweden))的表面等离子共振(spr)分析、或者流式细胞术技术。

80、术语“保守氨基酸取代”是指氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代。在本发明所属技术领域中规定有具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括：具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)；不带电荷的侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)；非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)；β-支化侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)；以及芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。在特定具体例中，抗-c-kit抗体中预期的非必需氨基酸残基被来自同一侧链家族的其他氨基酸残基取代。不破坏抗原结合的核苷酸和氨基酸保守性取代的确认方法在本发明所属技术领域中是众所周知的(例如，参见brummell et al.,biochem.32:1180-1187(1993)；kobayashi et al.protein eng.12(10):879-884(1999)；以及burks etal.proc.natl.acad.sci.usa 94:412-417(1997))。

81、术语“基本同源性”表示两个多肽或它们的指定序列最佳比对和比较时是相同的，此时，其中氨基酸的至少约80％、至少约90％至95％、或氨基酸的至少约98％至99.5％具有适当的氨基酸插入或缺失。

82、两个序列之间的同一性百分比是考虑到为了两个序列的最佳比对而需要引入的间隙的数目和每个间隙的长度的、序列共享的相同位置数目的函数(即，同源性％＝相同位置的#/位置的总#x100)。可使用以下非限制性示例中描述的数学算法来确定序列的比较和两个序列之间的同一性百分比。

83、两个氨基酸序列之间的同一性百分比可使用集成在gcg软件包的gap程序中的needleman and wunsch(j.mol.biol.(48):444-453(1970))算法来确定(在http：//www.gcg.com中可用)，这使用blossum 62矩阵或pam250矩阵、以及间隙权重16、14、12、10、8、6、或4以及长度权重1、2、3、4、5、或6。

84、本说明书中提出的核酸和蛋白质序列可用作用于在公共数据库中进行检索的“查询序列”，例如，用于确认相关序列。这些检索可使用文献(altschul,et al.(1990)j.mol.biol.215:403-10)的nblast和xblast程序(版本2.0)进行。blast核苷酸检索可在nblast程序、得分＝100、字长＝12下进行，从而获得与本说明书中提出的核酸分子同源性的核苷酸序列。blast蛋白质检索可在xblast程序、得分＝50、字长＝3下进行，从而获得与本说明书中提出的蛋白质分子同源性的氨基酸序列。为了获得处于比较目的的间隙比对，gapped blast可按照文献(altschul etal.,(1997)nucleic acids res.25(17):3389-3402)中所描述来使用。当利用blast和gapped blast程序时，可使用每个程序(例如，xblast和nblast)的默认参数(参见worldwideweb.ncbi.nlm.nih.gov)。

85、本说明书中使用的术语“连接的”是指两个以上的分子的会合。连接可以是共价连接或非共价连接。连接还可以是基因(即重组融合)连接。这些连接可使用本发明所属技术领域中公认的各种技术来实现，例如化学偶联和重组蛋白的产生。

86、本说明书中使用的术语“抗体-药物偶联物”是指抗体或其抗原结合片段与另一种激动剂，例如抗癌剂、化疗剂、毒素、免疫治疗剂、成像探针、光谱探针等的连接。这些连接可以是通过共价键或非共价相互作用的相互作用，例如通过静电力的相互作用。相关技术领域中公知的各种接头可用于形成抗体-药物偶联物。此外，抗体-药物偶联物能够以融合蛋白的形式提供，该融合蛋白可从编码抗体-药物偶联物的多核苷酸中表达。在本说明书中，“融合蛋白”原指通过连接两个以上编码单独蛋白质(包括肽和多肽)的基因或基因片段而产生的蛋白质。融合基因的翻译导致具有源自每一个原始蛋白质的功能特性的单一蛋白质。

87、本说明书中的“间隔子”是指具有防止抗体-药物偶联物在血流中的凝聚并赋予血流内的稳定性和靶向药物动力学特性的作用的物质。

88、本说明书中使用的术语“接头”是指能够将抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)或功能性等价物与另一部分，例如药物部分连接的任意化学部分。化合物或抗体仍具有活性的条件下，接头可能对裂解敏感，例如酸诱导裂解、光诱导裂解、肽酶诱导裂解、酯酶诱导裂解、以及二硫键裂解(可裂解接头)。作为另一种方法，接头可能基本上对裂解具有抗性(例如，稳定的接头或不可裂解接头)。在一些具体例中，接头是预带电的接头、亲水性接头、或基于二羧酸的接头。

89、“不可裂解接头”具有相对较高的血浆稳定性，对蛋白质水解具有抗性。引入细胞中后，抗体只有分解，药物才能以与接头复合物形式释放，该复合物具有药物活性。thioether接头是具代表性的非裂解型接头，抗体在细胞内非选择性分解后，药物脱离并释放。恩美曲妥珠单抗采用非裂解型方式。

90、“可裂解接头”是指能够响应于特定环境因素而被裂解，并将药物释放到细胞质中的接头。裂解型包括酶切型和非酶切型。

91、酶切型由细胞组织蛋白酶b(cathepsin b)、β葡糖醛酸糖苷酶(β-glucuronidase)、磷酸酶(phosphatase)、焦磷酸酶(pyrophosphatase)、硫酸酯酶(sulfatase)等酶切割。肽接头由蛋白质分解酶分解，血浆中存在蛋白质分解酶抑制剂，因此血浆稳定性高。作为用于抗体-药物偶联物的蛋白质分解酶，细胞组织蛋白酶b(cathepsin b)为具代表性，细胞组织蛋白酶b(cathepsin b)在肿瘤组织中以高水平存在，以为抗体-药物偶联物赋予肿瘤选择性。肽接头可以是主要连接两个氨基酸的二肽。β-葡萄糖醛酸(β-glucuronide)接头由作为溶酶体中存在的糖解酶的β葡糖醛酸糖苷酶(β-glucuronidase)裂解。β葡糖醛酸糖苷酶(β-glucuronidase)在一些肿瘤细胞中过表达，以赋予肿瘤特异性。

