包含抗HER2双特异性抗体的联合治疗药物及其用途的制作方法

本发明涉及生物制药领域，更具体地，涉及一种包含抗her2双特异性抗体的联合治疗药物及其用途，尤其是抗her2双特异性抗体联合多西他赛白蛋白组合物在制备治疗晚期恶性实体瘤的药物中的用途。

背景技术：

1、国际癌症研究机构最新发布的数据显示，2020年全球乳腺癌新发病例高达226万例，取代肺癌，成为全球第一大新发癌症，死亡病例达68.4万例，为女性首位癌症死亡病因。其中，我国乳腺癌新发病例达41.6万，占全球新发病例的18.4％，死亡病例11.7万，占全球乳腺癌死亡的17.1％，且呈逐年上升趋势，严重威胁着我国女性的生命与健康，已成为我国肿瘤防治的重点之一。

2、根据雌激素受体/孕激素受体和人表皮生长因子受体2(her2)表达的不同，乳腺癌被分为不同组织病理亚型。其中，her2阳性约占所有乳腺癌的15～20％，与西方国家相比，中国her2阳性乳腺癌比例更高，为20～30％。her2阳性是一种恶性度更高、发病人群更为年轻化的一种乳腺癌亚型。与激素受体阳性/her2阴性和三阴乳腺癌相比，her2阳性乳腺癌在初诊时有更高比例患者为ⅲ-ⅳ期，组织学分级程度更高，且大多数在初诊时年龄小于65岁。目前，在我国已获得批准用于her2阳性乳腺癌治疗的药物包括曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼、奈拉替尼、吡咯替尼和恩美曲妥珠单抗(t-dm1)，上述药物贯穿her2阳性乳腺癌的治疗全程，包括新辅助治疗、术后辅助治疗及复发转移的系统性治疗。尽管如此，对于复发转移性乳腺癌治疗仍以姑息性挽救治疗为主要目的，有待进一步改善。

3、在中国，约20％的患者在初诊时即为晚期乳腺癌(iii/iv期)。此外，约10％的her2阳性早期受试者会在根治术后3年发生疾病复发。尽管曲妥珠单抗联合帕妥珠单抗和多西他赛一线治疗可显著改善her2阳性转移性乳腺癌患者的pfs和os。然而，大部分受试者在治疗后仍会出现疾病进展，仍需新的更为有效的治疗选择。此外，曲妥珠单抗联合帕妥珠单抗和多西他赛方案需周期性给药直至疾病进展或不耐受，而每周期(3周)帕妥珠单抗需静脉输注30～60分钟(负荷剂量需静脉输注60分钟)、曲妥珠需要输注30～90分钟(负荷剂量需静脉输注90分钟)，且两者给药之间建议观察30～60分钟，长时间反复性静脉输注治疗便利性低，患者在院治疗停留时间长而增加了院内感染风险，同时存在更多的医疗资源占用问题，有待进一步解决。综上所述，her2阳性乳腺癌亟需一种治疗更为有效、安全和便捷的一线治疗选择。

4、多西他赛是由红豆杉的针叶中提取的非细胞毒性前体(10-去乙酰浆果赤霉素ⅲ)半合成生产所得，是紫杉醇类似物，较紫杉醇有更强的抗肿瘤活性。多西他赛水溶性较差，目前市售制剂为其普通注射液，最早由赛诺菲开发，商品名为taxotere常规给药剂量为每3周给药一次，静脉输注1h，剂量为75mg/m2。然而以为代表的多西他赛注射液，由于配方中使用乙醇和吐温80，可能引发严重的过敏反应，需要地塞米松预处理，患者顺应性差；此外，乙醇会影响中枢神经系统，需要降低输液速度来减缓中毒症状。

技术实现思路

1、针对现有技术的缺陷，本发明提供一种治疗癌症的联用药物，其联合一种抗her2双特异性抗体与多西他赛白蛋白组合物，用于治疗her2阳性复发转移性乳腺癌，具有较现有标准治疗方案更优的抗肿瘤疗效，且总体安全性良好，给药更为便捷，可为此类患者提供一种疗效更优、安全性良好且治疗更为便利的一线治疗选择。

2、第一方面，本发明提供一种抗her2抗体与第二治疗剂在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述第二治疗剂为多西他赛白蛋白组合物。

