脑脊液GZMA蛋白在制备神经梅毒或神经损伤诊断产品中的应用
本发明涉及生物医药，具体涉及脑脊液gzma蛋白及其特异性抗体在制备神经梅毒筛查、分型检测或评估神经受损程度的产品中的应用。
背景技术：
1、神经梅毒是由梅毒螺旋体侵犯神经系统出现脑膜、大脑、血管或脊髓等损害的一组临床综合征，可发生于梅毒病程的各个阶段，并非仅发生在三期梅毒。神经梅毒临床表现多种多样，可无临床症状，也可以表现为神经系统广泛受累而出现复杂临床表现。临床上通常分为5型：无症状型，脑脊膜梅毒，脑膜血管梅毒，脊髓痨和麻痹性痴呆(脑实质梅毒)。隐性梅毒虽然没有临床症状，但其危害性应该引起足够重视，可成为复发性梅毒，并可能向内脏、神经梅毒进展。无症状神经梅毒患者无明显症状或体征，但存在脑脊液异常改变，且脑脊液异常持续5年以上者其发展为有症状神经梅毒的概率高达87％。在一期梅毒和二期梅毒的研究中发现20％的患者存在脑脊液异常，即神经梅毒可以发生在梅毒早期。早期神经梅毒包括梅毒性脑膜炎和血管型梅毒，晚期神经梅毒包括麻痹性痴呆、脊髓痨等。麻痹性痴呆潜伏期为10-15年，麻痹性痴呆主要表现为精神智能减退，如记忆力下降、行为异常、性格改变，严重的患者出现癫痫，卒中样发病，继发偏瘫和失语。
2、神经梅毒的早期诊断非常重要，寻找敏感的生物标志物有助于神经梅毒的诊断，对于预防严重且不可逆转的后遗症具有重要意义。目前诊断神经梅毒主要依赖于脑脊液的检查，包括csf-rpr、csf白细胞计数和蛋白水平。csf-rpr与血浆中快速血浆反应素环状卡片试验相同，该指标阳性即可诊断神经梅毒。神经梅毒的重要参考指标还包括脑脊液细胞计数或蛋白水平，在csf-rpr为阴性结果时，如果出现神经梅毒临床征象、血浆学检测阳性以及脑脊液细胞计数异常，也可以诊断为神经梅毒。神经梅毒患者脑脊液中蛋白质含量升高与病情严重程度呈正相关，与远期预后呈负相关。脑脊液中白细胞增多、蛋白含量升高提示血-脑屏障破坏，颅内存在炎性反应，对神经梅毒的确诊有辅助作用。但是，诊断过程中发现csf-rpp的敏感性仅为30％-70％，敏感性较低，并且对早期无症状神经梅毒的诊断不敏感。目前临床诊疗过程中，主要对出现神经梅毒症状的患者进行神经梅毒诊断和治疗，缺乏灵敏可信、有效区分神经梅毒的脑脊生物学标志物，更加缺乏有效区分无症状神经梅毒和隐性梅毒的生物学标志物。
3、gzma是存在于细胞毒性颗粒中最丰富的蛋白酶，并在体外被报道为主要的毒性介质，但它在神经梅毒诊断中的作用未被报道。
技术实现思路
1、(一)要解决的技术问题
2、鉴于现有csf-rpr诊断方法敏感性较低、对早期无症状神经梅毒的诊断不敏感的技术问题，本发明提供一种用于神经梅毒早期诊断筛查、分型检测和神经损伤评估的脑脊液/血清标志物，利用该标志物可实现神经梅毒早期诊断、筛查、分型检测和神经损伤评估，相较于现有技术敏感性更高，可有效区分无症状神经梅毒和隐性梅毒。
3、(二)技术方案
4、为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：
5、第一方面，本发明涉及gzma作为神经梅毒患者早期诊断、筛查和分型检测的脑脊液标志物。
6、第二方面，本发明提供gzma蛋白或其特异性抗体在制备神经梅毒筛查、分型检测或评估神经受损程度的诊断产品或辅助诊断产品中的应用；其特征在于，所述诊断产品或辅助诊断产品是以gzma蛋白或其特异性抗体为靶分子的检测试剂盒、抗体芯片、抗体探针或检测仪。
7、根据本发明的较佳实施例，所述试剂盒是以gzma蛋白或其特异性抗体作为靶分子，检测gzma蛋白或其特异性抗体在脑脊液中的表达水平。
8、根据本发明的较佳实施例，所述试剂盒为酶联免疫检测试剂盒或免疫组化试剂盒。
9、根据本发明的较佳实施例，所述试剂盒包括：可特异性识别gzma的一抗、多肽染料、磁珠和生物素标记的二抗。优选地，所述试剂盒可包括枸橼酸盐缓冲液、pbs洗涤液、过氧化物酶阻断剂、山羊血清、链霉素抗生素-过氧化物酶、dab溶液和苏木素液。
10、根据本发明的较佳实施例，所述试剂盒还包括从所述患者获脑脊液的试剂或材料。
11、需要说明的是，在检测gzma蛋白表达水平时，也可采用ol ink超高灵敏度脑脊液蛋白检测平台以定量gzma的表达水平。
12、第三方面，本发明还涉及用于神经梅毒患者早期诊断、筛查、分型检测或评估神经受损程度的产品；所述产品能够定量检测患者的离体脑脊液中gzma的浓度；所述产品为检测试剂盒、抗体芯片、抗体探针或检测仪；所述产品包含特异性结合gzma的抗体。
13、优选地，所述产品包含特异性结合gzma的抗体及其他试剂可定量检测gzma蛋白在脑脊液中的浓度。本技术实施例中用到的实验方法是ol ink neurology panel(95801)，其可用于检测92种与神经功能相关的蛋白质生物标志物，其中也包括gzma蛋白。
14、第四方面，本发明涉及用于神经梅毒患者神经损伤风险的评估系统，包括检测模块和判断模块，其中，所述检测模块用于获脑脊液gzma的浓度值；所述判断模块包括存储有判断规则的可读载体；
15、所述判断规则为：当检测模块获得的脑脊液gzma浓度值≥3.782npx值时，判断为中度神经损伤风险；反之，3.658npx＜gzma浓度值＜3.782npx时，则判断为低神经损伤风险；