92、非酶切型中具有酸不稳定接头(acid-labile linker)和氧化还原反应接头(oxidation-reduction reaction linker)。

93、酸不稳定接头是早期开发的稳定性较低的接头，但仍在使用。具代表性的是腙(hydrazone)接头，在被内化到肿瘤细胞中后，内体、溶酶体的弱酸性环境中水解以释放药物。

94、氧化还原反应接头具代表性的是二硫化物(disulfide)接头。内化后，通过二硫交换或谷胱甘肽(glutathione)等还原剂，接头降解，并释放细胞毒性药物。谷胱甘肽(glutathione)在缺氧状态的肿瘤细胞中浓度比正常细胞高约1000倍，以赋予adc肿瘤细胞选择性。

95、预带电的接头来源于掺入抗体药物偶联物中后保持自身电荷的带电交联试剂。可在美国公开专利第2009/0274713号中确认预带电的接头的示例。

96、ii.抗体-药物偶联物(adc)

97、根据本发明的一个方面，本发明提供以下式1的抗体药物偶联物：

98、ab-(l)x-(d)y式1

99、在所述式中，ab是序列号9及序列号10中特异性结合人c-kit的表位的抗-c-kit抗体或其抗原结合片段；l是包括可裂解接头(cleavable linker)的接头；d是药物部分；x是1至8的整数；y是1至8的整数。

100、在一些具体例中，所述ab是与序列号12中r122、y125、r181、k203、r205、s261及h263中一个以上特异性结合的抗体或其抗原结合片段。优选地，所述ab是与序列号12中r122、y125、r181、k203、r205、s261以及h263特异性结合的抗体或其抗原结合片段。其中，序列号12是除25个信号肽外的人c-kit的结构域1至3的序列(q26至d309)，所述每个氨基酸的番号是包括25个信号肽的番号。由此，例如，所述r122表示序列号12中第97个氨基酸序列，所述y125表示第100个氨基酸序列，其余氨基酸也能够以相同方式解释。

101、在一些具体例中，所述抗体或其抗原结合片段与包括序列号1的重链cdr1、序列号2的重链cdr2、序列号3的重链cdr3、序列号4的轻链cdr1、序列号5的轻链cdr2以及序列号6的轻链cdr3的对照抗体(reference antibody)在序列号9及序列号10处针对人c-kit的表位的结合进行相互竞争(cross-compete)。

102、在一些具体例中，所述抗体或其抗原结合片段与包括由序列号7所示的重链可变结构域和由序列号8所示的轻链可变结构域的对照抗体(reference antibody)在序列号9及序列号10处针对人c-kit的表位的结合进行相互竞争(cross-compete)。

103、在一些具体例中，所述抗体或其抗原结合片段包括序列号1的重链cdr1、序列号2的重链cdr2、序列号3的重链cdr3、序列号4的轻链cdr1、序列号5的轻链cdr2以及序列号6的轻链cdr3。

104、在一些具体例中，所述抗体或其抗原结合片段包括由序列号7所示的重链可变结构域和由序列号8所示的轻链可变结构域。

105、虽然不限于此，但所述抗体或其抗原结合片段可以是cdr内的一个或两个氨基酸修饰、缺失或取代的片段。

106、在一些具体例中，所述抗体或其抗原结合片段在重链可变或轻链重链区域内可保持90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％以上的同一性。

107、在一些具体例中，所述抗体或其抗原结合片段可以是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程抗体、人抗体、单链抗体(scfv)或抗体片段。

108、在一些具体例中，所述抗体或其抗原结合片段的对人c-kit的平衡解离常数kd值可以为10-11m以下，具体而言，例如，可以为约2.8237(±0.9)×10-12m。

109、所述可裂解接头包括选自由缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基(val-cit-pab)、丙氨酸-苯丙氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基(ala-phe-pab)、丙氨酸-丙氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基(ala-ala-pab)、缬氨酸-丙氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基(val-ala-pab)、苯丙氨酸-赖氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基(phe-lys-pab)、丙氨酸-丙氨酸-甘氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基(ala-ala-gly-pab)以及甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基(gly-gly-gly-pab)接头组成的组中的接头，但不限于此。

110、所述l可包括连接有聚合物或未连接有聚合物的形式的间隔子(spacer)。

111、根据本发明的一个实施例，所述l是包括来源于交联试剂的接头的接头，所述交联试剂包括选自由(例如，)、以及组成的组中的取代基。在一个具体例中，当所述接头使用包括(例如，)的取代基的交联试剂来制备时，例如，所述接头可包括连接两个半胱氨酸残基的二硫化桥，例如硫桥(abzena公司)技术。

112、在所述式中，波浪线表示其他接头或s或d结合的位点。

113、所述r可以是氢、卤素、取代或未取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、氰基、硝基、硝基、甲苯、或卤苯。

