维洛沙秦药物中对映异构体的检测方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种维洛沙秦药物中对映异构体的检测方法。

背景技术：

1、维洛沙秦(viloxazine)是一种吗啉衍生物，也是一种选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂，由supernus pharma公司研发，于2022年4月被美国食品和药物管理局(fda)批准用于治疗6岁及以上青少年和成人注意力缺陷多动障碍(adhd)患者，商品名为qelbree，活性成分为盐酸维洛沙秦，药物制剂为缓释胶囊。qelbree是10多年来首个用于治疗儿童和青少年adhd的新型非兴奋剂药物。

2、盐酸维洛沙秦，化学名：(±)-2-[(2-乙氧基苯氧基)甲基]吗啉盐酸盐，是具有两个立体异构体(r-盐酸维洛沙嗪和s-盐酸维洛沙嗪)的外消旋化合物，结构如下：

3、其中“*”标记的碳原子为手性碳。

4、维洛沙秦结构中的两个对映异构体分别是r-构型和s-构型维洛沙秦结构如下：

5、

6、2016年2月，国务院办公厅发布了《关于开展仿制药质量和疗效一致性评价的意见》(国办发〔2016〕8号)，提出了对一致性评价工作的具体意见。仿制药质量一致性评价的内涵是药物治疗等效，包括药学等效和生物等效。药学等效指仿制药与参比制剂的药学性质相似，包括原料和辅料、剂型、处方、工艺、体外实验等研究，生物等效是指在相同条件下仿制药和参比制剂在药物的吸收程度和速度上无统计学差异。

7、制剂处方中的活性成分(active pharmaceutical ingredient，api)，即原料药的质量是源头，如果仿制药所用药物活性成分与参比制剂差异较大时，会导致药效差异，最终导致药物在人体内的生物利用度存在差异。qelbree活性成分是r-构型和s-构型的消旋体。因此，在盐酸维洛沙秦仿制药开发过程中，需要保证仿制药所用活性成分中r-构型和s-构型对映异构体的含量与原研qelbree基本一致。

8、文献1(biomed.chromatogr.2014；28:120–126)公开了一种采用逆流毛细管电泳法表征药物活性对映异构体与高硫酸化β环糊精的相互作用。将适量的nah2po4-2h2o溶解于水中，用1μm naoh调节ph，在ph7.0条件下得到含30mm磷酸盐的bge；在bge中制备200μm外消旋药物溶液，注入电泳系统，采用逆流模式下的完全填充技术(cft)，首次分离出8种精神活性药物的对映体，包括维洛沙秦，其中维洛沙秦对映体分辨率(rs)为0.9～3.0。逆流毛细管电泳法与高效液相色谱法相比在迁移时间的重现性较差，并且操作复杂，分离度较低。

9、文献2(journal of chromatography a.volume 1567,14september 2018,pages111-118)公开了一种采用纤维素三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)固定相在反相条件下对中性和碱性手性化合物的对映体分离能力的研究，采用固定化纤维素三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)柱(chiralart cellulose-sc；3μm,150×4.6mm i.d.；ymc separationtechnology co.,ltd.；tokyo,japan)，以乙酸铵缓冲液(10mm,ph 8)/乙腈/二乙胺(60/40/0.1,v/v/v)三元混合物为流动相，流动相流速1.0ml/min-1，进样量2ul。检测波长为220nm，色谱柱在25℃恒温。其表1显示该方法对维洛沙秦对映异构体的分辨率rs为0，即不能将维洛沙秦中的两个对映异构体分离开。

10、目前尚未有文献报道采用hplc法能够有效分离检测维洛沙秦或其药物制剂中r-构型和s-构型对映异构体。因此，急需要开发一种操作简便，能够准确、有效检测维洛沙秦或其药物制剂中r-构型和s-构型对映异构体的方法，以满足维洛沙秦仿制药开发的需求。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种采用高效液相色谱法检测维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的方法，该方法具有操作简便，分离度好，专属性强，耐用性好等优点。能够满足盐酸维洛沙秦原料药或其制剂中对映异构体含量的检测需求，有效控制产品质量。

2、具体地，本发明提供了一种维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，所述方法包括：

3、采用高效液相色谱法，以表面有直链淀粉-三(3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯)共价键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器；流动相a为碳酸氢铵水溶液，流动相b为乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇或其混合液；以所述流动相a和b的混合液进行洗脱，分离和检测维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体；

4、其中所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的结构分别如下：

5、

6、在一个实施方案中，所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，其中所述流动相a为15～30mm碳酸氢铵水溶液，优选20mm碳酸氢铵的水溶液。

7、在一个实施方案中，所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，其中所述流动相b为乙腈。

8、在一个实施方案中，所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，其中所述洗脱方式可以为等度洗脱，也可以是线性梯度洗脱；其中所述等度洗脱优选流动相a与流动相b的体积比为(50～70)：(30～50)，例如50：50，55：45，60：40，65：35，70：30及其之间的任意值，优选65：35。