3、第二方面，本发明提供一种抗her2抗体在制备用于增强第二治疗剂治疗癌症的疗效的药物中的用途，其中所述第二治疗剂为多西他赛白蛋白组合物。

4、第三方面，本发明提供一种抗her2抗体与第二治疗剂治疗癌症的方法，其中所述第二治疗剂为多西他赛白蛋白组合物。

5、第四方面，本发明提供一种用于治疗癌症的药物组合物或试剂盒或药盒，包含一种抗her2抗体与第二治疗剂，所述第二治疗剂为多西他赛白蛋白组合物。

6、以上各方面：

7、在一些实施方案中，其中所述抗her2抗体和所述第二治疗剂的组合在治疗癌症中是协同的。

8、在一些实施方案中，所述抗her2抗体为抗her2双特异性抗体。

9、在一些实施方案中，所述抗her2抗体为靶向人her2蛋白不同表位的双特异性抗体。

10、在一些实施方案中，所述抗her2抗体为靶向人her2蛋白不同表位的双特异性抗体，其中her2蛋白不同表位为其结构域ⅱ和结构域ⅳ。

11、在一些实施方案中，所述抗her2抗体为重组人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含两条序列相同的共同轻链。在一些实施方案中，所述共同轻链包含如seqid no:1所示的cdr-l1，如seq id no:2所示的cdr-l2和如seq id no:3所示的cdr-l3。在一些实施方案中，所述共同轻链包含如seq id no:4所示的轻链可变区或其轻链可变区由seqid no:4所示的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，所述共同轻链包含如seq id no:5所示的氨基酸序列或由其组成。

12、在一些实施方案中，所述抗her2抗体的共同轻链为kappa亚型。

13、在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含两条序列不同的重链。在一些实施方案中，所述重链包含靶向her2蛋白结构域ⅱ的重链ⅰ。在一些实施方案中，所述重链ⅰ包含如seq id no:6所示的cdr-h1-1，如seq id no:7所示的cdr-h1-2和如seq id no:8所示的cdr-h1-3。在一些实施方案中，所述重链ⅰ包含如seq id no:9所示的重链ⅰ可变区或重链ⅰ可变区由seq id no:9所示的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，所述重链ⅰ包含如seqid no:10或seq id no:16所示的氨基酸序列或由其组成。

14、在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含两条序列不同的重链。在一些实施方案中，所述重链包含靶向her2蛋白结构域ⅳ的重链ⅱ。在一些实施方案中，所述重链ⅱ包含如seq id no:11所示的cdr-h2-1，如seq id no:12所示的cdr-h2-2和如seq id no:13所示的cdr-h2-3。在一些实施方案中，所述重链ⅱ包含如seq id no:14所示的重链ⅱ可变区或重链ⅱ可变区由seq id no:14所示的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，所述重链ⅱ包含如seq id no:15或seq id no:17所示的氨基酸序列或由其组成。

15、在一些实施方案中，所述重链包含靶向her2蛋白结构域ⅱ的重链ⅰ和靶向her2蛋白结构域ⅳ重链ⅱ，其中重链ⅰ及重链ⅱ如前所述。

16、在一些实施方案中，所述抗her2抗体为江苏康宁杰瑞生物制药有限公司的kn026(以下简称kn026)。

17、在一些实施方案中，所述癌症包括但不限于血液瘤或实体瘤。

18、在一些实施方案中，所述癌症是血液瘤。在一些实施方案中，所述癌症是淋巴瘤或白血病。在一些实施方案中，所述淋巴瘤或白血病包括但不限于骨髓瘤、b-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、非霍奇金b-细胞淋巴瘤、非霍奇金t-细胞淋巴瘤、皮肤淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、惰性非霍奇金淋巴瘤、浆细胞瘤、慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤。在一些实施方案中，以上癌症是复发或难治性的。

19、在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在一些实施方案中，所述实体瘤包括但不限于膀胱癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、胸部肿瘤、子宫内膜癌、食管鳞癌、胃癌、头部肿瘤、胰腺癌、胆管癌、结直肠癌、眼癌、头颈鳞癌、尿路上皮癌、肾癌、肝癌、淋巴结癌、肺癌、口腔癌、颈部肿瘤、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、喉癌和子宫癌、黑色素瘤、皮肤癌、唾液腺癌、软组织肉瘤和骨肉瘤。在一些实施方案中，以上癌症是复发或难治性的。