114、在一些具体例中，所述l是包括连接有聚合物或未连接有聚合物的形式的间隔子(spacer)的接头。

115、在一些具体例中，所述l包括以下式2的结构：

116、(l1)m-(s)n-(l2)p式2

117、在所述式中，l1是连接所述ab和s或连接ab和l2的接头；s是连接有聚合物或未连接有聚合物的形式的间隔子(spacer)；l2是可裂解接头(cleavable linker)；m是0至8的整数；n是0至8的整数；p是1至8的整数。

118、在一些具体例中，所述m是1至4，所述n是1至4，所述p是1至4。

119、在一些具体例中，所述l1包括选自由可裂解接头、不可裂解接头、亲水性接头、预带电的(procharged)接头以及基于二羧酸的接头组成的组中的接头。

120、在一些具体例中，l或l1包括

121、

122、在所述式中，波浪线表示ab、或s、l2或d结合的位点。

123、在一些具体例中，所述l1是包括来源于交联试剂的接头的接头，所述交联试剂包括选自由(例如，)、以及组成的组中的取代基。

124、在所述式中，波浪线表示s结合的位点。

125、所述r可以是氢、卤素、取代或未取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、氰基、硝基、硝基、甲苯、或卤苯。

126、根据本发明的一个实施例，所述s(间隔子)可选自以及组成的组中。

127、在所述式中，波浪线表示l1或l2结合的位点，优选地，左波浪线侧结合l1，右波浪线侧结合l2。

128、在一些具体例中，所述s可以是包括连接有聚合结合物或未连接有聚合物的形式的天冬氨酸(aspartate)、谷氨酸(glutamate)或它们的组合的间隔子。

129、作为所述聚合物的示例，可利用聚亚烷基(polyalkylene)、聚亚烷基二醇(polyalkylene glycol)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、聚丙烯酸酯(polyacrylate)、聚噁唑啉(polyoxazoline)、聚乙烯醇(polyvinylalcohol)、聚丙烯酰胺(polyacrylamide)或聚甲基丙烯酰胺(polymethacrylamide)、甲基丙烯酸羟丙酯(hpma)共聚物、聚酯、聚甲醛、聚原酸酯、聚碳酸酯、聚(亚氨基碳酸酯)、聚酰胺、二乙烯基醚-马来酸酐或苯乙烯-马来酸酐的共聚物、多糖、或聚谷氨酸等，但不限于此。

130、在一些具体例中，所述聚合物是聚乙烯或聚乙二醇。

131、所述聚乙二醇可包括10至30个乙二醇单元(ethylene glycol unit)(-o-ch2-ch2-)，例如可包括24个。

132、根据本发明的一个实施例，所述l包括选自由以下式3至5组成的组中的接头：

133、

134、

135、在所述式中，波浪线表示ab或d结合的位点，优选地，左波浪线侧结合ab，右波浪线侧结合d。

136、作为药物部分，优选地，所述d为选自由v-atpase抑制剂、凋亡促进剂、bcl2抑制剂、mcl1抑制剂、hsp90抑制剂、iap抑制剂、mtor抑制剂、微管抑制剂、奥瑞他汀、多拉斯他丁、美登木素生物碱、metap(蛋氨酸氨肽酶)、蛋白质crm1的核输出的抑制剂、dppiv抑制剂、蛋白酶体抑制剂、线粒体中的磷酸转移反应的抑制剂、蛋白质合成抑制剂、激酶抑制剂、cdk2抑制剂、cdk9抑制剂、驱动蛋白抑制剂、hdac抑制剂、dna损伤剂、dna烷基化剂、dna嵌入剂、dna小沟结合剂以及dhfr抑制剂组成的组中的部分。

137、修饰预定生物反应的药物部分可结合本公开内容的抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)或功能性等价物。药物部分不应被解释为仅限于经典的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所需生物活性的蛋白质、肽或多肽。如上所述的蛋白质可包括例如，毒素，如相思子毒素、蓖麻毒素a、绿脓杆菌(pseudomonas)外毒素、霍乱毒素、或白喉毒素、蛋白质，如肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子、组织型纤溶酶原激动剂、细胞因子、凋亡素激动剂、抗血管形成激动剂、或生物反应修饰剂，例如淋巴因子。

138、在一些具体例中，诸如细胞毒素、药物(例如，免疫抑制剂)或放射毒素等药物部分结合本发明公开的内容中的抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)或功能性等价物。细胞毒素的示例包括但不限于紫杉类(例如，参见国际(pct)专利申请号wo 01/38318和pct/us03/02675)、dna-烷基化剂(例如，cc-1065类似物)、蒽环类、微管蛋白抑制剂(tubulysin)类似物、倍癌霉素类似物、奥瑞他汀e、奥瑞他汀f、美登木素生物碱、以及含反应性聚乙二醇部分的细胞毒性剂(例如，参见文献[sasse et al.,j.antibiot.(tokyo),53,879-85(2000)]，[suzawa et al.,bioorg.med.chem.,8,2175-84(2000)]，[ichimura et al.,j.antibiot.(tokyo),44,1045-53(1991)]，[francisco et al.,blood 2003 15；102(4):1458-65]，美国专利号5,475,092、6,340,701、6,372,738、以及6,436,931，美国专利申请公开号2001/0036923a1，争议中的美国专利申请序列号10/024,290和10/116,053、以及国际(pct)专利申请号wo 01/49698)、紫杉醇(taxol)、细胞松弛素b、短杆菌肽d、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌、普卡霉素、放线菌素d、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素以及它们的类似物或同源体。治疗剂还包括例如，抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪)、烷基化剂(例如，甲氮芥、塞替哌苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(bsnu)以及洛莫司汀(ccnu)、环硫磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链佐霉素、丝裂霉素c、以及顺二氯二胺铂(ii)(ddp)顺铂、蒽环类(例如，柔红霉素(以往的道诺霉素和阿霉素)、抗生素(例如，放线菌素d(以往的放线菌素)、博莱霉素、普卡霉素以及安曲霉素(amc))以及抗有丝分裂激动剂(例如，长春新碱和长春花碱)(例如，参见西雅图遗传学公司(seattlegenetics)us20090304721)。

