一种巨噬细胞靶向递送载体及其制备和应用
本发明涉及一种抗肿瘤药物靶向递送载体及其制备和应用，尤其涉及一种基于巨噬细胞的靶向递送载体及其制备和应用。
背景技术：
1、传统的化疗是目前治疗肿瘤的主要手段之一，但存在毒副作用强，易复发等问题。基于纳米颗粒(np)的载药系统可有效提高药物在肿瘤部位的蓄积以减轻毒副作用，已成为提高癌症治疗效果的一种有效策略。然而，目前已报道的纳米颗粒在临床试验中并不能转化为更好的疗效，因其在血液循环中会迅速被免疫清除，缺乏特异性的靶向肿瘤，而且在肿瘤组织中的扩散也受到限制。因此，需开发高效的主动靶向纳米药物递送系统。利用巨噬细胞(ma)等内源性细胞的肿瘤归巢特性和生物相容性开发的主动靶向给药系统，成为解决肿瘤治疗中传统载药输送系统存在问题的新策略。
技术实现思路
1、发明目的：本发明的目的是提供一种巨噬细胞靶向递送载体，解决如何靶向巨噬细胞递送药物的问题。本发明的另一目的在于提出一种巨噬细胞靶向递送载体的制备方法，解决如何制备巨噬细胞靶向递送载体的问题，本发明的第三目的在于提出一种巨噬细胞靶向递送载体在制备抗肿瘤靶向药物中的应用，解决如何制备抗肿瘤靶向药物的问题。
2、技术方案：本发明所述的一种巨噬细胞靶向递送载体，包括通过酰胺键相互偶联的趋化因子和聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物。
3、优选地，所述趋化因子为mcp-1多肽，所述聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物为泊洛沙姆，所述酰胺键由mcp-1多肽的氨基与泊洛沙姆末端修饰的羧基缩合形成。
4、优选地，所述mcp-1的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述泊洛沙姆为pluronicf127。
5、本发明中的药物传递系统以pluronic f127纳米颗粒为基本结构，其表面进行羧基化，再偶联靶向肽mcp-1，用于后续负载肿瘤化疗药物dox，其有效成分为：pluronicf12786.5％-92％、mcp-1 7-12％、dox 1％-1.5％。
6、为了获得上述巨噬细胞靶向递送载体，本发明提供一种该载体的制备方法，包括如下步骤：
7、(1)对聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物表面进行羧基化处理；
8、(2)溶解羧基化的聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，加入edc/nhs得第一溶液；
9、(3)将趋化因子加入第一溶液中进行偶联反应得第一产物；
10、(4)将第一产物透析后冻干得到巨噬细胞靶向递送载体。
11、优选地，在步骤(1)中，羧基化处理的方法为：将聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺按100:1:1:1的质量比例溶于400ml 1,4-二氧六环中，在25℃下搅拌24h，减压蒸发除去1,4-二氧六环得到剩余物，将所得剩余物加入足量冰乙醚缓慢搅拌，有沉淀生成，过滤收集产生的沉淀并重复洗涤三到五次，得到的白色固体进行干燥，得到羧基化的聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物。
12、优选地，在步骤(2)中，溶解羧基化的聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物的溶剂为超纯水；加入edc/nhs至终浓度为0.001-0.01mol/l，所述第一溶液中聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物的含量为50-70g/l。edc/nhs为edc与nhs的混合物，其中dec与nhs的摩尔比为1:1-3。
13、优选地，在步骤(3)中，所述趋化因子与第一溶液的料液比为0.0001-0.0005g/ml；偶联反应的条件为20-25℃下搅拌反应24-48h；在步骤(4)中，所述透析的方法为将第一产物置于分子量为2000的透析袋中透析24-48h。
14、本发明进一步将上述巨噬细胞靶向递送载体应用在制备抗肿瘤靶向药物中。
15、具体地，应用上述巨噬细胞靶向递送载体制备抗肿瘤靶向药物的方法包括如下步骤：
16、(1)将巨噬细胞靶向递送载体溶解于化疗药物水溶液中得胶束溶液；
17、(2)将胶束溶液透析后得到抗肿瘤靶向药物。
18、优选地，在步骤(1)中，所述化疗药物水溶液为的阿霉素水溶液，胶束溶液中巨噬细胞靶向递送载体的浓度为10-40mg/ml；在步骤(2)中，透析的方法为将胶束溶液转入分子量为500的透析袋中透析24-48h；所述肿瘤包括非小细胞肺癌。
19、在一些实施例中，阿霉素水溶液的浓度为300-700μg/ml。非小细胞肺癌细胞株为nci-h1299。
20、有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