20、在一些实施方案中，所述癌症选自乳腺癌。

21、在一些实施方案中，所述乳腺癌为her2阳性乳腺癌，优选ihc3+的her2阳性乳腺癌或ihc2+且ish阳性的her2阳性乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌选自激素受体阳性或阴性的her2阳性乳腺癌，优选雌激素受体和孕激素受体均为阴性的her2阳性乳腺癌、雌激素受体和/或孕激素受体为阳性的her2阳性乳腺癌。

22、在一些实施方案中，所述乳腺癌包括：导管癌、小叶癌、髓性癌、胶质性癌、管状癌、炎性乳腺癌、三阴性乳腺癌(tnbc)。

23、在一些实施方案中，所述乳腺癌为复发或转移性乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌选自有内脏转移的乳腺癌或无内脏转移的乳腺癌。

24、在一些实施方案中，所述乳腺癌为复发且转移的乳腺癌。

25、在一些实施方案中，所述乳腺癌为既往未接受过针对复发或转移性乳腺癌的系统性化疗和/或her2靶向治疗的复发或转移性乳腺癌，或者新辅助治疗或辅助治疗或her2靶向治疗结束后12个月以上复发的乳腺癌。所述系统性化疗选自紫杉类化疗药物如多西他赛、白蛋白紫杉醇以及卡培他滨、长春瑞滨等；所述her2靶向治疗选自曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、吡咯替尼、曲妥珠单抗-美坦新偶联物(tdm-1)；所述新辅助治疗方案选自：曲妥珠单抗、紫杉类以及帕妥珠单抗联合或不联合卡铂；蒽环类联合环磷酰胺以及紫杉类、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗；所述辅助治疗方案选自：蒽环类联合环磷酰胺序贯紫杉类联合曲妥珠单抗、帕妥珠单抗；多西他赛联合卡铂联合曲妥珠单抗、帕妥珠单抗；曲妥珠单抗/帕妥珠单抗序贯或不序贯奈拉替尼；tdm-1。

26、在一些实施方案中，其中所述抗her2抗体和所述第二治疗剂是仅有的治疗活性成分。

27、在一些实施方案中，本文所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒还包含第三治疗剂，所述第三治疗剂是化学治疗剂。化学治疗剂是例如，苯达莫司汀、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、氟达拉滨、卡铂、顺铂或其任何组合。

28、在一些实施方案中，本文所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒还包含支持治疗的药物，例如：粒细胞集落刺激因子(g-csf)。

29、在一些实施方案中，所述抗her2抗体和所述第二治疗剂包含在同一个制剂单位中。

30、在一些实施方案中，所述抗her2抗体和所述第二治疗剂分别包含在独立的制剂单位中。

31、在一些实施方案中，本技术所述药物、药物组合物、试剂盒或药盒以临床接受的方式施用于有需要的患者或受试者，优选静脉输注。相应的，所述抗her2抗体和所述第二治疗剂为临床可接受的制剂，优选为注射剂型，包括液体注射剂、注射用粉剂、注射用片剂。

32、在一些实施方案中，将所述抗her2抗体配制成制剂，每个制剂单位，抗her2抗体或其药学上可接受的形式(以抗her2抗体无水物量计)的含量为约0.01mg至约400mg范围内，优选约300-400mg、更优选约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg。

33、在一些实施方案中，所述抗her2抗体以如下剂量施用：约0.01mg/kg-100mg/kg，优选约20-40mg/kg、约20mg/kg-30mg/kg、约25mg/kg-35mg/kg，更优选约30mg/kg。

34、在一些实施方案中，所述抗her2抗体按一个或多个给药周期给药(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个或更多给药周期)。优选，按三个或更多个给药周期给药。在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体的给药周期持续到临床获益丧失为止(例如，确认为疾病进展、耐药、死亡或不可接受的毒性)。

35、在一些实施方案中，所述多西他赛白蛋白组合物配制成制剂，每个制剂单位中，含多西他赛(以无水多西他赛计)50-100mg，优选70-90mg，更优选约80mg。

36、在一些实施方案中，优选地，所述多西他赛白蛋白组合物为注射用粉剂，以无水多西他赛计，含活性成分约50-100mg/支，优选约70-90mg/支，更优选约80mg/支。