139、能够与本发明公开的内容的抗体、抗体片段(抗原结合片段)或功能性等价物结合的细胞毒素的其他示例包括倍癌霉素、卡奇霉素、美坦辛、奥瑞他汀及其衍生物。

140、在相关领域中已公知各种类型的细胞毒素、接头以及治疗剂与抗体偶联的方法，例如，参见文献[saito et al.,(2003)adv.drug deliv.rev.55:199-215]；[trail etal.,(2003)cancer immunol.immunother.52:328-337]；[payne,(2003)cancer cell 3:207-212]；[allen,(2002)nat.rev.cancer 2:750-763]；[pastan and kreitman,(2002)curr.opin.investig.drugs 3:1089-1091]；[senter and springer,(2001)adv.drugdeliv.rev.53:247-264]。

141、本发明公开的内容中的抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)或功能性等价物还可与放射同位素结合，以便生成被称为放射免疫偶联物的细胞毒性放射药品。能够与抗体偶联的用于诊断或治疗上的放射同位素的示例包括但不限于碘-131、铟-111、钇-90以及钌-177。在相关技术领域中已经建立制备放射免疫偶联物的方法。市售了包括替伊莫单抗(zevalin)tm(idec制药公司(idec pharmaceuticals))和百克沙(bexxar)tm(corixa制药公司(corixa pharmaceuticals))的放射免疫偶联物的示例，类似的方法可用于使用本发明中公开的抗体制备放射免疫偶联物。在特定方面，大环(macrocyclic)螯合剂是1,4,7,10-四氮杂环十二烷-n,n',n”,n”'-四乙酸(dota)，其可通过接头分子粘附在抗体上。如上所述的接头分子通常已知于相关技术领域中，并描述在文献[denardo et al.,(1998)clincancer res.4(10):2483-90]；[peterson et al.,(1999)bioconjug.chem.10(4):553-7]；以及[zimmerman et al.,(1999)nucl.med.biol.26(8):943-50](分别作为参考并入全文中)中。

142、在一些具体例中，所述d是微管抑制剂(microtubule inhibitor，mti)部分。

143、虽然不限于此，但优选地所述微管抑制剂可包括选自由sn-38((4s)-4,11-二乙基-4,9-二羟基-1,4-二氢-3h,14h-吡喃并[3′,4′:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14-二酮((4s)-4,11-diethyl-4,9-dihydroxy-1,4-dihydro-3h,14h-pyrano[3′,4′:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14-dione))、奥瑞他汀、多拉斯他丁、一甲基奥瑞他汀e(mmae)、一甲基奥瑞他汀f(mmaf)、一甲基多拉斯他丁10(mmad)或它们的组合组成的组中的药物。

144、sn-38通过抑制dna拓扑异构酶i(dna topoisomerase i)来阻止细胞分裂。与以往使用的药物相比，其效力较低，副作用较少，可用于提高dar以提高抗体-药物偶联物的副作用对比效力。

145、优选地，所述抗体或其抗原结合片段与由序列号11(即，d113至d309)表示的人c-kit的结构域2/3的表位特异性结合，更优选地，由序列号9(即，r122至r205)表示的人c-kit的结构域2和/或由序列号10(即，s240至h263)表示的人c-kit的结构域3的表位特异性结合，进一步优选地，在序列号9中选自由r122、y125、r181、k203、以及r205组成的组中的一种以上的氨基酸残基和/或在序列号10中选自由s261和h263组成的组中的一种以上的氨基酸残基特异性结合。

146、在一些具体例中，所述抗体或其抗原结合片段与包括由序列号7所示的重链可变结构域和由序列号8所示的轻链可变结构域的对照抗体(reference antibody)针对序列号11(即，d113至d309)的人c-kit的结构域2/3的表位的结合来进行相互竞争(cross-compete)。

147、根据本发明的一个实施例，所述抗体药物偶联物选自由以下式6至8组成的组中：

148、

149、以及

150、

151、在上述式中，a是1至8的整数，b和c分别是1至4的整数。

152、根据发明的其他方面，本发明提供选自由以下式6至8组成的组中的抗体-药物偶联物：

153、

154、

155、在所述式中，ab是包括序列号1的重链cdr1、序列号2的重链cdr2、序列号3的重链cdr3、序列号4的轻链cdr1、序列号5的轻链cdr2以及序列号6的轻链cdr3的抗体或其抗原结合片段；a是1至8的整数，b和c分别是1至4的整数。

156、在一些具体例中，所述抗体-药物偶联物具有式7的结构，b是2。

157、在一些具体例中，所述抗体-药物偶联物具有式7的结构，b是4。

158、iii.组合物

159、根据本发明的还一方面，本发明提供包含抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐的组合物。

