PEG4-H10二聚体及其合成方法与流程

本发明涉及有机合成，具体涉及一种peg4-h10二聚体及其合成方法。

背景技术：

1、her2属于egfr 家族，是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体蛋白。her2可以参与细胞的增殖、分化和凋亡等过程，是乳腺癌、胃癌等癌症的重要生物标志物，her2 靶向治疗可改善her2过表达的癌症患者的生存期。klrlewnr(h10)为筛选出的与人卵巢癌细胞her2特异性结合的小分子多肽之一，其组成结构为：赖氨酸-亮氨酸-精氨酸-亮氨酸-谷氨酸-色氨酸-天冬酰胺-精氨酸，结构式如下：

2、

3、由于h10短链肽代谢快，在血浆中的半衰期短，与受体的亲和力较低，其定位效果和生物活性不是很理想。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种peg4-h10二聚体及其合成方法。

2、为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：

3、一种peg4-h10二聚体，其结构式为螯合剂-peg4-glu(rk)2，由谷氨酸与peg4链形成一个连接骨架；谷氨酸的两个羧基端分别各通过一个 peg4链与一个h10偶联，使谷氨酸共偶联两个h10，形成二聚体；谷氨酸的氨基端通过一个 peg4链偶联螯合剂。

4、所述的螯合剂选自hynic、mag3、dota、nota或其衍生物的一种。

5、一种peg4-h10二聚体的合成方法，包括以下步骤：

6、步骤（1）：首先通过固相合成法得到以下树脂结构：

7、ctc-lys(boc)-leu-arg(pbf)-leu-glu(otbu)-trp(boc)-asn(trt)-arg(pbf)-peg4-nh2树脂，该树脂用ctc-rk表示；

8、步骤（2）：将fmoc-glu-oh及与用于活化fmoc-glu-oh中2个羧基的缩合剂与步骤（1）得到的ctc-rk进行二聚反应，得到以下树脂结构：

9、[ctc-lys(boc)-leu-arg(pbf)-leu-glu(otbu)-trp(boc)-asn(trt)-arg(pbf)-peg4-nh]2glu树脂，该树脂用ctc-e(rk)2表示；

10、步骤（3）：二聚反应完毕后，将产物ctc-e(rk)2脱去fmoc基团，采用固相合成法继续偶联fmoc-peg4-丙酸、螯合剂得到以下树脂结构：[ctc-lys(boc)-leu-arg(pbf)-leu-glu(otbu)-trp(boc)-asn(trt)-arg(pbf)-peg4-nh]2glu-peg4-螯合剂树脂，该树脂用ctc-螯合剂-p-e(rk)2表示；

11、步骤（4）：最后对ctc-螯合剂-p-e(rk)2通过多肽的切割获得目标化合物螯合剂-peg4-glu(rk)2。

12、为优化上述技术方案，采取的具体限定还包括：

13、步骤（1）制备ctc-rk的固相合成法为，向ctc-lys(boc)中加入hbtu、dipea及待偶联物，所述待偶联物为保护氨基酸、fmoc-peg4-丙酸，依次进行保护氨基酸、fmoc-peg4-丙酸的偶联，每次偶联均进行脱fmoc处理。

14、所述的保护氨基酸包括fmoc-leu-oh、fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-asn(trt)-oh和fmoc-arg(pbf)-oh，按以上顺序依次偶联保护氨基酸，最后偶联fmoc-peg4-丙酸；ctc-lys(boc)、保护氨基酸或fmoc-peg4-丙酸、hbtu、dipea的反应摩尔比为1.0：3.0：3.0：3.0。

15、步骤（2）制备ctc-e(rk)2的合成方法为，向步骤（1）得到的ctc-rk中加入fmoc-glu-oh、hatu、hoat和dipea进行反应，然后进行脱fmoc处理。

16、步骤（1）中的ctc-lys(boc)与步骤（2）中加入的fmoc-glu-oh、hatu、hoat、dipea的反应摩尔比为1.0：0.5：1.0：1.2：2.0。

17、步骤（3）制备ctc-螯合剂-p-e(rk)2的固相合成法为，向步骤（2）得到的ctc-e(rk)2中加入hatu、hoat、dipea及待偶联物，所述待偶联物为fmoc-peg4-丙酸、螯合剂，依次进行fmoc-peg4-丙酸、螯合剂的偶联，每次偶联均进行脱fmoc处理。

18、步骤（1）中的ctc-lys(boc) 与步骤（3）中加入的fmoc-peg4-丙酸或螯合剂、hatu、hoat、dipea的反应摩尔比为1.0：1.5：1.5：1.8：3.0。