37、在一些实施方案中，所述多西他赛白蛋白组合物以如下剂量施用：约60-125mg/m2，优选约60-100mg/m2，更优选约60mg/m2、约75mg/m2或约100mg/m2。

38、在一些实施方案中，所述多西他赛白蛋白组合物按一个或多个给药周期给药(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个或更多给药周期)。优选，按三个或更多个给药周期给药。在本发明一些实施方案中，所述多西他赛白蛋白组合物的给药周期持续到临床获益丧失为止(例如，确认为疾病进展、耐药、死亡或不可接受的毒性)。

39、在本发明一些实施方案中，一个或多个给药周期中每个周期的长度为14天。在本发明一些实施方案中，一个或多个给药周期中每个周期的长度为21天。在本发明一些实施方案中，一个或多个给药周期中每个周期的长度为28天。优选的，一个或多个给药周期中每个周期的长度为21天。

40、在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体和/或多西他赛白蛋白组合以qw(一周一次)、q2w(两周一次)、q3w(三周一次)或q4w(四周一次)的频率施用。

41、在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体和/或多西他赛白蛋白组合物的给药方案为每3周1次(q3w)，21天为一个治疗周期。

42、在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体和/或多西他赛白蛋白组合物的给药方案为每4周1次(q4w)，28天为一个治疗周期。

43、在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体和/或多西他赛白蛋白组合物的给药方案为每2周1次(q2w)，14天或28天为一个治疗周期。

44、在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体和/或多西他赛白蛋白组合物的给药方案为每周1次(qw)，连续给药3周，停一周，28天为一个治疗周期。

45、在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体和/或多西他赛白蛋白组合物的给药方案为每周1次(qw)，连续给药2周，停一周，21天为一个治疗周期。

46、在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体和/或多西他赛白蛋白组合物在每个给药周期的大约第1天(例如，第1、2、3或4天)给药。

47、在本发明一些实施方案中，所述抗her2抗体先于或后于多西他赛白蛋白组合物施用。

48、本技术所述药物、药物组合物、试剂盒或药盒以治疗有效量施用于有需要的患者或受试者，用于治疗乳腺癌。所述乳腺癌如前所述。

49、在一些实施方案中，本技术药物、药物组合物、试剂盒或药盒包含抗her2抗体、多西他赛白蛋白组合物，以治疗有效量施用于有需要的患者或受试者，用于治疗乳腺癌，所述乳腺癌如前所述。

50、在一些实施方案中，所述抗her2抗体每2-4周给药一次，优选每3周给药一次；每周期第1天给药，剂量为约20-40mg/kg，优选约25-35mg/kg，更优选约30mg/kg；首次静脉滴注90min±15min，后续周期静脉滴注60min±15min。在一些实施方案中，所述多西他赛白蛋白组合物每2-4周给药一次，优选每3周给药一次；每周期第1天给药，剂量为约60-125mg/m2，优选约60-100mg/m2，例如约60mg/m2、约75mg/m2或约100mg/m2，静脉滴注60min±10min。

51、在一些实施方案中，所述抗her2抗体每3周给药一次，每周期第1天给药，剂量为约30mg/kg，首次静脉滴注90min±15min，后续周期静脉滴注60min±15min。在一些实施方案中，所述多西他赛白蛋白组合物每3周给药一次，每周期第1天给药，剂量为约60mg/m2、约75mg/m2或约100mg/m2，静脉滴注60min±10min。

52、在一些实施方案中，本技术所述的多西他赛白蛋白组合物参照wo2022184164a1公开的方法制备得到。研究显示不论是冻干前悬浮液，还是冻干后重建悬浮液，在室温条件下可稳定至少24小时，冷藏条件下可稳定至少10天，不会出现悬浮液浑浊或纳米粒沉降。相对于市售白蛋白结合型药物重建悬浮液仅稳定8h的情况相比，该产品大大减轻了临床使用限制。

53、本技术所述的多西他赛白蛋白组合物为多西他赛白蛋白纳米粒组合物，包含多西他赛和酸变性白蛋白，任选地包含渗透压调节剂和/或ph调节剂。所述酸变性白蛋白由人血白蛋白加酸调至适当的ph值后变性得到。优选地：

