一种百合花多糖、其制备方法及用途

本发明涉及中草药多糖，具体涉及从卷丹百合花(lilium lancifoliumthunb.)中提取得到的一种多糖，其制备方法，药物组合物和在制备预防和/或治疗肺部疾病，尤其是肺纤维化的药物中的用途。

背景技术：

1、肺纤维化(pulmonary fibrosis，pf)是指成纤维细胞增殖和大量细胞外基质蓄积，伴有炎症损伤和组织结构破坏，可引起呼吸困难、咳嗽、低氧血症，并阻碍气体交换，最终导致呼吸衰竭的一大类肺部疾病。

2、目前造成肺纤维化的病因主要分为：遗传因素、自身免疫病、所从事职业带来的风险，接触到毒素、药物、辐射等。近年来肺纤维化患病人数激增，已经成为影响人类健康的重大公共卫生问题之一。

3、目前临床上仍以糖皮质激素、细胞毒性药物、免疫抑制剂和抗纤维化药物治疗肺纤维化，但这些药物在治疗过程中疗效差、安全性低且毒副作用明显。因此，寻找天然、安全有效的预防或治疗肺纤维化的药物，已经成为当前纤维化领域的研究热点。

4、百合花为百合科植物卷丹(lilium lancifolium thunb.)、百合(lilium brownief.e.brown var.viridulum baker)或细叶百合(lilium pumilum dc.)的花蕾，功能主治为润肺，清火，安神；临床常用于治疗咳嗽，眩晕，夜寐不安，天疱湿疮。

5、在中国，百合一直是被广泛应用的传统药物或膳食资源。百合中含有多糖、皂苷、酚类、生物碱和黄酮类等多种化合物。

6、目前，对于百合植株的研究主要集中在鳞茎，百合鳞茎多糖具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、抗菌等药理作用，但是对于百合花蕾中的多糖研究较少。

技术实现思路

1、本发明采用一种简单有效的多糖提取方法，以卷丹百合花为原料获得了一种多糖。药理实验表明所述多糖可以改善肺成纤维细胞的纤维化表型；体内动物实验结果表明，该多糖可以明显改善博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的肺部损伤和胶原沉积程度，显著降纤维化相关标志物的表达。因此，所述多糖具有潜在的治疗肺纤维化的作用，有望开发成为一种抗肺纤维化的糖类药物。

2、基于此，本发明的一个目的是提供一种百合花多糖。

3、本发明的另一个目的是提供一种上述多糖的制备方法。

4、本发明的另一目的是提供一种包含所述多糖的药物组合物。

5、本发明的另一目的是提供所述多糖或含有所述多糖的药物组合物在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的用途。

6、本发明一方面提供了一种多糖，其结构单元以1→4连接的β-吡喃半乳糖(galp)、1→3连接的β-吡喃半乳糖(galp)、1→4连接的α-吡喃葡萄糖(glcp)、1→6连接的α-吡喃葡萄糖(glcp)、1→2连接的α-吡喃鼠李糖(rhap)以及1→6连接的β-吡喃半乳糖(galp)为主链，具有如下所示的结构：

7、

8、在上述结构式中，n表示聚合度。n为1以上的整数，例如1，2，3，4，5等，但不限于此。

9、在一些实施方式中，所述多糖的重均分子量(mw)为6-50kda，优选为6-40kda，优选为6-30kda，更优选为6-20kda，特别是6-15kda，例如7、8、9、10、11、12、13、14kda。

10、在一些实施方式中，所述多糖的数均分子量(mn)为6-45kda，优选为6-35kda，优选为6-25kda，更优选为6-20kda，特别是6-12kda，例如7、8、9、10、11kda。

11、在一些实施方式中，所述多糖的分子量分布(pdi，mw/mn)为1.01-3，特别是1.01-2，更特别是1.01-1.8，1.01-1.6或1.01-1.5，例如1.1、1.2、1.3、1.40等。

12、由结构式可知，根据本发明的多糖结构单元中包括半乳聚糖结构域和葡聚糖结构域。在一些实施方式中，所述多糖的单糖组成中，阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、鼠李糖以及葡萄糖醛酸的摩尔比为30～40:30～35:10～15:9.8～12:1.7～4.7:1.6～4.6，优选是35～40:30～35:10～14:10～12:2～4:1.7～4.5，特别是38.4：32.8：12.7：10.3：2.6：2.7。

13、在一些实施方式中，所述多糖的单糖组成包括：35-40％的半乳糖，30-35％阿拉伯糖，10-15％的葡萄糖和10-15％木糖。此外，所述多糖的单糖组成中存在1～5％的葡萄糖醛酸和1～5％的鼠李糖。