9、在另一个实施方案中，所述洗脱方式也可以为线性梯度洗脱，例如梯度洗脱条件为：

10、

11、在本发明的实施方案中，等度洗脱具有分离度更好、操作更方便的优势，因此更优选所述洗脱方式为等度洗脱。

12、在一个实施方案中，本发明所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，其中色谱柱选用硅胶表面共价键合直链淀粉-三(3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯)作为填料的色谱柱，色谱柱规格为：柱长介于150mm～300mm，色谱柱内径介于1mm～10mm，粒径介于3μm～5μm，色谱柱的规格优选为4.6mm*150mm，5μm。优选chiralpak ig系列色谱柱，特别优选，chiralpak ig，规格为4.6×250mm，填料粒径为5μm的色谱柱。

13、在一个实施方案中，所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，其中，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括：

14、流速为0.5～1.0ml/min，优选0.5～0.7ml/min，例如0.5ml/min，0.6ml/min，0.7ml/min及其之间的任意值；优选为0.6ml/min；在本发明所述的技术方案中，在其他色谱条件不变的情况下，流速的调整会影响r-构型和s-构型对映异构体的出峰时间，例如流速为1.0ml/min时相对流速为0.6ml/min时，r-构型和s-构型对映异构体出峰时间均会同步提前，但仍然能够满足分离检测要求；

15、进一步优选，柱温为20～40℃，例如23℃，24℃，25℃，26℃，27℃，30℃，35℃，40℃及其之间的任意值；优选为25℃～40℃；

16、进一步优选，检测波长为190nm～230nm，优选196nm～230nm，例如190nm，196nm，198nm，199nm，200nm，201nm，202nm，203nm，204nm，210nm，220nm，230nm及其之间的任意值，更优选为200nm；

17、进一步优选，进样量为1μl～10μl，例如1μl，2μl，3μl，4μl，5μl，6μl，7μl，8μl，9μl，10μl及其之间的任意值，优选为3～5μl。

18、在本发明的实施方案中，所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，还包括供试品溶液的配制，包括以下步骤：

19、取维洛沙秦原料药或其药物制剂，精密称定，用稀释剂配制而成；

20、任选地，还包括对照品溶液的配制，包括以下步骤：所述对照品为维洛沙秦r-构型和s-构型对映异构体，精密称定对照品，分别用稀释剂配制而成；

21、其中所述稀释剂为流动相，乙腈，甲醇，水中的一种或多种的混合溶液。在一个实施方案中，例如所述稀释剂为流动相，即流动相a和b的混合溶液；在一个实施方案中，所述稀释剂为乙腈，甲醇或者水；在一个实施方案中，所述稀释剂为乙腈和水的混合溶液；在一个实施方案中，所述稀释剂为甲醇和水的混合溶液；在一个实施方案中，所述稀释剂还可以为甲醇，乙腈和水的混合溶液；在另一个实施方案中所述稀释剂为甲醇、乙腈或水中任一种与流动相的混合溶液。当所述稀释剂为甲醇、乙腈、水、流动相中两种或多种的混合溶液时，所述混合溶液中的各组分含量可以是任意的；例如当所述稀释剂为乙腈和水的混合溶液时，其中乙腈和水的体积比可以为任意值，如0.001：99.999至99.999：0.001之间的任意值，例如(0.1～10)：1，(0.5～5)：1，(1～20):1或1：1等。例如当所述稀释剂为甲醇和水的混合溶液时，其中甲醇和水的体积比可以为任意值，如0.001：99.999至99.999：0.001之间的任意值，例如(0.1～10)：1，(0.5～5)：1，(1～20):1或1：1等。在研究过程中发现，由于维洛沙秦药物制剂，特别是维洛沙秦缓释胶囊所含辅料较多，甲醇和水的混合溶液，以及乙腈和水的混合溶液对其溶解性或分散性均更好，同时对维洛沙秦原料药的溶解性也更好，因此，在制备供试品溶液时，更优选甲醇和水的混合溶液，或者乙腈和水的混合溶液；例如甲醇和水体积比为(0.1～10)：1的溶液，优选1：1，乙腈和水体积比为(0.1～10)：1的溶液，优选1：1。

22、进一步优选地，所述供试品溶液的浓度为0.3mg/ml-2mg/ml，更优选0.4mg/ml；

23、进一步优选地，所述维洛沙秦r-构型和s-构型对映异构体对照品溶液的浓度分别为0.3mg/ml-2mg/ml，更优选0.4mg/ml。

24、在一个更具体实施方案中，本发明所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，还包括供试品溶液的配制，任选地，还包括对照品(分别为r-构型和s-构型对映异构体)溶液的配制；

25、进一步，所述供试品溶液的配制包括：取盐酸维洛沙秦约23mg，精密称定，置50ml量瓶中，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml溶液约含维洛沙秦0.4mg。

26、进一步，所述对照品(分别为r-构型和s-构型对映异构体)溶液的配制包括：

27、维洛沙秦r-构型对映异构体溶液的配制：取盐酸维洛沙秦r-构型约23mg，精密称定，置50ml量瓶中，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml溶液约含维洛沙秦r-构型0.4mg。