54、(1)所述酸选自酸性氨基酸或酸性多肽、有机酸、无机酸。所述酸性氨基酸或酸性多肽包括但不仅限于盐酸半胱氨酸、谷胱甘肽等；所述有机酸包括但不仅限于柠檬酸、酒石酸等；所述无机酸包括但不仅限于盐酸、硫酸等。所述酸优选盐酸半胱氨酸、谷胱甘肽、盐酸，更优选盐酸半胱氨酸；和/或

55、(2)所述适当的ph值优选约3.5～5.5，优选约3.5～5.0，更优选约3.8-4.7，更优选约4.0～4.5；和/或

56、(3)以无水多西他赛计，多西他赛和人血白蛋白的质量比为1:(2.0～10.0)，优选1:(3.0～7.0)，更优选1：(4.0～6.0)；最优选，约1：4.5；和/或

57、(4)所述人血白蛋白中辛酸钠的含量不高于0.08mmol/g蛋白，优选0.03-0.08mmol/g蛋白，进一步优选0.04-0.08mmol/g蛋白，更优选0.04-0.07mmol/g蛋白。

58、在一些实施方案中，所述多西他赛白蛋白纳米粒的粒径为约60-200nm，优选约90-150nm，更优选约90-135nm。

59、所述渗透压调节剂的类型不受特别限制，例如可选自氯化钠、葡萄糖、磷酸盐或枸橼酸盐等，优选氯化钠。在一些实施方案中，所述渗透压调节剂为氯化钠，氯化钠与多西他赛的重量比为(0.75-9):1，优选(1-7):1，优选(1.5-4.5):1，最优选约2.25:1。

60、所述ph调节剂的种类不受特别的限制，用于将ph值调节在适当的范围内。优选地，所述ph值范围为3.4-5.8；优选3.6-5.6、或者3.8-5.0、更优选3.9-4.8、最优选约4.1。

61、本技术所述多西他赛白蛋白组合物对多西他赛是否为水合物形式无特殊要求，可选自无水型多西他赛、多西他赛半水合物或多西他赛三水合物中的任一种；优选地，所述多西他赛选自无水型多西他赛。本技术所述的多西他赛，其含量均以无水多西他赛计。

62、本技术所述的药物，包含多西他赛白蛋白组合物。所述药物为临床可接受的剂型，优选注射剂，进一步优选液体注射剂或冻干粉针剂。例如具体实施方式中使用的注射用多西他赛(白蛋白结合型)，也称为dtx-hsa。

63、在一些实施方案中，所述药物为液体注射剂，所述液体注射剂的ph值为3.4-5.8，优选3.6-5.6，或者3.8-5.0，更优选3.9-4.8。所述液体注射剂中多西他赛白蛋白纳米粒的粒径约60-200nm，优选约90-150nm，更优选约90-135nm；所述液体注射剂含氯化钠0-1.8％(w/v)，优选0.45％-1.8％(w/v)，更优选0.9％-1.8％(w/v)，更优选0.9％(w/v)。在一些实施方案中，所述液体注射剂含多西他赛2-10mg/ml，优选2-8mg/ml。

64、在一些实施方案中，所述药物为冻干粉针剂，所述冻干粉针剂含氯化钠，氯化钠：多西他赛的重量比为(0.75-9):1，优选(1-7)：1；优选(1.5-4.5):1，最优选约2.25:1。多西他赛白蛋白纳米粒的粒径约60-200nm，优选约90-150nm，更优选约90-135nm。制备所述冻干粉针剂的悬浮液在冻干前的ph为3.4-5.8，优选3.6-5.6，或者3.8-5.0，更优选3.9-4.8，最优选约4.1。

65、所述冻干粉针剂在使用前使用复溶介质重建悬浮液。所述复溶介质选自注射用水、氯化钠溶液或葡萄糖溶液，优选注射用水。所得重建悬浮液的ph值为3.4-5.8，优选3.6-5.6，或者3.8-5.0，更优选3.9-4.8。重建悬浮液中多西他赛白蛋白纳米粒的粒径约60-200nm，优选约90-150nm，更优选约90-135nm。所述重建悬浮液含0-1.8％(w/v)氯化钠，优选0.45％-1.8％(w/v)，更优选0.9％-1.8％(w/v)，更优选0.9％。在一些实施方案中，所述重建悬浮液含多西他赛2-10mg/ml，优选2-8mg/ml。