14、在一些实施方式中，所述多糖具有基本如图1所示的高效液相色谱图。

15、在一些实施方式中，所述多糖的红外图谱中，在3382.42cm-1、2930.67cm-1、1418.60cm-1处有吸收峰，上述吸收峰波数可存在不超过0.5％的偏差；优选地，所述多糖具有基本如图2所示的红外特征图谱。

16、在一些实施方式中，所述多糖的13c nmr谱中，在以下化学位移处有信号峰：δ110.49、δ108.75、δ108.35、δ107.64、δ105.61、δ105.21、δ104.97、δ104.65、δ103.77、δ102.89、δ102.57、δ101.21、δ100.83、δ100.10、δ100.01、δ98.88，上述化学位移可存在不超过±0.5的偏差。优选地，所述多糖具有基本如图3所示的13c-nmr谱图。

17、本发明另一个方面提供了一种制备上述多糖的方法，包括以下步骤：

18、(1)多糖提取：

19、卷丹百合花经沸水提取，透析离心、乙醇醇沉，收集沉淀得到粗多糖；

20、(2)多糖初级纯化：

21、将步骤(1)中制备的粗多糖溶于水后进行固液分离，溶液利用阴离子交换柱依次采用水和0.05～0.4m nacl溶液进行梯度洗脱，收集0.05m nacl溶液的洗脱组分，得到初步纯化的次级粗多糖；

22、(3)多糖二次纯化：

23、将次级粗多糖溶于水后进行固液分离，溶液在凝胶色谱柱上使用0.2m nacl溶液进行洗脱，收集洗脱液得到目标多糖。

24、优选地，步骤(1)还包括，在进行沸水提取前，使用体积分数为90％以上，优选95％以上的乙醇水溶液浸泡卷丹百合花7～14天(例如7天)。

25、优选地，步骤(1)中，沸水提取时，加入15～30倍，优选为20倍重量的水；沸水提取4～8次，优选为6次，每次3～5h，优选为4h。

26、优选地，步骤(1)中，将提取液合并浓缩，透析，再浓缩，离心后进行醇沉。特别地，透析在水中进行24～72h。

27、优选地，步骤(1)中，在醇沉时，加入5～10倍，优选为5倍体积的乙醇。

28、优选地，在步骤(1)中，在醇沉时，所述的乙醇为体积分数为70％以上的乙醇水溶液，优选为体积分数为85％以上的乙醇水溶液，更特别为体积分数为95％以上的乙醇水溶液。

29、优选地，步骤(1)中，沉淀经乙醇与丙酮洗涤3～6次，优选为3次。

30、优选地，步骤(2)中，将粗多糖溶于10～15倍，优选为12.5倍重量的水中。

31、优选地，步骤(2)中，阴离子交换柱为deae sepharosetm fast flow阴离交换柱，依次以去离子水、0.05m、0.1m、0.2m及0.4m nacl溶液进行梯度洗脱。

32、优选地，步骤(3)中，将次级粗多糖溶于约10～30倍，优选为约20倍重量的水中。

33、优选地，步骤(3)中，凝胶色谱柱为sephacryl hr s-200凝胶色谱柱。

34、通过实验证实，本发明的百合多糖能够降低博莱霉素诱导的肺纤维化，包括恢复肺组织形态，降低肺系数，减少动物肺损伤和纤维化表型相关蛋白的表达，并且在体外不影响肝细胞lo2的细胞生长活力，能明显抑制纤维化相关蛋白的表达。因此根据本发明的多糖可成为预防和/或治疗肺纤维化的潜在的糖类药物。

35、因此，本发明另一方面提供一种药物组合物，其包含根据本发明的多糖。所述药物组合物还可以包含药学上可接受的辅料，例如佐剂、稀释剂、崩解剂、表面活性剂、着色剂、染料、甜味剂、风味剂、滑爽剂、包衣剂等，但不限于此。

36、根据需要，本发明的药物组合物还可以包括其他药物活性成分。例如可以包含其他具有预防和/或治疗肺纤维化的组分以增强疗效，或者包含用于治疗其他疾病的药物活性成分以实现多种疾病的联合治疗，但是本发明不限于此。