160、在一些具体例中，所述组合物是癌症预防或治疗用药物学组合物。

161、根据本发明的又一方面，本发明提供组合物的治疗用途(for use in therapy)。

162、在一些具体例中，所述用途是癌症的治疗用途。

163、根据本发明的又一方面，本发明提供用于制备所述药物学组合物的用途。

164、根据本发明的又一方面，本发明提供癌症的预防或治疗方法，所述方法包括将所述组合物施用于需要该组合物的受试体的步骤。

165、在本说明书中公开受试者的肿瘤(或癌症)的治疗方法，该方法包括向受试者给药所述抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐。在特定具体例中，抗体-药物偶联物与c-kit蛋白质特异性结合，使c-kit活性减少。

166、在一些具体例中，本说明书中公开的方法阻碍和/或减少受试者的肿瘤生长。在特定具体例中，肿瘤生长(例如，肿瘤体积或重量)与标准(例如，本说明书中公开的组合物，例如，未接受所述抗体-药物偶联物的受试者的相应肿瘤体积或重量)相比，减少到至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或100％。在一些具体例中，本说明书中公开的方法与标准(例如，本说明书中公开的组合物，例如，未接受所述抗体-药物偶联物的受试者中的相应频率)相比，使平均肿瘤生长阻碍(tgi)增加到至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或100％。在一些具体例中、本说明书中公开的组合物(例如，所述抗体-药物偶联物)的给药与标准(例如，本说明书中公开的组合物，例如，未接受所述抗体-药物偶联物的受试者中的相应值)相比，使平均存活增加至少1天、2天、3天、4天、5天、6天或更长。

167、在一些具体例中，能够通过本说明书中公开的方法治疗的肿瘤来源于典型地对现有抗癌剂具有反应性的癌症、以及典型地对现有抗癌剂不具有反应性的癌症。在一些具体例中，癌症是固态肿瘤或具有血液恶性物(液态肿瘤)的癌症。

168、需要治疗的癌症的非限制性示例包括：鳞状细胞癌、小细胞肺癌(sclc)、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(nsclc)、非鳞状nsclc、胃肠道癌、肾癌(例如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜瘤、肾癌(例如肾细胞癌(rcc))、前列腺癌(例如激素难治性前列腺癌)、甲状腺癌、胰腺癌、宫颈癌、胃癌、膀胱癌、肝细胞癌、乳腺癌、结肠癌、以及头颈癌(或癌)、生殖细胞肿瘤、小儿肉瘤、鼻腔自然杀伤、黑色素瘤(例如转移性恶性黑色素瘤、例如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛门部位的癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈部的癌、阴道癌、外阴部的癌、食道癌、小肠癌、大肠癌、肥大细胞瘤、内分泌系统癌、甲状旁腺癌的癌、肾上腺的癌、软组织的肉瘤、尿道的癌、性器官的癌、小儿固态肿瘤、输尿管的癌、肾盂的癌、肿瘤血管形成、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、上皮癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、包括石棉引起的癌症的环境诱发癌症、病毒性癌症或病毒性来源的癌症(例如人乳头瘤病毒(hpv相关或起源肿瘤))、以及两种主要血细胞系，即骨髓细胞系(它产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞以及肥大细胞)或淋巴细胞系(它产生b、t、nk以及血浆细胞)中的任何一个的血液学恶性物，例如所有种类的白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、例如急性、慢性、淋巴细胞和/或骨髓性白血病、例如急性白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)以及慢性骨髓性白血病(cml)、非分化型aml(mo)、骨髓母细胞白血病(m1)、骨髓母细胞白血病(m2；伴随细胞成熟)、全髓性白血病(m3或m3变异型[m3v])、慢性粒单核细胞白血病(m4或伴有嗜酸性粒细胞增多症的m4变异型[m4e])、单核细胞白血病(m5)、红细胞白血病(m6)、巨核细胞白血病(m7)、分离的颗粒状肉瘤、以及绿瘤；淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤(hl)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、b细胞血液学恶性物，例如b细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤、淋巴母细胞瘤淋巴瘤、单细胞b细胞淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织(malt)淋巴瘤、间变性(例如，ki 1+)巨细胞淋巴瘤、成人t细胞淋巴瘤/白血病、地幔细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞t细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠道t细胞淋巴瘤、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、前体t淋巴细胞性淋巴瘤、t淋巴细胞性；以及淋巴瘤/白血病(t-lbly/t-all)、外周t细胞淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、移植后淋巴增殖障碍、真性组织性淋巴瘤、原发性流出性淋巴瘤、b细胞淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤(lbl)、淋巴系统造血性肿瘤、急性淋巴细胞性白血病、弥漫性大b细胞b细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、弥漫性组织性淋巴瘤(dhl)、免疫母细胞巨细胞淋巴瘤、前体b-淋巴细胞性淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤(ctlc)(又称蕈样肉芽肿或塞扎里综合征)、以及伴随华氏巨球蛋白血症的淋巴母细胞瘤淋巴瘤(lpl)；骨髓瘤，例如igg骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、无进展的骨髓瘤(smoldering myeloma)(又称冒烟性骨髓瘤)、孤立性浆细胞瘤(solitary plasmocytoma)、以及多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病(cll)、形状细胞淋巴瘤；间叶源性肿瘤、包括骨髓造血系统肿瘤、纤维肉瘤以及横纹肌瘤；包括纤维肉瘤、横纹肌瘤以及骨肉瘤的间叶源性精原细胞瘤、畸形癌、肿瘤；以及包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡性肿瘤以及畸胎瘤的其他肿瘤、淋巴造血系统肿瘤，例如，t细胞及t细胞肿瘤，虽然不是限定但包括诸如t-前淋巴细胞白血病(t-pll)等t细胞障碍，包括小细胞及类脑细胞类型；t细胞类型的大颗粒淋巴细胞白血病(lgl)；a/d t-nhl肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后(post-thymic)t细胞淋巴瘤(多态性及免疫母细胞亚型)；血管中心性(鼻)t细胞淋巴瘤；头癌或颈癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性骨髓性淋巴瘤以及它们的任意组合。