19、步骤（4）中，ctc树脂裂解液采用95%tfa裂解液，配制方法为tfa：tips：h2o=95：2.5：2.5(v/v)混合均匀，冷冻至5±5℃。

20、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

21、本发明提供了一种peg4-h10二聚体，将h10制成peg4-h10二聚体的形式能延长h10的代谢时间。

22、本发明提供了该peg4-h10二聚体合成方法，本发明的合成方法避免了液相合成过程中线性多肽链存在的多个反应位点，克服了线性多肽链从树脂上切除后链端带有羧基的问题，使得较为困难的大分子之间的二聚变得相对容易。

23、本发明的合成路线合成步骤短、反应过程简单且高效，避免了需要进行多次hplc制备提纯的步骤，对设备要求低，降低了原材料成本，产品收率高、纯度高，易于工业化生产。

技术特征：

1.一种peg4-h10二聚体，其特征在于：其结构式为螯合剂-peg4-glu(rk)2，由谷氨酸与peg4链形成一个连接骨架；谷氨酸的两个羧基端分别各通过一个 peg4链与一个h10偶联，使谷氨酸共偶联两个h10，形成二聚体；谷氨酸的氨基端通过一个 peg4链偶联螯合剂。

2.根据权利要求1所述的peg4-h10二聚体，其特征在于：所述的螯合剂选自hynic、mag3、dota、nota或其衍生物的一种 。

3.权利要求1或2所述的peg4-h10二聚体的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的peg4-h10二聚体的合成方法，其特征在于：步骤（1）制备ctc-rk的固相合成法为，向ctc-lys(boc)中加入hbtu、dipea及待偶联物，所述待偶联物为保护氨基酸、fmoc-peg4-丙酸，依次进行保护氨基酸、fmoc-peg4-丙酸的偶联，每次偶联均进行脱fmoc处理。

5.根据权利要求4所述的peg4-h10二聚体的合成方法，其特征在于：所述的保护氨基酸包括fmoc-leu-oh、fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-asn(trt)-oh和fmoc-arg(pbf)-oh，按以上顺序依次偶联保护氨基酸，最后偶联fmoc-peg4-丙酸；ctc-lys(boc)、保护氨基酸或fmoc-peg4-丙酸、hbtu、dipea的反应摩尔比为1.0：3.0：3.0：3.0。

6.根据权利要求4所述的peg4-h10二聚体的合成方法，其特征在于：步骤（2）制备ctc-e(rk)2的合成方法为，向步骤（1）得到的ctc-rk中加入fmoc-glu-oh、hatu、hoat和dipea进行反应，然后进行脱fmoc处理。

7.根据权利要求6所述的peg4-h10二聚体的合成方法，其特征在于：步骤（1）中的ctc-lys(boc)与步骤（2）中加入的fmoc-glu-oh、hatu、hoat、dipea的反应摩尔比为1.0：0.5：1.0：1.2：2.0。

8.根据权利要求4所述的peg4-h10二聚体的合成方法，其特征在于：步骤（3）制备ctc-螯合剂-p-e(rk)2的固相合成法为，向步骤（2）得到的ctc-e(rk)2中加入hatu、hoat、dipea及待偶联物，所述待偶联物为fmoc-peg4-丙酸、螯合剂，依次进行fmoc-peg4-丙酸、螯合剂的偶联，每次偶联均进行脱fmoc处理。

9.根据权利要求8所述的peg4-h10二聚体的合成方法，其特征在于：步骤（1）中的ctc-lys(boc) 与步骤（3）中加入的fmoc-peg4-丙酸或螯合剂、hatu、hoat、dipea的反应摩尔比为1.0：1.5：1.5：1.8：3.0。

10.根据权利要求3所述的peg4-h10二聚体的合成方法，其特征在于：步骤（4）中，ctc树脂裂解液采用95%tfa裂解液，配制方法为tfa：tips：h2o=95：2.5：2.5(v/v)混合均匀，冷冻至5±5℃。

技术总结
本发明公开了一种PEG4‑H10二聚体及其合成方法，其结构式为螯合剂‑PEG4‑Glu(RK)2，由谷氨酸与PEG4链形成一个连接骨架；谷氨酸的两个羧基端分别各通过一个PEG4链与一个H10偶联，使谷氨酸共偶联两个H10，形成二聚体；谷氨酸的氨基端通过一个PEG4链偶联螯合剂。将H10制成PEG4‑H10二聚体的形式能延长H10的代谢时间。本发明的合成路线合成步骤短、反应过程简单且高效，避免了需要进行多次HPLC制备提纯的步骤，对设备要求低，降低了原材料成本，产品收率高、纯度高，易于工业化生产。

技术研发人员：计炜
受保护的技术使用者：南京恒远科技开发有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5