66、本技术所述的多西他赛白蛋白组合物的制备方法含有如下步骤：

67、(1)多西他赛溶解于有机溶剂中，溶解后得到有机相溶液；

68、(2)取人血白蛋白溶液，加酸调节ph值，得酸变性白蛋白水相溶液；另取一种盐溶液；

69、(3)将有机相溶液、水相溶液及盐溶液混合载药，得到载药液；

70、(4)透析，得到透析后悬浮液。

71、其中，步骤(2)在加酸调节ph值前，任选地包含用注射用水稀释人血白蛋白溶液得白蛋白稀释液的步骤。

72、其中，步骤(2)在加酸调节ph值后，任选地包含孵育步骤。

73、其中，步骤(3)在混合载药后，任选地包含降温步骤。

74、其中，步骤(4)在透析前，任选地包含，将步骤(3)所得载药液浓缩得到浓缩液。

75、其中，步骤(4)透析后，任选地包含浓缩或稀释步骤，以调节透析后悬浮液中多西他赛的浓度。

76、其中，步骤(4)后任选地含有步骤(5)除菌过滤。

77、其中，步骤(5)后任选地含有步骤(6)冻干。

78、其中，步骤(1)中所述多西他赛为任意形式，优选为无水型多西他赛、多西他赛半水合物或多西他赛三水合物。以无水多西他赛计，多西他赛和人血白蛋白的质量比为1：(2.0～10.0)，优选1:(3.0～7.0)，更优选1:(4.0～6.0)，最优选约1：4.5)。

79、其中，步骤(1)中所述有机溶剂选自可与水互溶的溶剂，例如乙醇、甲醇、丙酮、dmso等，优选乙醇。以无水多西他赛计，所述有机相溶液含多西他赛45-90mg/ml，优选45-70mg/ml。

80、其中，步骤(2)中所述人血白蛋白溶液中辛酸钠的含量为不高于0.12mmol/g蛋白，优选不高于0.08mmol/g蛋白，优选0.045-0.08mmol/g蛋白。

81、其中，步骤(2)中，白蛋白稀释液含白蛋白6-25mg/ml，优选10-20mg/ml，更优选12-18mg/ml，更优选约15mg/ml。

82、其中，步骤(2)中，所述酸选自酸性氨基酸或酸性多肽、有机酸、无机酸。所述酸性氨基酸或酸性多肽包括但不仅限于盐酸半胱氨酸、谷胱甘肽等；所述有机酸包括但不仅限于柠檬酸、酒石酸等；所述无机酸包括但不仅限于盐酸、硫酸等。所述酸优选盐酸半胱氨酸、谷胱甘肽、盐酸，更优选盐酸半胱氨酸。所述ph值优选3.5～5.5，优选3.5～5.0，更优选3.8-4.7，更优选4.0～4.5，最优选约4.1。

83、其中，步骤(2)中，所述孵育是指在加酸调节ph值后，升温至35℃-42℃，优选38℃-42℃；孵育30min以上，优选30min-60min。

84、其中，步骤(2)中所述的盐溶液选自氯化钠、氯化钾、硫酸钠或硫酸镁的水溶液，优选氯化钠的水溶液；盐溶液浓度不低于2％，优选2％～35％，更优选10％～20％。

85、其中，步骤(3)中，载药条件为将有机相溶液、水相溶液升温至35℃-42℃，优选38℃-42℃，将三者混合载药。

86、其中，步骤(3)中所述降温，指降温至低于室温，优选0-20℃，更优选7-15℃。

87、其中，步骤(4)中所述浓缩液含多西他赛约4-10mg/ml，优选6-10mg/ml，更优选7-9mg/ml，更优选8mg/ml。

88、其中，步骤(4)透析以去除多余的小分子化合物，对于透析液的种类和用量、透析膜的截留分子量没有特别限制，本领域技术人员可以根据普通技术知识或经验作出选择。为方便进一步制剂和临床使用，透析液优选临床可接受的渗透压调节剂的水溶液，例如氯化钠、葡萄糖、磷酸盐或枸橼酸盐的水溶液。在一些实施方案中，步骤(4)中使用氯化钠溶液作为透析液进行透析。透析膜的截留分子量为10-50kda，优选10-30kda，更优选10kda或者30kda。透析液体积不低于载药液或浓缩液的3倍，优选3-10倍，更优选3-6倍。所述氯化钠溶液的浓度不高于1.8％(w/v)，优选0.45％-1.8％(w/v)，更优选0.9％-1.8％(w/v)。