169、根据本发明的一个实施例，所述癌症是选自由食管癌、胃癌、胃肠道间质瘤(gist)、大肠癌、直肠癌、肺癌、特别是小细胞肺癌(sclc)、乳腺癌、肥大细胞瘤以及白血病，特别是急性骨髓性白血病(aml)组成的组中的一种以上的癌症。

170、在一些具体例中，本说明书中公开的方法也可用于转移性癌症、不可切除性、难治性癌症(例如，以往的癌症疗法，例如，免疫疗法，例如，对阻断pd-(l)1抗体的疗法具有抗性的癌症)、和/或复发性癌症的治疗。在特定具体例中，本说明书中公开的方法可用于复发性癌症的治疗。

171、在一些具体例中，本说明书中公开的方法的以往的癌症疗法包括化学疗法。例如，可以与伊马替尼及其他c-kit途径抑制剂联合给药。

172、在一些具体例中，本说明书中公开的方法有效增加受试者(例如，肿瘤被侵犯的)的存活持续时间。例如，当受试者的存活持续时间与参考个体(例如，本说明书中公开的组合物，例如，用所述抗体-药物偶联物未治疗的其他受试者)相比时，增加到至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、或至少约1年或其以上。在另一个具体例中，本说明书中公开的方法将受试者的存活持续时间延长至比参考受试者(例如，本说明书中公开的组合物，例如，用所述抗体-药物偶联物未治疗的其他受试者)的存活持续时间更长的水平(约更长1个月、约更长2个月、约更长3个月、约更长4个月、约更长5个月、约更长6个月、约更长7个月、约更长8个月、约更长9个月、约更长10个月、约更长11个月、或约更长1年)。

173、在一些具体例中，本发明的方法使受试者无疾病进展的存活持续时间增加。例如，受试者无疾病进展的存活持续时间与参考受试者(例如，本说明书中公开的组合物，例如，用所述抗体-药物偶联物未治疗的其他受试者)相比，增加到至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、或至少约1年。

174、在一些具体例中，本说明书中公开的方法有效提高一组受试者中的反应速率。例如，一组受试者中的反应速率与参考受试者(例如，本说明书中公开的组合物，例如，用所述抗体-药物偶联物未治疗的其他受试者)相比，增加到至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或至少约100％。

175、在一些具体例中，本方法中治疗的受试者是非人动物，例如大鼠或小鼠。在一些具体例中，本方法中治疗的受试者是人类。

176、本发明还包括与其他癌症制剂组合以治疗受试者的癌症的方法。在一些具体例中，在本发明的方法中，有用的所述抗体-药物偶联物可以作为组合疗法，即可以与至少一个其他抗癌剂和/或免疫调节剂，例如t细胞刺激(例如激活)制剂组合给药。在一些具体例中，在本发明的方法中，有用的抗体-药物偶联物可与用于癌症治疗的其他化合物、药物和/或制剂组合给药。这些化合物、药物和/或制剂可包括例如，化学疗法药物、小分子药物、或刺激癌症的免疫反应的抗体。在一些具体例中，本说明书中公开的方法与标准治疗(例如手术、放射以及化学疗法)组合使用。在其他具体例中，本说明书中公开的方法被用作维持疗法、例如，防止肿瘤发生或复发的疗法。

177、在一些具体例中，本说明书中公开的抗体-药物偶联物可以与包括免疫治疗剂、化学治疗剂、靶向治疗剂、放射治疗剂(放射疗法)、或它们的任意组合的一种以上附加的癌症制剂组合使用。

178、在本说明书中公开了生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(remington'spharmaceutical sciences(1990)mack publishing co.,easton,pa)中具有所需程度的纯度的包含本说明书中公开的抗体-药物偶联物的组合物。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量及浓度下对受体无毒，并包括：缓冲液，例如磷酸盐、柠檬酸盐以及其他有机酸；含有抗坏血酸和甲硫氨酸的抗氧化剂；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六羟季铵；苯扎氯铵；苯酚，丁醇或苯甲醇；烷基对羟基苯甲酸酯，例如尼泊金甲酯或尼泊金丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(约小于10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶、或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸、或赖氨酸；包括单糖、二糖、以及葡萄糖、甘露糖，或糊精的其他碳水化物；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(edta)；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；盐形成反离子，例如钠；金属复合物(例如，zn-蛋白质复合物)；和/或非离子界面活化剂，例如或聚乙二醇(peg)。

179、在一些具体例中，药物学组合物在药物学上可接受的载体中包括本说明书中公开的抗体-药物偶联物。在特定具体例中，药物学组合物在药物学上可接受的载体中包括本说明书中公开的抗体-药物偶联物的有效量以及选择性添加的一个以上预防或治疗药剂。在一些具体例中，抗体-药物偶联物是包含在药物学组合物中的唯一的活性成分。本说明书中公开的药物学组合物可能对降低c-kit活性方面有用，从而治疗癌症。