16、当检测模块获得的脑脊液gzma浓度值≥3.658npx时，判断为有脑脊液感染梅毒风险；反之，则判断为无或较低脑脊液感染梅毒风险。
17、所述参考值为从梅毒患者群中获得gzma的cut-off值；优选地，神经梅毒(包括无症状神经梅毒和有症状神经梅毒)诊断脑脊液cut-off值为3.782npx值(大于等于该值判断为中度神经损伤风险，可判为神经梅毒)；无症状神经梅毒诊断的脑脊液cut-off值为3.658npx(低于该值判断为无或较低脑脊液感染梅毒风险，可判为非神经梅毒)。上述cut-off值是从88名梅毒患者获得的gzma统计学分析临界值。
18、第五方面，本发明还提供一种梅毒检测试剂盒，其包括：用于检测脑脊液gzma蛋白水平的第一检测试剂组合物；和用于检测脑脊液白细胞和/或脑脊液蛋白的第二检测试剂组合物。
19、或者，本发明还提供一种神经梅毒诊断系统，包括：第一指标分析单元和第二分析单元；所述第一分析单元为用于检测脑脊液gzma蛋白水平的抗体芯片或抗体探针；第二分析单元为用于检测脑脊液中白细胞水平或总蛋白水平的检测试剂组合物或分析仪。
20、在上述方案中，在对神经梅毒进行诊断(包括早期诊断、分型分期和神经损伤评估)时，可将脑脊液gzma蛋白水平与神经梅毒患者神经损伤相关的脑脊液白细胞和脑脊液蛋白两个或三个指标结合地用于对神经梅毒进行早期诊断、分型分期和神经损伤评估。
21、其中，脑脊液中gzma水平是通过olink精密蛋白质组学即抗体的免疫分析与定量实时pcr结合方式检测确定。脑脊液白细胞数和脑脊液蛋白量通过已知方法检测即可。
22、(三)有益效果
23、本发明提供了一种新的用于神经梅毒早期诊断筛查、分型检测和神经损伤评估的脑脊液标志物gzma，通过检测患者脑脊液中gzma的表达水平，实现对神经梅毒患者神经损伤程度的量化评估；或者通过检测患者脑脊液中gzma的表达水平，实现对神经梅毒进行诊断，包括早期诊断和分型检测。利用该标志物可实现神经梅毒早期诊断、筛查、分型检测和神经损伤评估，相较于现有技术敏感性更高。在无症状神经梅毒和非神经梅毒中，gzma表达水平有显著差异性；因此，脑脊液标志物gzma适于诊断筛查无症状神经梅毒。
技术特征：
1.gzma作为神经梅毒患者早期诊断、筛查和分型检测的脑脊液标志物。
2.gzma蛋白或其特异性抗体在制备神经梅毒筛查、分型检测或评估神经受损程度的诊断产品或辅助诊断产品中的应用；其特征在于，所述诊断产品或辅助诊断产品是以gzma蛋白或其特异性抗体为靶分子的检测试剂盒、抗体芯片、抗体探针或检测仪。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒是以gzma蛋白或其特异性抗体作为靶分子，检测gzma蛋白或其特异性抗体在脑脊液中的表达水平。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为酶联免疫检测试剂盒或免疫组化试剂盒。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括：可特异性识别gzma的一抗、多肽染料、磁珠和生物素标记的二抗。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括从所述患者获脑脊液的试剂或材料。
7.用于神经梅毒患者早期诊断、筛查、分型检测或评估神经受损程度的产品；其特征在于，所述产品能够定量检测患者的离体脑脊液中gzma的浓度；所述产品为检测试剂盒、抗体芯片、抗体探针或检测仪；所述产品包含特异性结合gzma的抗体。
8.一种梅毒检测试剂盒，其特征在于，包括：用于检测脑脊液gzma蛋白水平的第一检测试剂组合物；和用于检测脑脊液白细胞和/或脑脊液蛋白的第二检测试剂组合物。
9.一种神经梅毒诊断系统，其特征在于，包括：第一指标分析单元和第二分析单元；所述第一分析单元为用于检测脑脊液gzma蛋白水平的抗体芯片或抗体探针；第二分析单元为用于检测脑脊液中白细胞水平或总蛋白水平的检测试剂组合物或分析仪。
10.用于神经梅毒患者神经损伤风险的评估系统，其特征在于，其包括检测模块和判断模块；其中，所述检测模块用于获取脑脊液gzma的浓度值；所述判断模块包括存储有判断规则的可读载体；
技术总结
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及Granzyme A(GZMA)作为神经梅毒患者早期诊断、筛查和分型检测的脑脊液标志物。本发明将脑脊液中GZMA蛋白的浓度作为神经梅毒早期诊断、无症状神经梅毒、神经梅毒与隐性梅毒的分型检测、神经损伤程度评价等的指标，该指标可单独用于或作为主要参考指标与其他指标联合完成神经梅毒的诊断筛查、分型和神经损伤评价。相较于现有技术，GZMA不仅敏感性更高，且能实现对无症状神经梅毒的辅助诊断，更有利于尽早对无症状神经梅毒的诊断及干预。
技术研发人员：杜娟,孔雅娴,许东梅,王芯栎
受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京地坛医院
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5