37、本发明再一方面提供根据本发明的多糖或者药物组合物在制备用于治疗和/或预防肺部疾病的药物中的用途。特别地，所述肺部疾病是肺纤维化。

38、本发明再一方面提供根据本发明的多糖或者药物组合物在制备具有如下任意一种或多种作用的药物中的用途：

39、(1)抑制肺成纤维细胞纤维化进程；

40、(2)减少肺部胶原沉积。

41、本发明再一方面提供一种试剂盒，其包含根据本发明的多糖或者药物组合物。所述试剂盒还可以包含其他成分，例如稀释剂、给药装置、药品说明等。

42、本发明再一方面提供一种抑制肺成纤维细胞纤维化进程的非疾病诊断和治疗方法，所述方法包括向给药对象给予有效量的根据本发明的多糖或者药物组合物。所述方法例如可以用于在体外使用根据本发明的多糖或者药物组合物研究如何抑制肺成纤维细胞纤维化进程，例如使用根据本发明的多糖或者药物组合物作为活性成分，或者作为阳性对照，但不限于此。

43、在上文中已经详细地描述了本发明，但是上述实施方式本质上仅是例示性，且并不欲限制本发明。此外，本文并不受前述现有技术或
技术实现要素：
或以下实施例中所描述的任何理论的限制。

44、在本文中，所有以数值范围或百分比范围形式界定的特征或条件仅是为了简洁及方便。据此，数值范围或百分比范围的描述应视为已涵盖且具体公开所有可能的次级范围及范围内的个别数值。在本文中，在可实现发明目的的前提下，数值应理解成具有该数值有效位数的精确度。举例来说，数字40.0则应理解成涵盖从39.50至40.49的范围。除了在详细描述最后提供的工作实施例之外，本技术文件(包括所附权利要求)中的参数(例如，数量或条件)的所有数值在所有情况下都应被理解为被术语“大约”修饰，不管“大约”是否实际出现在该数值之前。“大约”表示所述的数值允许稍微不精确(在该值上有一些接近精确；大约或合理地接近该值；近似)。如果“大约”提供的不精确性在本领域中没有以这个普通含义来理解，则本文所用的“大约”至少表示可以通过测量和使用这些参数的普通方法产生的变化。例如，“大约”可以包括小于或等于10％，小于或等于5％，小于或等于4％，小于或等于3％，小于或等于2％，小于或等于1％或者小于或等于0.5％的变化，并且在某些方面，小于或等于0.1％的变化。

45、以上描述旨在是说明性的而不是限制性的。例如，上述实施方式(或其一个或更多特征)可以彼此组合使用。例如本领域普通技术人员在阅读上述描述时可以使用其它实施方式。另外，在上述实施方式中，各种特征可以被分组在一起以简化本公开。

技术特征：

1.一种多糖，其结构单元以1→4连接的β-吡喃半乳糖(galp)、1→3连接的β-吡喃半乳糖(galp)、1→4连接的α-吡喃葡萄糖(glcp)、1→6连接的α-吡喃葡萄糖(glcp)、1→2连接的α-吡喃鼠李糖(rhap)以及1→6连接的β-吡喃半乳糖(galp)为主链，具有如下所示的结构：

2.根据权利要求1所述的多糖，其特征在于，

3.根据权利要求1所述的多糖，其特征在于，

4.一种制备多糖的方法，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，

6.一种药物组合物，其包含权利要求1-3任一项所述的多糖或权利要求4或5所述的方法制备得到的多糖作为活性成分；和任选的药学上可接受的辅料。

7.权利要求1-3任一项所述的多糖或权利要求4或5所述的方法制备得到的多糖，或权利要求6所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防肺部疾病，特别是肺纤维化的药物中的用途。

8.权利要求1-3任一项所述的多糖或权利要求4或5所述的方法制备得到的多糖，或权利要求6所述的药物组合物在制备具有如下任意一种或多种作用的药物中的用途：

9.一种试剂盒，其包含权利要求1-3任一项所述的多糖或权利要求4或5所述的方法制备得到的多糖，或权利要求6所述的药物组合物。

10.一种抑制肺成纤维细胞纤维化进程的非疾病诊断和治疗方法，其特征在于，所述方法包括向给药对象给予有效量的权利要求1-3任一项所述的多糖或权利要求4或5所述的方法制备得到的多糖或权利要求6所述的药物组合物。

技术总结
本发明公开了一种百合花多糖、其制备方法及用途。所述多糖的结构单元以1→4连接的β‑吡喃半乳糖(Galp)、1→3连接的β‑吡喃半乳糖(Galp)、1→4连接的α‑吡喃葡萄糖(Glcp)、1→6连接的α‑吡喃葡萄糖(Glcp)、1→2连接的α‑吡喃鼠李糖(Rhap)以及1→6连接的β‑吡喃半乳糖(Galp)为主链，具有缓解肺纤维化的作用，有望成为一种治疗肺纤维化的药物。

技术研发人员：丁侃,吴童,刘仁洁,廖文锋
受保护的技术使用者：中国科学院上海药物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5