180、肠外制剂中使用的药物学上可接受的载体包括水性载体、非水性载体、抗菌剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮分散剂、乳化剂、金氧离子的封闭或螯合剂以及其他药物雪上可接受的物质。水性载体的示例包括氯化钠注射液、点滴注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖及乳酸点滴注射液。非水性载体包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油以及花生油。抑菌或抑真菌剂浓度的抗菌剂可添加到封装在高剂量容器的肠外制剂中，它们包括苯酚或甲酚、含汞物质、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯及丙基对羟基苯甲酸酯、硫柳汞、苯扎氯铵以及苄索氯铵。等渗剂包括氯化钠和葡萄糖。缓冲液包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因。悬浮分散剂包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素以及聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包括聚山梨酯80(80)。金属离子的封闭或螯合剂包括edta。药物学载体还包括水混合载体的乙醇、聚乙二醇以及丙二醇、用于调节ph的氢氧化钠，盐酸，柠檬酸或乳酸。

181、药物学组合物可根据针对受试者的任意给药途径来进行配制。给药途径的具体示例包括鼻内、口服、肠外、脊椎腔内、脑室内、肺、皮下、或心室内途径。还考虑以皮下、肌肉内或静脉内注射为特征的肠外给药。可注射物质能够以常规形式制备成液体溶液或悬浮液，并且可制备成适合在注射前液体中成为溶液或悬浮液的固体形态或乳液。可注射物质、溶液及乳液还包含一种以上赋形剂。适合的赋形剂是例如，水、盐水、葡萄糖、甘油或乙醇。此外，若需要，要施用的药物学组合物还可包含少量的非毒性辅助物质，例如润湿或乳化剂、ph缓冲剂、稳定剂、可溶性增强剂以及其他制剂，例如乙酸钠、山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯以及环糊精。

182、抗体-药物偶联物的肠外给药用制剂包括可直接注射的无菌溶液、包含皮下注射用片剂的能够在使用之前与溶剂直接组合的无菌干燥可溶性产品，例如冻干粉末，可直接注射的无菌悬浮液，可在使用之前与载体直接组合的无菌干燥不溶性产品以及无菌乳液。溶液可以是水性或非水性。

183、本说明书中公开的抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐还可制备成靶向待治疗的受试者的特定组织、受体、或其他身体区域。各种靶向方法对于本发明所属技术领域的普通技术人员是已知的。考虑将这些靶向方法用于该组合物中。靶向方法的非限制性示例参见美国专利第6,316,652号、第6,274,552号、第6,271,359号、第6,253,872号、第6,139,865号、第6,131,570号、第6,120,751号、第6,071,495号、第6,060,082号、第6,048,736号、第6,039,975号、第6,004,534号、第5,985,307号、第5,972,366号、第5,900,252号、第5,840,674号、第5,759,542号以及第5,709,874号。在特定具体例中，本说明书中公开的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐可用于治疗癌症。

184、用于体内给药的组合物可以灭菌。例如，可通过无菌过滤膜的过滤来进行灭菌。

185、根据本发明的又一方面，提供包含抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐的癌症诊断用组合物。

186、ix.试剂盒

187、在本说明书中公开了包含本说明书中公开的一种以上抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐的试剂盒。在一些具体例中，本说明书中公开了由包括本说明书中公开的一种以上抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐的本说明书中公开的组合物的成分中一种以上填充的一种以上容器、包括选择性使用说明书的药物包或试剂盒。在一些具体例中，试剂盒包含本说明书中公开的药物学组合物和本说明书中公开的任意预防或治疗药剂。在一些具体例中公开了试剂盒包括本说明书中公开的组合物以及对检测和/或诊断方法的说明书的癌症诊断用组合物。

188、在一些具体例中，提供用于癌症诊断的信息提供方法，该方法包括将抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐处理到从受试体分离的样品的步骤。

189、x.生产方法

190、本说明书中公开了本说明书中公开的一种以上抗-c-kit抗体药物偶联物的生产方法。

191、可通过相关技术领域中已知的任意方法，例如通过美国授权专利第7,811,572号、第6,411,163号、第7,368,565号、以及第8,163,888号、以及美国公开专利第2011/0003969号、第2011/0166319号、第2012/0253021号以及第2012/0259100号中描述的方法来制备本发明公开的内容的偶联物。这些专利和专利申请公报的所有指点内容作为参考并入本技术中。

192、并且，相关领域已公知各种类型的细胞毒素、接头以及药物与抗体偶联的方法，例如，参见文献(saito et al.,adv.drug deliv.rev.55:199-215(2003)；trail et al.,cancer immunol.immunother.52:328-337(2003)；payne,cancer cell 3:207-212(2003)；allen,nat.rev.cancer 2:750-763(2002)；pastan and kreitman,curr.opin.investig.drugs3:1089-1091(2002)；senter and springer,adv.drugdeliv.rev.53:247-264(2001)]。

193、在一些具体例中，所述生产方法包括在特异性结合到人c-kit的抗体或其抗原结合片段(ab)中连接(l1)m-(s)n-(l2)p-(d)q的步骤：

194、在所述式中，l1是连接所述ab和s或连接ab和l2的接头；s是连接有聚合物或未连接有聚合物的形式的间隔子(spacer)；l2是可裂解接头(cleavable linker)；d是药物部分；m是0至8的整数；n是0至8的整数；p是1至8的整数；q是1至8的整数。

195、所述术语的定义和相关说明与i.定义和ii.抗体-药物偶联物(adc)中描述的内容相同。

196、在一些具体例中，所述生产方法是抗-c-kit抗体-药物偶联物的生产方法，所述方法包括将包括序列号1的重链cdr1、序列号2的重链cdr2、序列号3的重链cdr3、序列号4的轻链cdr1、序列号5的轻链cdr2以及序列号6的轻链cdr3的抗体或其抗原结合片段偶联接头(l)-药物(d)的步骤，所述l包括可裂解接头。