89、在一些实施方案中，步骤(2)使用的人血白蛋白溶液，需事先调整所含辛酸钠的含量。本领域技术人员可以根据普通技术知识或经验选取适宜的方法调节人血白蛋白溶液中辛酸钠的含量，包括但不仅限于透析。

90、在一些实施方案中，调节人血白蛋白溶液中辛酸钠的含量的方法为：取市售的人血白蛋白溶液，用注射用水或者生理盐水稀释，得到稀释的白蛋白溶液；用注射用水或者生理盐水作为透析液对稀释的白蛋白溶液进行透析，以部分去除辛酸钠，得到低辛酸钠含量的人血白蛋白溶液。

91、在一些实施方案中，人血白蛋白溶液的稀释倍数不低于4倍，优选4-7倍。所述透析，透析膜的截留分子量为10-50kda，优选10-30kda，更优选10kda或者30kda。透析液的体积是本领域技术人员根据需要的辛酸钠含量通过常规试验可以确定的。优选的，透析液的体积约为稀释的白蛋白溶液的体积的3倍以上，优选3-10倍，更优选3-6倍。

92、所述低辛酸钠含量的人血白蛋白溶液含辛酸钠低于0.16mmol/g蛋白，优选低于0.12mmol/g蛋白，优选低于0.10mmol/g蛋白，优选低于0.08mmol/g蛋白。所述低辛酸钠含量的人血白蛋白溶液可以直接用于制备本技术所述的多西他赛白蛋白纳米粒组合物，也可与其它辛酸钠含量的人血白蛋白溶液按比例混合得到期望含量后，再用于制备多西他赛白蛋白纳米粒组合物。

93、在所述制备方法中，透析步骤将去除载药液或浓缩液中多余的小分子化合物。例如，在一些实施方案中，步骤(2)使用酸性氨基酸或酸性多肽调节ph来制备酸变性白蛋白；透析步骤基本去除了多余的酸性氨基酸或酸性多肽；所述组合物几乎不含有游离的酸性氨基酸或酸性多肽。所述“几乎不含有游离的酸性氨基酸或酸性多肽”是指游离的酸性氨基酸或酸性多肽在组合物中的含量低于多西他赛的0.25％(w/w)。例如，在一些实施方案中，使用盐酸半胱氨酸或谷胱甘肽调节ph以制备酸变性白蛋白，所述组合物中游离的半胱氨酸或谷胱甘肽的含量低于多西他赛的0.25％(w/w)。

94、本发明相关序列如下：

95、cdr-l1(kabat)rasqdvntava(seq id no:1)

96、cdr-l2(kabat)sasflys(seq id no:2)

97、cdr-l3(kabat)qqhyttppt(seq id no:3)

98、vl

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108、cdr-h1-1(kabat)dytmd(seq id no:6)

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147、hc2’

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149、ptngytryadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycsrwggdg

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151、pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhk

152、psntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpev

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155、qvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seq id no:17)

156、应理解，在本技术范围内中，本技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

技术特征：

1.一种抗her2抗体与第二治疗剂在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述第二治疗剂为多西他赛白蛋白组合物。

2.一种抗her2抗体在制备用于增强第二治疗剂治疗癌症的疗效的药物中的用途，其中所述第二治疗剂为多西他赛白蛋白组合物。

3.一种抗her2抗体与第二治疗剂治疗癌症的方法，其中所述第二治疗剂为多西他赛白蛋白组合物。

4.一种用于治疗癌症的药物组合物或试剂盒或药盒，包含一种抗her2抗体与第二治疗剂，所述第二治疗剂为多西他赛白蛋白组合物。

5.如权利要求1-4任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述抗her2抗体为抗her2双特异性抗体；优选地，所述抗her2抗体为靶向人her2蛋白不同表位的双特异性抗体；更优选地，其中her2蛋白不同表位为其结构域ⅱ和结构域ⅳ。

6.如权利要求1-5任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述抗her2抗体包含两条序列相同的共同轻链；优选地，所述共同轻链包含如seq id no:1所示的cdr-l1，如seq id no:2所示的cdr-l2和如seq id no:3所示的cdr-l3；更优选地，所述共同轻链包含如seq id no:4所示的轻链可变区；进一步优选地，所述共同轻链包含如seq id no:5所示的氨基酸序列。

