一种抗FMC63的高亲和力兔单克隆抗体及其应用的制作方法

本发明涉及生物，特别涉及一种抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、在当今的医疗领域，car-t细胞治疗是肿瘤治疗的新突破和新希望。cd19是目前car-t细胞治疗领域中应用最广泛的靶点，它是治疗b细胞急性淋巴细胞白血病(b-all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)和b细胞淋巴瘤等肿瘤疾病有效且安全的靶点之一。fmc63抗体是一种针对人cd19的鼠单克隆抗体，它使得car-t细胞治疗更加精准、安全。fda批准上市的两种anti-cd19 car-t细胞药物kymriah和yescarta，证明了fmc63抗体的实用性和价值。基于抗cd19的fmc63抗体，可以通过检测fmc63抗体的表达，来检测和验证相应的car-t细胞疗法的治疗效果。

技术实现思路

1、本发明提供了一种抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体及其应用方法。通过利用兔单b细胞抗体开发技术，获得了3个特异性识别fmc63抗体的抗体，分别命名为6a7、4g3和8d6，可适用于flow cytometry(fcm)方法检测anti-cd19(fmc63)car的表达。这一创新性抗体的出现，为car-t细胞治疗的检测手段提供了更多的选择和可能性。本发明的技术方案具体通过以下技术实现。

2、一种抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体，包括单克隆抗体6a7、单克隆抗体4g3或单克隆抗体8d6；

3、所述单克隆抗体6a7的重链上的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.1-3所示，或者与seq id no.1-3所示的序列具有至少95％的序列一致性；所述单克隆抗体6a7的轻链上的互补决定区cdr1和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.4和seqid no.5所示，或者与seq id no.4-5所示的序列具有至少95％的序列一致性；所述单克隆抗体6a7的轻链上的互补决定区cdr2的氨基酸序列为ras；

4、所述单克隆抗体4g3的重链上的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.10-12所示，或者与seq id no.10-12所示的序列具有至少95％的序列一致性；所述单克隆抗体4g3的轻链上的互补决定区cdr1和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.13和seq id no.14所示，或者与seq id no.13-14所示的序列具有至少95％的序列一致性；所述单克隆抗体4g3的轻链上的互补决定区cdr2的氨基酸序列为aas；

5、所述单克隆抗体8d6的重链上的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.19-21所示，或者与seq id no.19-21所示的序列具有至少95％的序列一致性；所述单克隆抗体8d6的轻链上的互补决定区cdr1和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.22和seq id no.23所示，或者与seq id no.22-23所示的序列具有至少95％的序列一致性，所述单克隆抗体8d6的轻链上的互补决定区cdr2的氨基酸序列为ras。

6、进一步地，所述单克隆抗体6a7的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.6所示，所述单克隆抗体6a7的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。

7、更进一步地，所述单克隆抗体6a7的重链的氨基酸序列如seq id no.8所示，所述单克隆抗体6a7的轻链的氨基酸序列如seq id no.9所示。

8、进一步地，所述单克隆抗体4g3的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.15所示，所述单克隆抗体4g3的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.16所示。

9、更进一步地，所述单克隆抗体4g3的重链的氨基酸序列如seq id no.17所示，所述单克隆抗体4g3的轻链的氨基酸序列如seq id no.18所示。

10、进一步地，所述单克隆抗体8d6的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.24所示，所述单克隆抗体8d6的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.25所示。

11、更进一步地，所述单克隆抗体8d6的重链的氨基酸序列如seq id no.24所示，所述单克隆抗体8d6的轻链的氨基酸序列如seq id no.25所示。

12、本发明还提供了一种物质，所述物质包括以下任意1个方面：

13、(1)一种核酸分子或包含所述核酸分子的载体，所述核酸编码上述任一项所述的高亲和力兔单克隆抗体；

14、(2)一种改造细胞或重组菌株，所述改造细胞或重组菌株用于表达上述任一项所述的高亲和力兔单克隆抗体；

15、(3)一种抗体衍生物，所述抗体衍生物包括上述任一项所述的高亲和力兔单克隆抗体；

16、(4)一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的上述任一项所述的高亲和力兔单克隆抗体，或者所述抗体衍生物；