28、维洛沙秦s-构型对映异构体溶液的配制：取盐酸维洛沙秦s-构型约23mg，精密称定，置50ml量瓶中，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml溶液约含维洛沙秦s-构型0.4mg。

29、在一个实施方案中，本发明所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，还包括：精密量取供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图。

30、本发明所述的检测方法，可通过计算峰面积体积比，或者用外标法按峰面积计算维洛沙秦r-构型和维洛沙秦s-构型的含量或二者的比值；例如对于维洛沙秦原料药和制剂均可以通过峰面积体积比计算两种对映异构体的比值，或者采用外标法按峰面积分别计算维洛沙秦r-构型和维洛沙秦s-构型的含量。

31、在一个实施方案中，本发明所述维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，其中所述维洛沙秦药物包括维洛沙秦原料药，或者维洛沙秦药物制剂；优选地，所述维洛沙秦原料药既可以是维洛沙秦游离碱，也可以是维洛沙秦的可药用盐，如盐酸维洛沙秦；所述维洛沙秦药物制剂优选为维洛沙秦缓释胶囊，特别是与qelbree成分相同或类似的维洛沙秦缓释胶囊。

32、本发明的有益效果是：

33、本发明首次提供了一种采用高效液相色谱法能够有效分离和检测维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的方法，本发明提供的方法用于检测维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体具有系统适用性良好，维洛沙秦r-构型和s-构型对映异构体分离度良好的优点；并且本发明所述方法准确度高，能够满足维洛沙秦药物中两种对映异构体的含量检测。本发明的其他特征及优势效果通过随后的实施例和附图做进一步的阐述和说明。

34、术语定义

35、本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本技术不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术等等)，以本技术为准。

36、应进一步认识到，本发明的某些特征，为清楚可见，在多个独立的实施方案中进行了描述，但也可以在单个实施例中以组合形式提供。反之，本发明的各种特征，为简洁起见，在单个实施方案中进行了描述，但也可以单独或以任意适合的子组合提供。

37、除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。

38、术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。

39、在本发明的上下文中，无论是否使用“大约”或“约”等字眼，所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现10％以下的差异或者本领域人员认为的合理的差异，如1％、2％、3％、4％或5％的差异。

40、本发明上下文中所述“维洛沙秦药物制剂”是指将维洛沙秦原料药与药学上可接受的药用辅料或赋性剂组合后得到的符合《中华人民共和国药品管理法》和/或药典规定的不同给药形式的药品，如维洛沙秦缓释胶囊。本发明所述的维洛沙秦缓释胶囊是指qelbree或与qelbree在成分组成上相同或相似的维洛沙秦药物制剂。

41、本发明上下文中所述的“原料药”与世界卫生组织关于原料药的定义相一致，其中所述“维洛沙秦原料药”具体包括维洛沙秦或其药学可接受的盐，优选在本发明中，所述“维洛沙秦原料药”为维洛沙秦游离碱，或者盐酸维洛沙秦。

42、缩写mm是指毫摩尔每升(0.001mol/l)，例如“20mm碳酸氢铵的水溶液”是指0.02mol/l碳酸氢铵的水溶液。

技术特征：

1.一种维洛沙秦药物中r-构型和s-构型对映异构体的检测方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述流动相a为15～30mm碳酸氢铵的水溶液，优选20mm碳酸氢铵的水溶液。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述流动相b为乙腈。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述洗脱方式为等度洗脱，其中流动相a与流动相b的体积比为(50～70)：(30～50)，优选65：35。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述洗脱方式为线性梯度洗脱，洗脱条件为：

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，色谱柱采用chiralpak ig，4.6×250mm，填料粒径：5μm。

7.根据权利要求1～6任一项所述方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括：

8.根据权利要求1～6任一项所述方法，其特征在于，还包括供试品溶液的配制，包括以下步骤：取维洛沙秦原料药或其药物制剂，精密称定，用稀释剂配制而成；

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述供试品溶液的浓度为0.3mg/ml～2mg/ml，优选0.4mg/ml；

10.根据权利要求1～6任一项所述方法，其特征在于，还包括：精密量取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。

11.根据权利要求1～10任一项所述方法，其特征在于，所述维洛沙秦药物为维洛沙秦原料药，或者维洛沙秦药物制剂。

技术总结
本发明涉及一种维洛沙秦药物中R‑构型和S‑构型对映异构体的检测方法，具体涉及一种采用高效液相色谱法对维洛沙秦药物中R‑构型和S‑构型对映异构体进行检测的方法，所述方法能够实现维洛沙秦药物中R‑构型和S‑构型对映异构体的有效分离和测定，而且峰形对称，分离度高，系统耐用性强，并且该检测方法既适用于维洛沙秦原料药中的对映异构体检测，也适用维洛沙秦药物制剂中维洛沙秦两个对映异构体的检测，有效地解决了维洛沙秦药物中对映异构体分离和测定困难的问题，从而保证了维洛沙秦原料药及其药物制剂的质量可控。

技术研发人员：董达文,熊丽丽,李环,王楠,徐春来,杨艳,许向阳
受保护的技术使用者：苏州恩华生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5