7.如权利要求1-6任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述抗her2抗体包含两条序列不同的重链；优选地，所述重链包含靶向her2蛋白结构域ⅱ的重链ⅰ，和/或靶向her2蛋白结构域ⅳ重链ⅱ。

8.如权利要求7所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述重链ⅰ包含如seqid no:6所示的cdr-h1-1，如seq id no:7所示的cdr-h1-2和如seq id no:8所示的cdr-h1-3；优选地，所述重链ⅰ包含如seq id no:9所示的重链ⅰ可变区；更优选地，所述重链ⅰ包含如seq id no:10或seq id no:16所示的氨基酸序列；和/或，

9.如权利要求1-8任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述多西他赛白蛋白组合物包含多西他赛和酸变性白蛋白；优选地，所述多西他赛选自无水型多西他赛；更优选地，所述多西他赛和所述白蛋白的重量比为1:(4.0～6.0)。

10.如权利要求9所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述酸变性白蛋白由人血白蛋白加酸调至适当的ph值后变性得到；优选地，所述酸为盐酸半胱氨酸；优选地，所述ph值约为4.1。

11.如权利要求1-10任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述多西他赛白蛋白组合物进一步包含渗透压调节剂、辛酸钠；优选地，所述渗透压调节剂为氯化钠；更优选地，所述氯化钠与所述多西他赛的重量比约为2.25:1；优选地，所述辛酸钠含量低于0.16mmol/g蛋白；更优选地，所述辛酸钠含量低于0.08mmol/g蛋白。

12.如权利要求1-11任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述癌症包括但不限于血液瘤或实体瘤。

13.如权利要求12所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述血液瘤为淋巴瘤或白血病，包括但不限于骨髓瘤、b-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、非霍奇金b-细胞淋巴瘤、非霍奇金t-细胞淋巴瘤、皮肤淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、惰性非霍奇金淋巴瘤、浆细胞瘤、慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤；所述实体瘤包括但不限于膀胱癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、胸部肿瘤、子宫内膜癌、食管鳞癌、胃癌、头部肿瘤、胰腺癌、胆管癌、结直肠癌、眼癌、头颈鳞癌、尿路上皮癌、肾癌、肝癌、淋巴结癌、肺癌、口腔癌、颈部肿瘤、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、喉癌和子宫癌、黑色素瘤、皮肤癌、唾液腺癌、软组织肉瘤和骨肉瘤。

14.如权利要求12所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述实体瘤为乳腺癌；优选地，所述乳腺癌为her2阳性乳腺癌；更优选地，所述乳腺癌为her2阳性复发和/或转移性乳腺癌。

15.如权利要求1-14任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述抗her2抗体和所述第二治疗剂包含在同一个制剂单位中，或分别包含在独立的制剂单位中。

16.如权利要求1-15任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述多西他赛白蛋白组合物配制成制剂，每个制剂单位中，含多西他赛(以无水多西他赛计)50-100mg，优选70-90mg，更优选约80mg；和/或，所述抗her2抗体配制成制剂，每个制剂单位中，所述抗her2抗体或其药学上可接受的形式(以抗her2抗体无水物量计)的含量为约0.01mg至约400mg范围内，优选300-400mg、更优选约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg。

17.如权利要求1-16任一项所述的用途、方法、药物组合物或试剂盒或药盒，所述多西他赛白蛋白组合物以如下剂量施用：60-125mg/m2，优选60-100mg/m2，更优选约60mg/m2、约75mg/m2或约100mg/m2；和/或，所述抗her2抗体以如下剂量施用：0.01mg/kg-100mg/kg，优选20-40mg/kg、20mg/kg-30mg/kg、25mg/kg-35mg/kg，更优选约30mg/kg。

技术总结
本发明涉及生物制药领域，更具体地，涉及一种包含抗HER2双特异性抗体的联合治疗药物及其用途，尤其是抗HER2双特异性抗体联合多西他赛白蛋白组合物在制备治疗晚期恶性实体瘤的药物中的用途。

技术研发人员：黄薇,向思龙,佘凤林,赵玉青,张晓君,王彩霞,吴国华
受保护的技术使用者：上海津曼特生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5