17、(5)一种检测产品，所述产品包括上述任一项所述的高亲和力兔单克隆抗体，或者所述核酸分子，或者所述载体，或者所述抗体衍生物。

18、本发明还提供了上述抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体的应用用途，所述应用包括以下任意1个方面：

19、(1)用于不以疾病诊断和治疗为目的的检测fmc63抗体的表达；

20、(2)用于不以疾病诊断和治疗为目的的检测用于表达fmc63抗体的car-t细胞的疗效；

21、(3)用于制备检测fmc63抗体表达的产品；或者，用于制备调节fmc63抗体活性的产品；或者，用于制备检测表达fmc63抗体的car-t细胞疗效的产品。

22、进一步地，采用流式检测法检测car-t细胞中fmc63抗体的表达。

23、进一步地，所述产品为检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条、检测探针或检测芯片。

24、本发明提供的抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体，并不限于检测car-t细胞中fmc63抗体的表达。基于其对fmc63的高亲和力，本发明提供的单克隆抗体还可以用于定性/定量检测其他任何环境中的fmc63抗体。与之对应地，可以采用抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体制备检测fmc63抗体表达的产品。

25、还需要指出的是，在本发明提供的上述应用用途中，抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体除了可以检测car-t细胞中fmc63抗体的表达情况以外，还能用于辅助检测、诊断car-t细胞疗法对某些与cd19相关的癌症患病情况或对疗效情况。

26、本发明还提供了一种检测car-t细胞中fmc63抗体表达的产品，所述产品为检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条或检测芯片。

27、与现有技术相比，本发明的有益之处在于：

28、1、本发明针对cd19的car-t细胞疗法中fmc63抗体表达的检测技术，提供了一套抗fmc63的高亲和力单克隆抗体6a7、4g3和8d6。经过检测，单克隆抗体6a7对fmc63抗体结合的亲和常数为7.36e-11，单克隆抗体4g3对fmc63抗体结合的亲和常数为9.45e-11，单克隆抗体8d6对fmc63抗体结合的亲和常数为4.71e-11。这对car-t细胞疗法治疗癌症的疗效诊断具有非常重要的意义。

29、2、本发明采用流式细胞检测法检测anti-cd19(fmc63)转染细胞(即car-t细胞)的fmc63表达情况，能够用于fmc63的高灵敏度检测。

技术特征：

1.一种抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于，包括单克隆抗体6a7、单克隆抗体4g3或单克隆抗体8d6；

2.根据权利要求1所述的抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体6a7的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.6所示，所述单克隆抗体6a7的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示；

3.根据权利要求2所述的抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体6a7的重链的氨基酸序列如seq id no.8所示，所述单克隆抗体6a7的轻链的氨基酸序列如seq id no.9所示；

4.一种物质，其特征在于，所述物质包括以下任意1个方面：

5.权利要求1-3任一项所述的抗fmc63的高亲和力兔单克隆抗体的应用，其特征在于，所述应用包括以下任意1个方面：

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，采用流式细胞检测法检测car-t细胞中fmc63抗体的表达。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述产品为检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条、检测探针或检测芯片。

技术总结
本发明公开了一种抗FMC63的高亲和力兔单克隆抗体及其应用，涉及生物技术领域。本发明利用动物免疫，单个B细胞分选和单克隆抗体纯化筛选，获得3个特异性识别FMC63抗体的高亲和力单克隆抗体，可适用于Flow Cytometry(FCM)方法检测Anti‑CD19(FMC63)CAR的表达。这一创新性抗体的出现，为CAR‑T细胞治疗的检测手段提供了更多的选择和可能性。

技术研发人员：李庆,李洁琼,万定一,鲁亮,秦伏波,张永霞
受保护的技术使用者：武汉佰乐博生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5