197、在一些具体例中，所述d是微管抑制剂部分。

198、在一些具体例中，所述m是1至4，所述n是1至4，所述p是1至4，q是1至8。

199、发明的效果

200、总结本发明的特征和优点如下：

201、(i)本发明提供包含特异性结合到人c-kit的抗体、可裂解接头以及微管抑制剂部分的抗体-药物偶联物。

202、(ii)此外，本发明提供包含抗体-药物偶联物来作为有效成分的癌症预防或治疗用药物学组合物。

203、(iii)本发明的抗体-药物偶联物的特征在于，对c-kit-阳性和阴性癌细胞系和/或耐伊马替尼癌细胞系保留强大的抗癌活性以诱导完全缓解。

技术特征：

1.一种抗体-药物偶联物，其特征在于，由以下式1表示：

2.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述ab是序列号12中与r122、y125、r181、k203、r205、s261及h263中一个以上特异性结合的抗体或其抗原结合片段。

3.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段与包括序列号1的重链cdr1、序列号2的重链cdr2、序列号3的重链cdr3、序列号4的轻链cdr1、序列号5的轻链cdr2以及序列号6的轻链cdr3的对照抗体在序列号9及序列号10处针对人c-kit的表位的结合进行相互竞争。

4.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括序列号1的重链cdr1、序列号2的重链cdr2、序列号3的重链cdr3、序列号4的轻链cdr1、序列号5的轻链cdr2以及序列号6的轻链cdr3。

5.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括由序列号7所示的重链可变结构域和由序列号8所示的轻链可变结构域。

6.根据权利要求3或5所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段是cdr内的一个或两个氨基酸修饰、缺失或取代的片段。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段在重链可变或轻链重链结构域内保持90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％以上的同一性。

8.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述l是包括连接有聚合物或未连接有聚合物的形式的间隔子的接头。

9.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述接头l具有以下式2的结构：

10.根据权利要求9所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述m是1至4，所述n是1至4，所述p是1至4。

11.根据权利要求9所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述l1包括选自由可裂解接头、不可裂解接头、亲水性接头、预带电的接头以及基于二羧酸的接头组成的组中的接头。

12.根据权利要求1或9所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述l或l1包括

13.根据权利要求9所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述s包括选自由

14.根据权利要求9所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述s是包括连接有聚合物或未连接有聚合物的形式的天冬氨酸、谷氨酸或它们的组合的间隔子。

15.根据权利要求9所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述聚合物是聚亚烷基、聚亚烷基二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、聚噁唑啉、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺或聚甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸羟丙酯共聚物、聚酯、聚甲醛、聚原酸酯、聚碳酸酯、聚(亚氨基碳酸酯)、聚酰胺、二乙烯基醚-马来酸酐或苯乙烯-马来酸酐的共聚物、多糖、或聚谷氨酸。

16.根据权利要求9所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述l2包括选自由缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基val-cit-pab、丙氨酸-苯丙氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基ala-phe-pab、丙氨酸-丙氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基ala-ala-pab、缬氨酸-丙氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基val-ala-pab、苯丙氨酸-赖氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基phe-lys-pab、丙氨酸-丙氨酸-甘氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基ala-ala-gly-pab以及甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-对氨基苄基氨基甲酰基gly-gly-gly-pab接头组成的组中的接头。

17.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述接头l包括选自由以下式3至5组成的组中的接头：

18.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述药物部分d选自由v-atpase抑制剂、凋亡促进剂、bcl2抑制剂、mcl1抑制剂、hsp90抑制剂、iap抑制剂、mtor抑制剂、微管抑制剂、奥瑞他汀、多拉斯他丁、美登木素生物碱、metap蛋氨酸氨肽酶、蛋白质crm1的核输出的抑制剂、dppiv抑制剂、蛋白酶体抑制剂、线粒体中的磷酸转移反应的抑制剂、蛋白质合成抑制剂、激酶抑制剂、cdk2抑制剂、cdk9抑制剂、驱动蛋白抑制剂、hdac抑制剂、dna损伤剂、dna烷基化剂、dna嵌入剂、dna小沟结合剂以及dhfr抑制剂组成的组中。

19.根据权利要求18所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述药物部分d是微管抑制剂部分。

20.根据权利要求19所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述药物部分d包括选自由sn-38((4s)-4,11-二乙基-4,9-二羟基-1,4-二氢-3h,14h-吡喃并[3′,4′:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14-二酮)、奥瑞他汀、多拉斯他丁、一甲基奥瑞他汀e即mmae、一甲基奥瑞他汀f即mmaf、一甲基多拉斯他丁10即mmad或它们的组合组成的组中的药物。

21.根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体-药物偶联物选自由以下式6至8组成的组中：

22.一种抗体-药物偶联物，其特征在于，选自由以下式6至8组成的组中：

23.一种癌症预防或治疗用药物学组合物，其特征在于，包括权利要求1或22所述的抗体-药物偶联物。

24.一种癌症的预防或治疗方法，其特征在于，包括将药物学有效量的包含权利要求1或22所述的抗体-药物偶联物的组合物施用于需要该组合物的受试体的步骤。

25.一种权利要求1所述的抗体-药物偶联物的治疗用途。

技术总结
本发明涉及靶向c‑Kit的抗体‑药物偶联物及其用途。

技术研发人员：朴商奎,金真玉
受保护的技术使用者：新奇贵族公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5