21、(1)本发明提供的抗肿瘤药物合成简单，生物相容性好，能够识别巨噬细胞表面受体并由巨噬细胞靶向递送到肿瘤部位，具有稳定性好，肿瘤微环境响应，靶向肿瘤区域等优点，能够增强等量药物下的肿瘤治疗效果。
22、(2)本发明以nci-h1299为研究对象，评估了dox@mpf127-mcp-1的体外抗肿瘤效果，结果显示dox@mpf127-mcp-1可以被nci-h1299细胞摄取，并具有一定的杀伤作用。
23、(3)在建立的动物实验模型中，dox@mpf127-mcp-1与巨噬细胞相联合，显示出了良好的靶向肿瘤效果，体内ivis实验结果表明巨噬细胞与dox@mpf127-mcp-1在体内能够结合并聚集在肿瘤部位，靶向肿瘤并表现良好的实验结果。
技术特征：
1.一种巨噬细胞靶向递送载体，其特征在于，包括通过酰胺键相互偶联的趋化因子和聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物。
2.根据权利要求1所述巨噬细胞靶向递送载体，其特征在于，所述趋化因子为mcp-1多肽，所述聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物为泊洛沙姆，所述酰胺键由mcp-1多肽的氨基与泊洛沙姆末端修饰的羧基缩合形成。
3.根据权利要求2所述巨噬细胞靶向递送载体，其特征在于，所述mcp-1的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述泊洛沙姆为pluronic f127。
4.根据权利要求1-3任一项所述巨噬细胞靶向递送载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述巨噬细胞靶向递送载体的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，羧基化处理的方法为：将聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺按100:1:1:1的质量比例溶于400ml 1,4-二氧六环中，在25℃下搅拌24h，减压蒸发除去1,4-二氧六环得到剩余物，将所得剩余物加入足量冰乙醚缓慢搅拌，有沉淀生成，过滤收集产生的沉淀并重复洗涤三到五次，得到的白色固体进行干燥，得到羧基化的聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物。
6.根据权利要求4所述巨噬细胞靶向递送载体的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，溶解羧基化的聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物的溶剂为超纯水；加入edc/nhs至终浓度为0.001-0.01mol/l，所述第一溶液中聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物的含量为50-70g/l。
7.根据权利要求4所述巨噬细胞靶向递送载体的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述趋化因子与第一溶液的料液比为0.0001-0.0005g/ml；偶联反应的条件为20-25℃下搅拌反应24-48h；在步骤(4)中，所述透析的方法为将第一产物置于分子量为2000的透析袋中透析24-48h。
8.根据权利要求1-3任一项所述巨噬细胞靶向递送载体在制备抗肿瘤靶向药物中的应用。
9.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，在步骤(1)中，所述化疗药物水溶液为的阿霉素水溶液，胶束溶液中巨噬细胞靶向递送载体的浓度为10-40mg/ml；在步骤(2)中，透析的方法为将胶束溶液转入分子量为500的透析袋中透析24-48h；所述肿瘤包括非小细胞肺癌。
技术总结
本发明公开了一种巨噬细胞靶向递送载体及其制备和应用。包括通过酰胺键相互偶联的趋化因子和聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物。其制备方法为：对聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物表面进行羧基化处理；溶解羧基化的聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，加入EDC/NHS得第一溶液；将趋化因子加入第一溶液中进行偶联反应得第一产物；将第一产物透析后冻干得到巨噬细胞靶向递送载体。该递送载体可应用于制备抗肿瘤靶向药物。本发明提供的抗肿瘤药物合成简单，生物相容性好，能够识别巨噬细胞表面受体并由巨噬细胞靶向递送到肿瘤部位，具有稳定性好，肿瘤微环境响应，靶向肿瘤区域等优点，能够增强等量药物下的肿瘤治疗效果。
技术研发人员：郑蕾,朱龙宝,胡成瑞
受保护的技术使用者：芜湖职业技术学院
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5